翻白草三萜化合物的制备方法，本发明专利技术提出(20S)‑3α‑羟基‑29‑二甲氧基‑27‑白桦酸的提取方法，包括：(i)粗提工序：干燥翻白草(Potentilla discolor Bunge)全草，用70体积％以上的乙醇水溶液加热提取，减压蒸去乙醇，得到粗提物；(ii)萃取工序：用水混悬上述粗提物，依次经石油醚萃取、乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯萃取部分；(iii)柱层析工序：先将上述乙酸乙酯萃取部分进行硅胶柱层析，氯仿‑甲醇梯度洗脱，收集30‑50体积％氯仿‑甲醇的洗脱流分；接着进行小孔树脂柱层析，甲醇‑水梯度洗脱，收集70‑90体积％甲醇水洗脱的流分；然后进行反相C18柱层析，丙酮‑水梯度洗脱，收集50‑70体积％丙酮‑水洗脱的流分；(iii)纯化工序：用葡聚糖凝胶柱纯化，得到(20S)‑3α‑羟基‑29‑二甲氧基‑27‑白桦酸。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种翻白草三萜化合物的制备方法。
技术介绍
中药翻白草是蔷薇科委陵菜属植物翻白草(Potentilla discolor Bunge)的干燥全草，始载于《救荒本草》。翻白草广泛分布于北半球的温带和寒带，我国以山东、辽宁、安徽三省该药材产量最大，此外，河北、河南、内蒙古、湖南、江苏和广西等省份也有分布。其性甘、苦、平，具有清热解毒、止血消肿之功效，可用于治疗痢疾、疟疾、肺痈等症。目前国内外对翻白草的研究集中于单一环节的疗效评价方面，针对翻白草的化学成分、提取工艺、药效物质基础、物质代谢的系统性研究开展较少，有待进一步深入。
技术实现思路
专利技术人对翻白草(Potentilla discolor Bunge)的化学成分、提取方法、药理活性进行了系统研究。从翻白草提取分离出10个三萜类化合物(化合物1～10)。其中,化合物5为新化合物，经结构鉴定，命名为(20S)-3α-羟基-29-二甲氧基-27-白桦酸，其结构如式(I)所示：本专利技术还研究了翻白草总三萜的提取方法以及式(I)所示三萜化合物的提取方法。即，本专利技术提供一种式(I)所示的三萜化合物的提取方法，包括：(i)粗提工序：干燥翻白草(Potentilla discolor Bunge)全草，用70体积％以上的乙醇水溶液加热提取，减压蒸去乙醇，得到粗提物；(ii)萃取工序：用水混悬上述粗提物，依次经石油醚萃取、乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯萃取部分；(iii)柱层析工序：先将上述乙酸乙酯萃取部分进行硅胶柱层析，氯仿-甲醇梯度洗脱，收集30-50体积％氯仿-甲醇的洗脱流分；接着进行小孔树脂柱层析，甲醇-水梯度洗脱，收集70-90体积％甲醇水洗脱的流分；然后进行反相C18柱层析，丙酮-水梯度洗脱，收集50-70体积％丙酮-水洗脱的流分；(iii)纯化工序：用葡聚糖凝胶柱纯化，得到式(I)的化合物。本专利技术还提供一种翻白草总三萜的提取方法，所述翻白草总三萜是包含式(I)所示的三萜化合物的混合物，该提取方法包括：干燥翻白草(Potentilla discolor Bunge)全草，用90体积％乙醇水溶液加热提取，提取液蒸去乙醇，用水混悬，依次经过石油醚萃取、乙酸乙酯萃取；将乙酸乙酯萃取部分硅胶柱层析，用体积比1:0-0:1的氯仿-甲醇梯度洗脱，收集30-50体积％和50-70体积％的氯仿-甲醇的洗脱流分；进行小孔树脂柱层析，甲醇-水梯度洗脱，收集70-90体积％甲醇水洗脱的流分。附图说明图1为翻白草提取分离过程示意图；图2-1、2-2为(20S)-3α-羟基-29-二甲氧基-27-白桦酸1H NMR谱图；图3-1、3-2、3-3为(20S)-3α-羟基-29-二甲氧基-27-白桦酸13C NMR谱图；图4-1、4-2为(20S)-3α-羟基-29-二甲氧基-27-白桦酸2D-NMR谱图；图5-1、5-2、5-3为(20S)-3α-羟基-29-二甲氧基-27-白桦酸ROESY谱图。具体实施方式(一)化合物的提取1、实验方法1.1实验仪器与材料熔点用X-4型双目镜显微熔点测定仪(温度未校正，北京泰克仪器有限公司制造)测定；UV用Shimadzu UV-2501PC型可见-紫外分光光度计测定；NMR：Bruker AV-500型核磁共振仪，δ为ppm，J为Hz。薄层层析硅胶H、薄层色谱硅胶GF254、柱层析硅胶(100-200目，200-300目，青岛海洋化工厂)；反相C18柱，即ODS柱(40-60μm，Fuji公司)，Sephadex LH-20葡聚糖凝胶(购自Pharmacia公司)；MCI柱(日本三菱化工株式会社)。所用试剂均为分析纯级。如无特殊说明，本专利技术所指比例以及百分比均指体积。1.2植物来源翻白草(Potentilla discolor Bunge)药材采自广西，植物标本经鉴定为蔷薇科委陵菜属植物翻白草，标本存放于中国药科大学中药分析教研室。1.3提取分离干燥翻白草全草14kg，用90％乙醇水溶液加热提取3次，每次3h合并提取液，减压蒸去大部分乙醇，用水混悬，然后用石油醚萃取三次，回收溶剂后得到石油醚部分160g，然后用乙酸乙酯萃取三次，回收溶剂后，得乙酸乙酯部分300g。