风轮菜中黄酮类化合物的分离方法及黄酮组合物技术

本发明专利技术提供了一种风轮菜中黄酮类化合物的分离方法及黄酮组合物。该分离方法包括：对风轮菜地上部分总黄酮类物质进行硅胶柱色谱分离得到第1-320流分；对第133-176流分进行硅胶柱色谱分离并经薄层检测合并相同组分得到13个流分，对第231-260流分及第295-310流分进行MCI柱色谱分离并经薄层检测合并相同组分分别得到7个和8个流分，对第12-48流分及第49-55流分进行羟丙基葡聚糖凝胶柱层析分别得到3个和2个流分；然后依次对上述各组得到的流分进行C18反相高效液相色谱分离得到33种化合物。该方法从风轮菜分离到的黄酮类成分更全面，为其在治疗心血管疾病方面的药物用途奠定了物质基础和理论依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药组合物领域，具体而言，涉及一种风轮菜中黄酮类化合物的分离方法及黄酮组合物。
技术介绍
风轮菜(Clinopodiumchinense(Benth.)O.Kuntze)为唇形科风轮菜属植物。在我国主要分布于山东、浙江、江苏、安徽、福建、台湾、湖南、湖北、广东、广西及云南东北部等地。风轮菜性凉，味苦辛，有疏风清热，解毒消肿之功。用于治疗感冒、中暑、过敏性皮炎、肠炎、痢疾、血尿等症。首载于《救荒本草》(1406)草部，在我国有悠久的民间药用历史。现已被《中华人民共和国药典》收载为断血流药用，主要用于治疗各种出血症。目前有研究表明，风轮菜总黄酮具有显著的活血化瘀活性，而风轮菜中的皂苷类成分又具有止血的功效，因此，风轮菜具有止血加活血的双向作用，即在止血的同时又可以祛除已瘀之血，达到止血而不留淤的效果。所以风轮菜总黄酮在活血化瘀，治疗和/或预防心血管疾病方面具有独特的优势，有着良好的研究开发前景。然而，中医所记载的总黄酮并没有明确的化合物，且现有技术在对风轮菜中的总黄酮类物质进行提取分离时，不同研究者分离得到的黄酮类物质的种类都不尽相同。因而，到目前为止，研究人员仍然不清楚风轮菜中具有医药活性的总黄酮类物质具体有哪些。因此，仍需要对现有技术进行改进，以提供一种成分相对齐全的黄酮组合物，为从风轮菜的天然产物中寻找具有良好疗效的治疗和/或预防心血管疾病的药物提供物质基础和理论依据。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种风轮菜中黄酮类化合物的分离方法及黄酮组合物，为从风轮菜的天然产物中寻找具有良好疗效的治疗和/或预防心血管疾病的药物提供物质基础和理论依据。为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种风轮菜中黄酮类化合物的分离方法，该分离方法包括以下步骤：从风轮菜的干燥地上部分提取总黄酮类物质；对总黄酮类物质采用硅胶柱色谱进行分离，在分离过程中，以体积比为100：5～100：25的氯仿和甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱，依次得到第1流分至第320流分；对第1流分至第320流分中的第133-176流分进行硅胶柱色谱分离，以体积比依次为9:1、4:1、2:1、1:1和1:2的氯仿和丙酮为洗脱剂进行洗脱，并经薄层检测合并相同组分，得到A1至A13共13个流分；然后以体积比为60:40的甲醇和水作为洗脱剂，依次对13个流分进行C18反相高效液相色谱分离，分别得到化合物2、3、4、5、8、9、10、14、16、20、26、32和35；对第1流分至第320流分中的第231-260流分进行MCI柱色谱分离，以体积比为60:40的甲醇和水为洗脱剂进行洗脱，并经薄层检测合并相同组分，得到B1至B7共7个流分；然后依次对7个流分进行C18反相高效液相色谱分离，以甲醇和水作为洗脱剂进行洗脱，分别得到化合物6、21、22、28、29、30和33；对第1流分至第320流分中的第295-310进行MCI柱色谱分离，以体积比为60:40的甲醇-水为洗脱剂进行洗脱，并经薄层检测合并相同组分，得到C1至C8共8个流分；依次对8个流分进行C18反相高效液相色谱分离，以甲醇和水作为洗脱剂进行洗脱，分别得到化合物11、12、15、17、23、24、27和34；对第1流分至第320流分中的第12-48流分进行SephadexLH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，并以体积比为4：6氯仿和甲醇为洗脱剂进行洗脱，然后经薄层追踪检测合并相同组分，得到D1、D2和D3共3个流分；对D2流分进行C18反相高效液相色谱分离，以甲醇和水作为洗脱剂进行洗脱，得到化合物13和19；对D3流分进行反相高效液相色谱分离，以甲醇和水作为洗脱剂进行洗脱，得到化合物25；对第1流分至第320流分中的第49-55流分进行SephadexLH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，以体积比为4：6氯仿和甲醇为洗脱剂进行洗脱，然后以甲醇和水作为洗脱剂进行C18反相高效液相色谱分离，得到化合物1和18。进一步地，对总黄酮类物质采用硅胶柱色谱进行分离的过程中，利用体积比分别为100：5、100：10、100：15、100：20和100：25的氯仿和甲醇作为洗脱剂进行梯度洗脱，依次得到第1流分至第320流分。进一步地，分离法方法还包括：对第1流分至第320流分中的第49-55流分进行SephadexLH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，以体积比为4：6氯仿和甲醇为洗脱剂进行洗脱，然后以甲醇和水作为洗脱剂进行C18反相高效液相色谱分离，得到化合物1和18。