一种利用金色链霉菌发酵生产去甲基金霉素的培养基和培养方法技术

本发明专利技术涉及一种利用金色链霉菌发酵生产去甲基金霉素的培养基和培养方法，其培养基组成中含有鱼油、糖蜜混合物、蚯蚓粉混合物、蛋白胨等。本发明专利技术通过优化培养基配方及发酵工艺，使得去甲基金霉素的平均发酵单位在13000mg/L以上，同国内常规发酵水平相比，提高了10%以上，发酵周期控制在180h以下，缩短发酵周期15h以上，节能降耗，降低生产成本，并且最大限度的降低原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现去甲基金霉素稳定、高效的生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于发酵
，特别是涉及。
技术介绍
去甲基金霉素是金色链霉菌(strepotorrycesame afaciens)的次生代谢产物，主要用于米诺环素和替加环索的生产。其盐酸盐抗菌性较强，抗菌谱与金霉素相似，其作用比四环素、土霉素强，比金霉素稳定，是四环素族抗生素的衍生产物。目前，国内外有关于采用三级发酵模式生产去甲基金霉素的相关报道，其主要碳源是植物油和淀粉，氮源主要是豆饼粉、蛋白胨和酵母粉，存在的主要问题是:1)不同的培养基配方影响其菌种发酵技 术水平，国内金色链霉菌生产发酵技术水平一般在控制在4000~10000mg/L。2)发酵培养周期长，一般在200h左右，导致出现能耗、发酵成本较高等一些列问题。
技术实现思路
本专利技术目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种有效提高发酵单位，缩短发酵周期，同时最大限度的降低发酵生产成本，且原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现去甲基金霉素稳定、高效地生产的利用金色链霉菌发酵生产去甲基金霉素的培养基。本专利技术的另一目的是提供利用上述培养基生产去甲基金霉素的培养方法。为实现上述目的所采取的技术方案为:一种利用金色链霉菌发酵生产去甲基金霉素的培养基，包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其特征在于所述一级种子培养基组成为:鱼油5~15ml/L、糖蜜混合物20~30g/U丘蝴粉混合物20~30g/L、蛋白胨10~15g/L、轻质碳酸|丐2~8g/L、硫酸铵1~5g/L ；所述二级种子培养基的组成为:鱼油10~20ml/L、糖蜜混合物30~40g/L、蚯蚓粉混合物25~35g/L、蛋白胨20~25g/L、磷酸二氢钾0.2~0.8g/L、轻质碳酸|丐5~10g/L、硫酸铵4~10g/L、氯化钠4~6g/L ；所述发酵培养基的组成为:鱼油25~35ml/L、糖蜜混合物35~45g/L、蚯蚓粉混合物35~45g/L、蛋白胨25~30g/L、磷酸二氢钾0.6~0.9g/L、轻质碳酸|丐6~10g/L、硫酸铵5~10g/L、氯化钠4~6g/L、硫酸镁6~9g/L、氯化铁0.2~0.6g/L、全氟化碳0.01~0.0.05g/L。所述糖蜜混合物的组成以重量百分比计为:生物素0.02~0.09%、泛酸0.02~0.05%、核黄素0.04~0.07%、蔗糖转化酶0.01~0.02%，其余为甘蔗糖蜜或甜菜糖蜜。所述蚯蚓粉混合物是由蚯蚓粉、鱼粉、骨粉和棉籽饼粉按照6:2:1:1的重量配伍--? 。一种利用上述培养基发酵生产的去甲基金霉素的培养方法，其特征在于其工艺步骤为:将已经培养好的金色链霉菌母瓶发酵液接入一级种子培养基中进行一级种子培养，当菌体浓度20~30%、pH值6~7、培养时间45~55h时移入二级种子培养基中进行二级种子培养，至菌体浓度30~40%、pH值6~7、培养时间20~30h时移入发酵培养基中进行发酵培养，至化学效价≥12000ug/ml、菌体浓度45~55%、pH值5.7~6.3、培养时间160~180h时终止发酵。