一种绝对定量油中甘油酯类成分的方法技术

本发明专利技术提供了一种绝对定量油中甘油酯类成分的方法，该方法如下：LC-APCI/MS表征技术对样品油溶液中的甘油酯类成分定性并获得理论摩尔分子量；利用靶向收集策略收集样品油中各个甘油酯类成分；用无标准品评价回收率策略对靶向收集策略收集的样品油中的各个甘油酯类成分进行回收率计算，得到回收率数值；利用改良的甘油三酯试剂盒和甘油或单个甘油酯标准品水解、测定各甘油酯类成分的摩尔含量，通过等摩尔换算法换算甘油的含量绝对定量样品油中各个甘油酯类成分的质量百分含量。本发明专利技术能够仅利用甘油或单个甘油酯标准品来绝对定量油中的甘油酯类成分。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了，该方法如下：LC-APCI/MS表征技术对样品油溶液中的甘油酯类成分定性并获得理论摩尔分子量；利用靶向收集策略收集样品油中各个甘油酯类成分；用无标准品评价回收率策略对靶向收集策略收集的样品油中的各个甘油酯类成分进行回收率计算，得到回收率数值；利用改良的甘油三酯试剂盒和甘油或单个甘油酯标准品水解、测定各甘油酯类成分的摩尔含量，通过等摩尔换算法换算甘油的含量绝对定量样品油中各个甘油酯类成分的质量百分含量。本专利技术能够仅利用甘油或单个甘油酯标准品来绝对定量油中的甘油酯类成分。【专利说明】
本专利技术涉及一种基于酶水解绝对定量油中甘油酯类成分的方法，属于食品药品中油类成分的质量控制
。
技术介绍
甘油酯类成分主要分布在脂肪、油和奶制品中，它是由一个甘油分子与I?3个脂肪酸分子缩合而成，对生物体内的脂类代谢具有调节作用，同时对于辅助免疫系统发挥免疫功能的肠道微生物群落也有调节作用。但是，如果体内甘油酯类成分过量，或者甘油酯类成分过分吸收、异常代谢、排泄缓慢，则会导致人体出现动脉粥样硬化、高血脂和肥胖等疾病。植物油中的主要成分为甘油酯类成分，这些成分都具有很好的抗肿瘤效果，因此就需要控制甘油酯类成分的含量，使其既能够发挥抗肿瘤效果又不会过量引起副作用。但是由于甘油酯类成分难以分离获得，因而迫切需要开发来对油进行质量控制。现有技术中，高效液相色谱-示差折光检测法是脂肪和食用油法定标准的检测方法，在过去的几十年里，二维气相色谱、同位素标记质谱、酶联甘油三酯检测和柱后反应检测方法已经被用于植物油中甘油酯类成分的测定，然而以上方法高度依赖甘油酯类成分的标准品，而甘油酯类标准品极难获得且品种和数量非常有限，如何在没有标准品或少用标准品的情况下绝对定量油中甘油酯类成分目前存在困难。现有技术中，由于脂肪酶可以高效水解甘油酯类成分，例如甘油三酯、甘油二酯和甘油一酯，所以目前普遍应用商品化的甘油三酯试剂盒能高效检测生物样品中的甘油酯类成分，尤其是血液和组织样品。但是，目前商品化或改良的甘油三酯试剂盒没有应用在油样品中甘油酯类成分的绝对定量。
技术实现思路
鉴于上述现有技术存在的缺陷，本专利技术的目的是提出，能够在不用或少用对照品的情况下绝对定量油中的甘油酯类成分。本专利技术通过以下技术方案得以实现:，该方法包括如下步骤:用LC-APCI/MS表征技术对样品油溶液中的甘油酯类成分定性并获得理论摩尔分子量;利用靶向收集策略收集样品油中各个甘油酯类成分；用无标准品评价回收率策略对靶向收集策略收集的样品油中的各个甘油酯类成分进行回收率计算，得到回收率数值；利用改良的甘油三酯试剂盒和甘油或单个甘油酯标准品水解、测定各甘油酯类成分的摩尔含量，通过等摩尔换算法换算甘油的含量绝对定量样品油中各个甘油酯类成分的质量百分含量。上述的绝对定量油中甘油酯类成分的方法中，优选的，所述用LC-APCI/MS表征技术对样品油溶液中的甘油酯类成分定性并获得理论摩尔分子量的方法如下:步骤一，调整色谱条件，使各个甘油脂类成分实现色谱分离；步骤二，液相色谱-大气压化学电离质谱联用，对各个甘油脂类成分定性，获得理论摩尔分子量。上述的绝对定量油中甘油酯类成分的方法中，优选的，所述的靶向收集策略收集样品油中各个甘油酯类成分的方法如下:(I)样品油经过合适的前处理，用溶剂定量溶解样品油，得到样品油溶液，在优化的色谱条件下，各成分实现基线分离，便于后续的各甘油酯类成分的含量检测分析；(2)靶向收集策略可依赖ELSD、MS、紫外检测器，在优化的检测器条件下，便于各甘油酯类成分祀向收集；(3)合适浓度的油样品，在优化的色谱和检测器条件下，连续进样五次，分别统计各甘油酯类成分的保留时间和峰面积的差异，判断分析系统的稳定性和重复性；(4) 靶向收集策略:运用优化的色谱和检测器条件下，各甘油酯类成分实现基线分离，用聚乙烯管分别收集各甘油酯类成分，在常温下用氮气吹干所收集样品，用于样品化合物含量测定和回收率评价。