进一步地，分离法方法进一步包括：对第1流分至第320流分中的第79-86流分进行SephadexLH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，以体积比为4：6氯仿和甲醇为洗脱剂进行洗脱，然后以甲醇和水作为洗脱剂进行C18反相高效液相色谱分离，得到化合物7和31。进一步地，从风轮菜的干燥地上部分提取总黄酮类物质的步骤包括：取风轮菜的干燥地上部分，用水提取得到水提液；将水提液进行压缩、干燥，得到水提物；将水提物进行大孔树脂层析，以乙醇和水为洗脱剂进行梯度洗脱，得到洗脱物；以及将洗脱物进行碱提酸沉法富集，然后精制得到总黄酮类物质。进一步地，大孔树脂层析过程中采用D101大孔树脂层析柱进行层析；乙醇和水形成的洗脱剂中乙醇的体积浓度分别为20％、50％、70％和95％；优选得到的洗脱物为乙醇体积浓度分别为20％、50％和70％的洗脱物。为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种黄酮组合物，该黄酮组合物包括黄酮类结构的化合物、二氢黄酮类结构的化合物、黄酮醇类结构的化合物以及异黄酮类结构的化合物；其中，黄酮类结构的化合物至少包括以下任意一种：洋芹素-7-O-芸香糖苷、木犀草苷、木犀草素-7-O-β-D-葡糖醛酸苷、木犀草素-7-O-β-D-葡糖醛酸正丁醇酯苷、木犀草素-7-O-芸香糖苷、木犀草素-7-O-新橙皮糖苷、金合欢素-7-O-β-D-葡糖醛酸苷和金合欢素-7-O-β-D-芸香糖苷，黄酮组合物是从风轮菜中分离得到，且黄酮类结构的化合物通过上述任一种分离方法分离得到。进一步地，黄酮组合物中的二氢黄酮类结构的化合物至少包括以下任意一种：柚皮素-7-O-新橙皮糖苷、高圣草素、橙皮素-7-O-葡萄糖苷、圣草次苷、新北美圣草苷和5，7，3′，5′-四羟基二氢黄酮-7-O-新橙皮糖苷；二氢黄酮类结构的化合物通过上述任一种分离方法分离得到。进一步地，黄酮组合物中的黄酮醇类结构的化合物至少包括以下任意一种：山奈酚-3-O-鼠李糖苷和山奈酚3-O-吡喃鼠李糖-7-O-葡萄糖苷；黄酮醇类结构的化合物通过上述任一种分离方法分离得到。进一步地，黄酮组合物包括以下35种化合物：洋芹素、洋芹素-7-O-葡萄糖苷、洋芹素-7-O-葡糖醛酸苷、洋芹素-7-O-葡糖醛酸甲酯苷、羊红膻酯、洋芹素-7-O-芸香糖苷、木犀草素、木犀草苷、木犀草素-7-O-β-D-葡糖醛酸苷、木犀草素-7-O-β-D-葡糖醛酸正丁醇酯苷、木犀草素-7-O-芸香糖苷、木犀草素-7-O-新橙皮糖苷、金合欢素、金合欢素-7-O-β-D-葡糖醛酸苷、金合欢素-7-O-β-D-芸香糖苷、日本椴苷、蒙花苷、柚皮素、异樱花素、江户樱花苷、柚皮素-7-O-芸香糖苷、柚皮素-7-O-新橙皮本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种风轮菜中黄酮类化合物的分离方法，其特征在于，所述分离方法包括以下步骤：从风轮菜的干燥地上部分提取总黄酮类物质；对所述总黄酮类物质采用硅胶柱色谱进行分离，在所述分离过程中，以体积比为100：5～100：25的氯仿和甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱，依次得到第1流分至第320流分；对所述第1流分至第320流分中的第133‑176流分进行硅胶柱色谱分离，以体积比依次为9:1、4:1、2:1、1:1和1:2的氯仿和丙酮为洗脱剂进行洗脱，并经薄层检测合并相同组分，得到A1至A13共13个流分；然后以体积比为60:40的甲醇和水作为洗脱剂，依次对所述13个流分进行C18反相高效液相色谱分离，分别得到化合物2、3、4、5、8、9、10、14、16、20、26、32和35；对所述第1流分至第320流分中的第231‑260流分进行MCI柱色谱分离，以所述体积比为60:40的甲醇和水为洗脱剂进行洗脱，并经薄层检测合并相同组分，得到B1至B7共7个流分；然后依次对所述7个流分进行C18反相高效液相色谱分离，以甲醇和水作为洗脱剂进行洗脱，分别得到化合物6、21、22、28、29、30和33；对所述第1流分至第320流分中的第295‑310进行MCI柱色谱分离，以体积比为60:40的甲醇‑水为洗脱剂进行洗脱，并经薄层检测合并相同组分，得到C1至C8共8个流分；依次对所述8个流分进行C18反相高效液相色谱分离，以甲醇和水作为洗脱剂进行洗脱，分别得到化合物11、12、15、17、23、24、27和34；对所述第1流分至第320流分中的第12‑48流分进行Sephadex LH‑20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，并以体积比为4：6氯仿和甲醇为洗脱剂进行洗脱，然后经薄层追踪检测合并相同组分，得到D1、D2和D3共3个流分；对所述D2流分进行C18反相高效液相色谱分离，以甲醇和水作为洗脱剂进行洗脱，得到化合物13和19；对所述D3流分进行反相高效液相色谱分离，以甲醇和水作为洗脱剂进行洗脱，得到化合物25；对所述第1流分至第320流分中的第49‑55流分进行Sephadex LH‑20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，以体积比为4：6氯仿和甲醇为洗脱剂进行洗脱，然后以甲醇和水作为洗脱剂进行C18反相高效液相色谱分离，得到化合物1和18。...