所述一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基在接种培养前首先进行灭菌处理，其中灭菌后一级种子培养基的质量要求:氨基氮30~40mg/100ml、总糖2~3g/100ml、pH6 ~7 ；灭菌后二级种子培养基的质量要求:氨基氮40~50mg/100ml、总糖4~6g/100ml、pH6 ~7 ；灭菌后的发酵培养基的质量要求:氨基氮45~55mg/100ml、溶磷100~120ug/ml、总糖 5 ~7g/100ml、pH5 ~7。所述一级种子培养条件为:罐压0.01~0.05MPa ;罐温26~28°C;空气流量:0~5h，采用气流搅拌代替机械搅拌，空气流量控制在lm3/h ;6h~移种:空气流量控制在2m3/h ；揽拌转速60r/min ；pH6~7。所述二级种子培养条件为:罐压0.01~0.05MPa;罐温26~28°C;空气流量10m3/h ;搅拌转速80r/min ；pH值6~7。所述发酵培养条件为:a pH控制:发酵培养初始pH6~7，发酵过程中ρΗ5.7~6.3 ;b变温培养控制:0~60h:培养温度26~27°C，61 ~150h:27 ~28°C，151h~放罐:26~27°C ；c搅拌和溶氧控制:0~60h:搅拌转速控制在80r/min,溶氧浓度不得低于60%,61~160h:搅拌转速控制在100r/min，溶氧浓度控制在20~40%，161h~放罐:搅拌转速控制在80r/min,溶氧浓度控制在30%以上；d罐压:罐压控制在0.04~0.06MPa。在发酵过程中进行补料，包括补鱼油、补水、补糖、补酸或碱和补氮源，其中a补鱼油:发酵前60h不用进行补鱼油，61h~150h:脂肪含量低于1%,补入鱼油,脂肪含量超过3%,则停止补油，151h至发酵结束:脂肪含量低于0.5%，补入油，脂肪含量超过0.8%，则停止补油，b补水:发酵前60h不用进行补水，61h~发酵结束:当发酵液菌体浓度> 55%，补入已灭菌的饮用水，控制菌体浓度45~55% ；c补酸或碱:发酵前60h，pH不进行控制，发酵61h至99h:当pH < 6时，用5~10%的氢氧化钠溶液调节pH至6~6.5，当pH>6.5时，用20~30%的硫酸铵溶液调节pH至6~6.5，发酵100h至发酵结束:当pH < 5.7，用5~10%的氢氧化钠溶液调节pH至5.7~6.3，当pH > 6.3，用20~30%的硫酸铵溶液调节pH至5.7~6.3 ;d补入氮源:在 发酵周期分别在60h、90h和120h时补入氮源，其补入量为发酵液体积的0.5%，所述氮源为10%的蛋白胨和15%的鱼粉的混合水溶液；e补糖:发酵前60h，还原糖含量不进行控制，发酵61h至120h:当还原糖含量< 3%，补入已灭菌的麦芽糖，使还原糖的含量控制在3 ~4%,发酵121h至发酵结束:当还原糖含量< 0.5%，补入已灭菌的麦芽糖，使还原糖的含量控制在0.5~1%。本专利技术具有以下技术优势:1)使用新培养基配方和培养方法，去甲基金霉素的平均发酵单位在13000mg/L以上，同国内常规发酵水平相比，提高了 10%以上。2)使用新培养基配方和培养方法节能降耗，去甲基金霉素的发酵周期控制在180h以下，缩短发酵周期15h以上，节能降耗，降低生产成本。综上所述，本专利技术通过优化其培养基配方，提高发酵单位，缩短发酵周期，解决了发酵成本问题，并且最大限度的降低原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现去甲基金霉素稳定、闻效的生广。【具体实施方式】下面用实例予以说明本专利技术，应该理解的是，实例是用于说明本专利技术而不是对本专利技术的限制。本专利技术的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。实施例中使用的金色链霉菌的摇瓶效价一般为3000~5000ug/ml。本专利技术中一级种子培养的接种量控制在0.1~0.2%，二级种子培养和发酵培养接种量控制在10~15%。实施例1一级种子培养基lm3:鱼油5L、糖蜜混合物20kg、蚯蚓粉混合物20kg、蛋白胨10kg、轻质碳酸韩2kg、硫酸铵1kg。