一种利用金色链霉菌的冷冻摇瓶菌丝替代孢子接种的方法技术

本发明专利技术涉及到一种利用金色链霉菌的冷冻摇瓶菌丝替代孢子接种的方法，包括：(1)孢子培养；(2)摇瓶菌丝；(3)种子培养；(4)深层液体通气发酵。本发明专利技术着重研制一种新的接种工艺(摇瓶菌丝发酵)，用冷冻摇瓶菌丝替代孢子接种，减少孢子的使用量，提高发酵种子种龄和种子质量的一致性，稳定微生物代谢，降低种子制备工作量和劳动强度，提高金色链霉菌的产抗能力及工作效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物
，是。在金霉素发酵工艺中，现行的金霉素发酵种子接种过程，是由3-6个生长良好的孢子瓶制备成孢子液，然后采用压差法把孢子液接入种子罐进行培养。孢子液制备过程中，需要制备大量的孢子瓶来满足生产的需要，并且对大量的孢子瓶的保藏需要多台冷藏设备。本专利着重研制一种新的接种工艺(摇瓶菌丝进罐)，减少孢子的使用量。提高金色链霉菌的产抗能力及工作效率。具体为:用I个生长良好的孢子瓶，采用挖块法取Icrn2左右孢子，接入灭菌后的摇瓶中进行培养。培养好后，混合均匀分装到接种瓶中，采用压差法把菌丝液接入种子罐进行培养。种子罐培养好后移入发酵罐进行发酵。
技术介绍
金霉素(Chlortetracycline),又称氯四环素,属四环素类中衍生物的一种。化学名:6~ 甲基 ~4~ _■甲氣基 _3,6,10,12,12a-五轻基-1，11- _-氧代 ~7~ 氣-1,4,4a, 5, 5a, 6，11，12a-八氢-2-并四苯甲酰胺。分子量:478.8 ;分子式=C22H23ClN2O8。金霉素抗菌谱广，对阳性菌、阴性菌、螺旋体、立克次氏体、支原体、衣原体、某些原虫等均可产生抑制作用。金霉素的抗菌作用主要在于抑制细菌的生长，在其较高浓度时具有杀菌作用，其作用机制是干扰蛋白质的合成。适用于鸡白痢、伤寒、猪细菌性肠炎以及禽类副伤寒、霍乱等疾病。同时，作为理想的饲料添加剂它还具有预防潜在感染、改善消化代谢、抑制肠道内有害微生物，促进有益微生物生长、提高饲料效能等。在全球范围内，金霉素是所有饲料药物添加剂中使用量最大的品种，是国际上重要的兽用抗生素之一。在金霉素发酵工艺中，大型发酵罐现行的金霉素发酵种子接种过程，是由3-6个生长良好的孢子瓶制备成孢子液，每瓶加无菌水约30ml，用刮孢铲将孢子磨下，将磨好的孢子液倒入已灭菌的空孢瓶内，装上微孔接种针备用。然后采用压差法把孢子液接入种子罐进行培养。种子罐控制一定的生长时间，培养好后，再利用压力差移入发酵罐进行发酵。但是这种接种方式容易产生一些问题。首先，孢子培养基主要原料为麸皮，麸皮为小麦最外层的表皮，小麦被磨面机加工后，变成面粉和麸皮两部分，麸皮就是小麦的外皮，它价格低廉，富含纤维素和半纤维素，是微生物生长的优良碳源，尤其是在链霉素的培养基中使用广泛，对于促进产孢效果显著。但麸皮的质量受产地、品种、气候、耕种条件、储藏期限、制备工艺等诸多因素影响，无量化指标对其质量进行有效控制。麸皮的波动直接影响培养的孢子，进而影响进罐种子质量，对于后续的发酵产抗都会产生关联，这种影响对于生产过程的控制增加了难度，很多时候更会给结果带来不利的影响。其次，同一种子罐使用多只孢子瓶的孢子液，孢子的菌落差异导致种子生长阶段存在一定的内在差异，统一的种龄控制不能完美地满足所有的种子。