上述的绝对定量油中甘油酯类成分的方法中，优选的，所述的用无标准品评价回收率策略对靶向收集策略收集的样品油中的各个甘油酯类成分进行回收率计算，其方法如下:步骤一，配制样品油溶液，将样品油溶液用溶剂逐步稀释成系列浓度的多个浓度的样品；步骤二，将步骤一所得的多个浓度的样品进入液相色谱仪进行色谱分析，色谱条件选用靶向收集策略收集样品油中各个甘油酯类成分时所用的色谱条件和检测器，根据分析结果，根据色谱峰面积及浓度的对数计算样品中各个甘油酯类成分的标准曲线；步骤三，靶向收集策略收集的样品油中的各个甘油酯类成分常温下用氮气吹干后用溶剂复溶，分别进入液相色谱仪进行色谱分析，色谱条件选用靶向收集策略收集样品油中各个甘油酯类成分时所用的色谱条件和检测器，得到各个甘油酯类成分的色谱峰面积(Ad)；步骤四，收集回收率计算:采用公式【权利要求】1.，该方法包括如下步骤: 用LC-APCI/MS表征技术对样品油溶液中的甘油酯类成分定性并获得理论摩尔分子量; 利用靶向收集策略收集样品油中各个甘油酯类成分； 用无标准品评价回收率策略对靶向收集策略收集的样品油中的各个甘油酯类成分进行回收率计算，得到回收率数值； 利用改良的商品化甘油三酯试剂盒和甘油或单个甘油酯标准品来水解、测定各甘油酯类成分的摩尔含量，通过等摩尔换算法换算甘油的含量绝对定量样品油中各个甘油酯类成分的质量百分含量。2.根据权利要求1所述的绝对定量油中甘油酯类成分的方法，其特征在于:所述的用无标准品评价回收率策略对靶向收集策略收集的样品油中的各个甘油酯类成分进行回收率计算，其方法如下: 步骤一，配制样品油溶液，将样品油溶液用溶剂逐步稀释成系列浓度的多个浓度样品; 步骤二，将步骤一所得的多个浓度的样品进入液相色谱仪进行色谱分析，色谱条件选用靶向收集策略收集样品油中各个甘油酯类成分时所用的色谱条件和检测器，根据分析结果，根据色谱峰面积及浓度的对数计算样品中各个甘油酯类成分的标准曲线； 步骤三，靶向收集策略收`集的样品油中的各个甘油酯类成分常温下用氮气吹干后用溶剂复溶，分别进入液相色谱仪进行色谱分析，色谱条件选用靶向收集策略收集样品油中各个甘油酯类成分时所用的色谱条件和检测器，得到各个甘油酯类成分的色谱峰面积；步骤四，计算回收率，得到回收率值: 当选用检测器为MS和/或紫外检测器时，计算回收率所采用的公式为:Λ — fi R = -- X Cl— ) XIOO /q kCaΛ? t/* 当选用检测器为ELSD检测器时，计算回收率所采用的公式为: ? InJrf 1ΛΛη/ R =-xl 00% In Aq — k In η, * 其中，R是回收率、η是稀释倍数、Ad是靶向收集策略收集的样品油中的各个甘油酯类成分的色谱峰面积、A0是靶向收集策略收集的样品油中的各个甘油酯类成分的理论响应峰面积、k是样品油中各甘油酯类成分的标准曲线斜率、Ctl为靶向收集策略进样的样品油溶液的浓度；当选用MS检测器时，AtnAci分别表示靶向收集策略收集的样品油中的各个甘油酯类成分的检测峰面积和理论响应峰面积分别相对一定浓度内标响应峰面积的比值。3.根据权利要求1所述的绝对定量油中甘油酯类成分的方法，其特本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种绝对定量油中甘油酯类成分的方法，该方法包括如下步骤：用LC‑APCI/MS表征技术对样品油溶液中的甘油酯类成分定性并获得理论摩尔分子量；利用靶向收集策略收集样品油中各个甘油酯类成分；用无标准品评价回收率策略对靶向收集策略收集的样品油中的各个甘油酯类成分进行回收率计算，得到回收率数值；利用改良的商品化甘油三酯试剂盒和甘油或单个甘油酯标准品来水解、测定各甘油酯类成分的摩尔含量，通过等摩尔换算法换算甘油的含量绝对定量样品油中各个甘油酯类成分的质量百分含量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李萍，刘鄂湖，谭婷，赖长江生，曾素玲，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32