一种凝胶柱的装填方法技术

公开一种装填凝胶色谱柱的方法，包括(1)制备匀浆液：将凝胶粉加到去离子水中，充分润湿之后，加热煮沸2～3小时，得到匀浆液；(2)连接装填系统：将空柱管的上端连接到匀浆罐上，并在空柱管下端连接内径为0.2～0.6mm的不锈钢毛细管；(3)在空柱管内注入约为空柱管体积1/3的去离子水，然后将所述匀浆液缓慢地加到匀浆罐中；(4)启动空压机，压入顶替液，并在5.5～8.5MPa的压力下保持20～180分钟，其中该顶替液是水和甲醇的混合物；及(5)改用去离子水作为顶替液，并以1～3倍柱体积的量冲洗柱床，制得凝胶色谱柱。通过本发明专利技术的方法制得凝胶色谱柱，可以消除填料中的气泡，紧密地填充柱床，因而显著地提高了色谱柱的效率，同时使装填色谱柱的成功率由76％提高到90％以上。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】公开一种装填凝胶色谱柱的方法，包括(1)制备匀浆液：将凝胶粉加到去离子水中，充分润湿之后，加热煮沸2～3小时，得到匀浆液；(2)连接装填系统：将空柱管的上端连接到匀浆罐上，并在空柱管下端连接内径为0.2～0.6mm的不锈钢毛细管；(3)在空柱管内注入约为空柱管体积1/3的去离子水，然后将所述匀浆液缓慢地加到匀浆罐中；(4)启动空压机，压入顶替液，并在5.5～8.5MPa的压力下保持20～180分钟，其中该顶替液是水和甲醇的混合物；及(5)改用去离子水作为顶替液，并以1～3倍柱体积的量冲洗柱床，制得凝胶色谱柱。通过本专利技术的方法制得凝胶色谱柱，可以消除填料中的气泡，紧密地填充柱床，因而显著地提高了色谱柱的效率，同时使装填色谱柱的成功率由76％提高到90％以上。【专利说明】
本专利技术涉及一种装填凝胶柱的方法，更具体地，本专利技术涉及一种装填聚合物凝胶高压液相色谱(HPLC)柱的方法。
技术介绍
凝胶色谱法又称作分子排阻色谱法，其是上个世纪六十年代初发展起来的一种快速、简单的分离分析技术，主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。作为凝胶色谱法的关键部件，有机聚合物凝胶色谱柱的传统装柱方法包括机械装柱法和人工装柱法。机械装柱法是在横流情况下，直接将凝胶浆灌注到柱中，由于没有外压，所以填料难以装填得更紧密，从而导致色谱柱的柱效低、寿命短；人工装柱方法，装柱不稳定，往往不能一次成功，经常需要经常重装，不仅工作量大，而且色谱柱的寿命和柱效也不闻。针对上述问题，本专利技术的专利技术人认真地研究了硅胶色谱柱的装填方法，其装填装置如图1所示，通过改进硅胶色谱柱的装填工艺，并在大量实验的基础上完成了本专利技术。
技术实现思路
根据本专利技术的一个方面，提供一种装填凝胶色谱柱的方法，该方法包括如下步骤:(I)制备匀浆液:将凝胶粉加到去离子水中，充分润湿之后，加热煮沸2?3小时，得到匀浆液；(2)连接装填系统:将空柱管的上端连接到匀浆罐上，并在空柱管下端连接内径为0.2?0.6mm的不锈钢毛细管；(3)在空柱管内注入约为空柱管体积1/3的去离子水，然后将所述匀浆液缓慢地加到匀浆罐中；(4)启动空压机，压入顶替液，并在5.5?8.5MPa的压力下保持20?80分钟，其中该顶替液是水和甲醇的混合物；及(5)改用去离子水作为顶替液，并以I?3倍柱体积的量冲洗柱床，制得凝胶色谱柱。在一优选实施方案中，上述步骤(I)中所述的凝胶粉和去离子水的重量比为I: 3 ?4。在另一优选实施方案中，上述步骤(I)还包括滤除漂浮于水面的细小颗粒，然后使匀浆液自然沉降的步骤，并且重复该步骤2?4次。在又一优选实施方案中，上述步骤(4)中所述的水和甲醇的混合物中，水和甲醇的体积比为3:1?1: 3。在再一优选实施方案中，前述凝胶粉为交联葡聚糖。在再一优选实施方案中，该交联葡聚糖的重均分子量为1000?200000。在再一优选实施方案中，该交联葡聚糖为选自下列中的一种:Sephadex G_10，Sephadex G_15， Sephadex G-25, Sephadex G-50, Sephadex G-75, Sephadex G-100,及Sephadex G_150o实验表明，根据本专利技术的方法制得凝胶色谱柱，不仅可以消除填料中的气泡；使有机聚合物填料紧密地填充在柱床上；而且大大地提高了装填工作的一致性。因此，根据本专利技术的方法获得的色谱柱具有更高的柱效率和更长的使用寿命，同时也使装填色谱柱的成功率由传统方法的76%提高到90%以上。【专利附图】【附图说明】为了更好地理解本专利技术的构思、特征和优点，下文中将参照附图，更具体地说明本专利技术。