【技术特征摘要】
1.一种风轮菜中黄酮类化合物的分离方法，其特征在于，所述分离方法包括以下步骤：从风轮菜的干燥地上部分提取总黄酮类物质；对所述总黄酮类物质采用硅胶柱色谱进行分离，在所述分离过程中，以体积比为100：5～100：25的氯仿和甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱，依次得到第1流分至第320流分；对所述第1流分至第320流分中的第133-176流分进行硅胶柱色谱分离，以体积比依次为9:1、4:1、2:1、1:1和1:2的氯仿和丙酮为洗脱剂进行洗脱，并经薄层检测合并相同组分，得到A1至A13共13个流分；然后以体积比为60:40的甲醇和水作为洗脱剂，依次对所述13个流分进行C18反相高效液相色谱分离，分别得到化合物2、3、4、5、8、9、10、14、16、20、26、32和35；对所述第1流分至第320流分中的第231-260流分进行MCI柱色谱分离，以所述体积比为60:40的甲醇和水为洗脱剂进行洗脱，并经薄层检测合并相同组分，得到B1至B7共7个流分；然后依次对所述7个流分进行C18反相高效液相色谱分离，以甲醇和水作为洗脱剂进行洗脱，分别得到化合物6、21、22、28、29、30和33；对所述第1流分至第320流分中的第295-310进行MCI柱色谱分离，以体积比为60:40的甲醇-水为洗脱剂进行洗脱，并经薄层检测合并相同组分，得到C1至C8共8个流分；依次对所述8个流分进行C18反相高效液相色谱分离，以甲醇和水作为洗脱剂进行洗脱，分别得到化合物11、12、15、17、23、24、27和34；对所述第1流分至第320流分中的第12-48流分进行SephadexLH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，并以体积比为4：6氯仿和甲醇为洗脱剂进行洗脱，然后经薄层追踪检测合并相同组分，得到D1、D2和D3共3个流分；对所述D2流分进行C18反相高效液相色谱分离，以甲醇和水作为洗脱剂进行洗脱，得到化合物13和19；对所述D3流分进行反相高效液相色谱分离，以甲醇和水作为洗脱剂进行洗脱，得到化合物25；对所述第1流分至第320流分中的第49-55流分进行SephadexLH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，以体积比为4：6氯仿和甲醇为洗脱剂进行洗脱，然后以甲醇和水作为洗脱剂进行C18反相高效液相色谱分离，得到化合物1和18。2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，对所述总黄酮类物质采用硅胶柱色谱进行分离的过程中，利用体积比分别为100：5、100：10、100：15、100：20和100：25的所述氯仿和甲醇作为洗脱剂进行梯度洗脱，依次得到第1流分至第320流分。3.根据权利要求1或2所述的分离方法，其特征在于，所述分离法方法还包括：对所述第1流分至第320流分中的第49-55流分进行SephadexLH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，以体积比为4：6氯仿和甲醇为洗脱剂进行洗脱，然后以甲醇和水作为洗脱剂进行C18反相高效液相色谱分离，得到化合物1和18。4.根据权利要求3所述的分离方法，其特征在于，所述分离方法进一步包括；对所述第1流分至第320流分中的第79-86流分进行SephadexLH-20羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，以体积比为4：6氯仿和甲醇为洗脱剂进行洗脱，然后以甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：许旭东，余世春，钟明亮，朱寅荻，马国需，吴海峰，张小坡，
申请(专利权)人：中国医学科学院药用植物研究所，安徽科创药物研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：北京;11