二级种子培养基10m3:鱼油100L、糖蜜混合物300kg、蚯蚓粉混合物250本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用金色链霉菌发酵生产去甲基金霉素的培养基，包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其特征在于所述一级种子培养基组成为：鱼油5～15ml/L、糖蜜混合物20～30g/L、蚯蚓粉混合物20～30g/L、蛋白胨10～15g/L、轻质碳酸钙2～8g/L、硫酸铵1～5g/L；所述二级种子培养基的组成为：鱼油10～20ml/L、糖蜜混合物30～40g/L、蚯蚓粉混合物25～35g/L、蛋白胨20～25g/L、磷酸二氢钾0.2～0.8g/L、轻质碳酸钙5～10g/L、硫酸铵4～10g/L、氯化钠4～6g/L；所述发酵培养基的组成为：鱼油25～35ml/L、糖蜜混合物35～45g/L、蚯蚓粉混合物35～45g/L、蛋白胨25～30g/L、磷酸二氢钾0.6～0.9g/L、轻质碳酸钙6～10g/L、硫酸铵5～10g/L、氯化钠4～6g/L、硫酸镁6～9g/L、氯化铁0.2～0.6g/L、全氟化碳0.01～0.0.05g/L。

【技术特征摘要】
1.一种利用金色链霉菌发酵生产去甲基金霉素的培养基，包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其特征在于所述一级种子培养基组成为:鱼油5~15ml/L、糖蜜混合物20~30g/U丘蝴粉混合物20~30g/L、蛋白胨10~15g/L、轻质碳酸|丐2~8g/L、硫酸铵1~5g/L ；所述二级种子培养基的组成为:鱼油10~20ml/L、糖蜜混合物30~40g/L、蚯蚓粉混合物25~35g/L、蛋白胨20~25g/L、磷酸二氢钾0.2~0.8g/L、轻质碳酸|丐5~10g/L、硫酸铵4~10g/L、氯化钠4~6g/L ；所述发酵培养基的组成为:鱼油25~35ml/L、糖蜜混合物35~45g/L、蚯蚓粉混合物35~45g/L、蛋白胨25~30g/L、磷酸二氢钾0.6~0.9g/L、轻质碳酸|丐6~10g/L、硫酸铵5~10g/L、氯化钠4~6g/L、硫酸镁6~9g/L、氯化铁0.2~0.6g/L、全氟化碳0.01~0.0.05g/L。2.按照权利要求1所述的利用金色链霉菌发酵生产去甲基金霉素的培养基，其特征在于所述糖蜜混合物的组成以重量百分比计为:生物素0.02~0.09%、泛酸0.02~0.05%、核黄素0.04~0.07%、蔗糖转化酶0.01~0.02%，其余为甘蔗糖蜜或甜菜糖蜜。3.按照权利要求1所述的利用金色链霉菌发酵生产去甲基金霉素的培养基，其特征在于所述蚯蚓粉混合物是由蚯蚓粉、鱼粉、骨粉和棉籽饼粉按照6:2:1:1的重量配伍而成。4.一种利用权利要求1-3任意一项培养基发酵生产的去甲基金霉素的培养方法，其特征在于其工艺步骤为:将已经培养好的金色链霉菌母瓶发酵液接入一级种子培养基中进行一级种子培养，当菌体浓度20~30%、pH值6~7、培养时间45~55h时移入二级种子培养基中进行二级种子培养，至菌体浓度30~40%、pH值6~7、培养时间20~30h时移入发酵培养基中进行发酵培 养，至化学效价≥12000ug/mU菌体浓度45~55%、pH值5.7~6.3、培养时间160~180h时终止发酵。5.按照权利要求4所述的培养方法，其特征在于所述一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基在接种培养前首先进行灭菌处理，其中灭菌后一级种子培养基的质量要求:氨基氮30~40mg/100ml、总糖2~3g/100ml、pH6 ~7 ；灭菌后二级种子培养基的质量要求:氨基氮40~50mg/100ml、总糖4~6g/100ml、pH6 ~7 ；灭菌后的发酵培养基的质量要求:氨基氮45~55mg/100ml、溶磷100~120ug/ml、总糖 5 ~7g/100ml、pH5 ~7。6.按照权利要求4所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：任勇，王义，
申请(专利权)人：宁夏泰瑞制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：