在附图中:图1是现有的装填硅胶色谱柱的装置的示意图；及图2是本专利技术的装填有机聚合物凝胶色谱柱的装置的示意图。【具体实施方式】考虑由于现有的有机聚合物凝胶色谱柱的装填中不施加外压，所以本专利技术人首先想到用硅胶色谱柱的装填方法装填聚合物凝胶色谱柱。而且，为了对装填的聚合物凝胶施加更大的压力，在本专利技术的一个实施方案中，本专利技术人在硅凝胶色谱柱装填装置中的空色谱柱下端的滤板之下加装了一个内径约I?5_的不锈钢毛细管，限制了溶剂的流出，从而可以增加装填聚合物凝胶时色谱柱中的压力，使得聚合物凝胶可以装填得更紧密，进而提高色谱柱的效率。在另一实施方案中，本专利技术人尝试用体系比为3:1?1: 3的水和甲醇作为顶替液，代替传统方法采用的甲醇或乙醇，结果发现，这样可以使聚合物凝胶装填得更紧密。在又一实施方案中，专利技术人一改传统的匀浆液制备方法，而是在将凝胶粉加到去离子水中之后，将其加热煮沸2?3小时。据信，这样不仅可以使凝胶粉溶胀充分，而且可以排除其中的气体，并杀死其中可能存在的细菌和/或微生物，从而使得所制备的色谱柱填料中没有气泡，并延长其使用寿命。在再一实施方案中，专利技术人还在匀浆液的制备过程中，于煮沸完成之后，滤除漂浮于水面的细小颗粒，然后使其自然沉降，再滤除漂浮于水面的细小颗粒，再搅拌之后，再除漂浮于水面的细小颗粒。这样的滤除过程重复21次。据信，这样的操作可以保证匀浆液的一致性，进而保证装柱操作的一致性，进而提高了装填色谱柱的成功率。实验表明，采用本专利技术的方法，可使装填色谱柱的成功率由传统方法的76%提高到90%以上。在再一实施方案中，本专利技术的方法所使用的聚合物凝胶粉为交联葡聚糖，其重均分子量一般为1000?200000，优选为10000?150000。举例来说，可以使用美国通用公司生产的 Sephadex G-10, Sephadex G-15, Sephadex G-25, Sephadex G-50, Sephadex G-75,Sephadex G-100,或者 Sephadex G-150。此外，空柱管内注入约为空柱管体积1/3的去离子水，可以防止匀浆液进入色谱柱时产生气泡。现将通过下面的实施例，进一步说明本专利技术的优选实施方案。除非本文另有规定，否则，本文所使用的科技术语或者装置名称均与本专利技术所属
的普通技术人员所通常理解的意义相同。实施例1取S印hadex G-1O凝胶填料(美国GE公司生产)35g放入500ml烧杯中，加入300ml新鲜的去离子水，将烧杯放入沸水浴中煮沸2小时，然后放置过夜，作为凝胶浆料备用；将色谱柱空柱管(规格为内径7.8mm,长度300mm)接到115ml匀浆管上，柱管下端接一内径0.3mm、长度20cm不锈钢毛细管；在色谱柱空管内注入1/3体积的蒸馏水，然后将制好备用的凝胶浆料缓慢的倒入匀浆罐中。在顶替液储罐(储罐体积为5L)中灌满甲醇/水比例为1: 3的顶替液(本处用到的空柱管、匀浆罐和不锈钢毛细管均系美国Idex公司生产)。启动气动放大泵，压力从O开始逐渐加压到6.7MPa，使匀浆液和顶替液中的溶剂从柱管下端流出，持续30分钟后，泄压下柱，再用去离子水冲洗两倍柱体积，即成葡聚糖凝胶柱成品。用水作流动相测定产品性能，所用样品为蓝色葡聚糖2000，测定结果为:柱效(理论塔板数)N= 1200，拖尾Tf = 1.3，且进样20针后没有变化。实施例2取Sephadex G-1O凝胶填料(美国GE公司生产)35g放入500ml烧杯中，加入300ml新鲜的去离子水，将烧杯放本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种装填凝胶色谱柱的方法，包括如下步骤：(1)制备匀浆液：将凝胶粉加到去离子水中，充分润湿之后，加热煮沸2～3小时，得到匀浆液；(2)连接装填系统：将空柱管的上端连接到匀浆罐上，并在空柱管下端连接内径为0.2～0.6mm的不锈钢毛细管；(3)在空柱管内注入约为空柱管体积1/3的去离子水，然后将所述匀浆液缓慢地加到匀浆罐中；(4)启动空压机，压入顶替液，并在5.5～8.5MPa的压力下保持20～180分钟，其中该顶替液是水和甲醇的混合物；及(5)改用去离子水作为顶替液，并以1～3倍柱体积的量冲洗柱床，制得凝胶色谱柱。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵岳星，姚立新，钱丙寅，杨慧，
申请(专利权)人：月旭材料科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：