乙酸乙酯部分(300g)用400g硅胶(100-300目)拌样，3.0kg(200-300目)进行硅胶柱层析，氯仿-甲醇(10：0-0:10，v：v)梯度洗脱，薄层色谱检测合并相同流分。将30-50体积％和50-70体积％的流分合并后减压干燥，进行小孔(MCI)柱层析，用水-甲醇(10：0-0:10，v：v)梯度洗脱，收集70％-90％甲醇洗脱的成分。减压回收溶剂至浸膏状，再用甲醇溶解，进行反向C18柱层析，丙酮-水(0：10-10:0，v：v)梯度洗脱，葡聚糖凝胶柱(Sephadex LH-20)反复纯化，得化合物1(17mg)，2(25mg)，3(8mg)，4(20mg)，5(8mg)，6(100mg)，7(5mg)，8(4mg)，9(5mg)，10(120mg)。化合物5较多地来自于反相C18柱层析的50-70体积％丙酮-水洗脱的流分。翻白草分离流程如图1所示。依据与对照品TLC比对以及各种谱图数据[IR、MS、1H NMR、13C NMR和2D NMR(HMQC、HMBC、COSY)]最终确证了所得到的化合物别为：蔷薇酸(euscaphic acid,1)、2α-羟基乌苏酸(corosolic acid,2)、2α,3β,19α-三羟基-熊果酸(tormentic acid,3)、3α,30-二羟基-20(29)-烯-27-白桦酸(3α,30-dihydroxylup-20(29)-en-27-oic acid,4)、(20S)-3α-羟基-29-二甲氧基-27-白桦酸((20S)-3α-hydroxy-29-dimethoxy-lupan-27-oic acid,5)、熊果酸(ursolic acid,6)、山楂酸(maslinic acid,7)、19α-羟基熊果酸(pomolic acid,8)、2α,3α-二羟基-12-烯-28-乌苏酸(2α,3α-dihydroxyurs-12-en-28-oic acid,9)、齐墩果酸(oleanolic acid,10)。其中，化合物(20S)-3α-羟基-29-二甲氧基-27-白桦酸((20S)-3α-hydroxy-29-dimethoxy-lupan-27-oic acid,5)未见文献报道，为新化合物。1.4翻白草总三萜的提取干燥翻白草(Potentilla discolor Bunge)全草，用90体积％乙醇水溶液加热提取，减压蒸去大部分乙醇，用水混悬，依次经过石油醚萃取、乙酸乙酯萃取。硅胶柱层析：填装200-300目的硅胶柱，将乙酸乙酯萃取部分用硅胶(100-300目)拌样，上样，用体积比1:0-0:1的氯仿-甲醇梯度洗脱，采用上述1.3中分离得到的三萜类化合物1-10作为对照品，经薄层色谱分析，显示上述各三萜类化合物在30-50体积％、50-70体积％的氯仿-甲醇的洗脱流分中比较集中，收集30-50体积％、50-70体积％的氯仿-甲醇的洗脱流分，合并。进行小孔树脂柱层析，甲醇-水梯度洗脱，收集70-9本文档来自技高网...
【技术保护点】
(20S)‑3α‑羟基‑29‑二甲氧基‑27‑白桦酸的提取方法，包括：(i)粗提工序：干燥翻白草(Potentilla discolor Bunge)全草，用70体积％以上的乙醇水溶液加热提取，减压蒸去乙醇，得到粗提物；(ii)萃取工序：用水混悬上述粗提物，依次经石油醚萃取、乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯萃取部分；(iii)柱层析工序：先将上述乙酸乙酯萃取部分进行硅胶柱层析，氯仿‑甲醇梯度洗脱，收集30‑50体积％氯仿‑甲醇的洗脱流分；接着进行小孔树脂柱层析，甲醇‑水梯度洗脱，收集70‑90体积％甲醇水洗脱的流分；然后进行反相C18柱层析，丙酮‑水梯度洗脱，收集50‑70体积％丙酮‑水洗脱的流分；(iii)纯化工序：用葡聚糖凝胶柱纯化，得到(20S)‑3α‑羟基‑29‑二甲氧基‑27‑白桦酸。
【技术特征摘要】
1.(20S)-3α-羟基-29-二甲氧基-27-白桦酸的提取方法，包括：(i)粗提工序：干燥翻白草(Potentilla discolor Bunge)全草，用70体积％以上的乙醇水溶液加热提取，减压蒸去乙醇，得到粗提物；(ii)萃取工序：用水混悬上述粗提物，依次经石油醚萃取、乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯萃取部分；(iii)柱层析工序：先将上述乙酸乙酯萃取部分进行硅胶柱层析，氯仿-甲醇梯度洗脱，收集30-50体积％氯仿-甲醇的洗脱流分；接着进行小孔树脂柱层析，甲醇-水梯度洗脱，收集70-90体积％甲醇水洗脱的流分；然后进行反相C18柱层析，丙酮-水梯度洗脱，收集50-70体积％丙酮-水洗脱的流分；(iii)纯化工序：用葡聚糖凝胶柱纯化，得到(20S)-3α-羟基-29-二甲氧基-27-白桦酸。2.一种翻白草总三萜的制备方法，所述翻...
【专利技术属性】
技术研发人员：谈景福，俞磊明，朱光明，朱俊杰，王立会，
申请(专利权)人：上海市药材有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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