这会造成发酵过程起步状态的不统一，同样会给生产过程控制增加困难，并在一定程度上造成结果的差异化。再次，采用此种制种方式，在工厂生产的孢子液制备环节中，需要制备大量的孢子瓶来满足生产的需要，并且对大量的孢子瓶的保藏需要多台冷藏设备。这无疑都增加了人员、设备的投入要求，不利于企业的生产成本控制，也给菌种的保藏管理带来压力。因此，我们寻求开发一种新的接种工艺，以摇瓶菌丝的接种形式代替孢子悬液进罐。摇瓶菌丝制备使用的孢子瓶孢子量较少，通过摇瓶培养，将孢子萌发为菌丝体，其生长阶段和质量趋一致性，对种子罐种龄和质量控制更便捷、有效，能够有效提高工业水平大容量发酵罐金霉素发酵的产抗能力及大规模发酵工业的工作效率
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种培养周期短，稳定性好，生长成本低的新接种工艺。与传统工艺比较，新的接种工艺以摇瓶菌丝的接种形式代替孢子悬液接种。摇瓶菌丝制备使用的孢子量较少，通过摇瓶培养，将孢子萌发为菌丝体，其生长阶段和质量趋于一致性，对微生物种子质量控制更便捷、有效，能够提高工业水平大容量金霉素产生菌的产抗能力及大规模发酵工业的工作效率。本专利技术的优点和有益效果为:1:本项研究通过接种形式的改变，提高了发酵种子质量的一致性，稳定了发酵过程代谢，使发酵过程更易于控制；同时降低了种子制备的劳动强度，给工作带来了显著的改盡口 O2:与传统工艺比较，新的接种工艺以摇瓶菌丝的接种形式代替孢子悬液接种。摇瓶菌丝制备使用的孢子量较少，通过摇瓶培养，将孢子萌发为菌丝体，其生长阶段和质量趋于一致性，对发酵种子培养和质量控制更便捷、有效，能够提高工业水平大容量金霉素产生菌的产抗能力及大规模发酵工业的工作效率。具体实施例方式为了更好地理解本专利技术，下面结合实施例进一步阐明本专利技术的内容，但本专利技术的内容不仅仅局限于下面的实施。实施例1在金霉素发酵工艺中，现行的金霉素发酵种子接种过程，是由3-6个生长良好的孢子瓶制备成孢子液，然后采用压差法把孢子液接入种子罐进行培养。种子罐培养好后移入发酵罐进行发酵。孢子液制备过程中，需要大量的孢子瓶来满足生产的需要，并且，大量孢子瓶的保藏需要多台冷藏设备。本项目着重研制一种新的接种工艺(摇瓶菌丝接种)，减少孢子的使用量，提高金色链霉菌的产抗能力及工作效率。具体为:用I个生长良好的孢子瓶，采用挖块法取Icrn2左右孢子，接入灭菌后的摇瓶中进行培养。培养成熟后，混合均匀分装到接种瓶中，采用压差法把菌丝液接入种子罐进行 培养。种子罐培养成熟后移入发酵罐进行发酵。实践表明，两种接种方式比较，效价、产量均无明显差异，金霉素产品质量指标均能满足国内外产品质量标准。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用金色链霉菌的冷冻摇瓶菌丝替代孢子接种的方法，包括：(1)孢子培养；(2)摇瓶菌丝；(3)种子培养；(4)深层液体通气发酵，其中深层液体通气发酵的条件如下：①发酵培养基组成：花生饼粉或黄豆饼粉：3.0％?5.0％；玉米淀粉：8.0％?12.0％；氯化钠：0.2％?0.3％；硫酸铵：0.4％?0.6％；碳酸钙：0.5％?0.8％；酵母粉：0.1％?1.6％；硫酸镁：0.02％?0.03％；磷酸二氢钾：0％?0.03％；淀粉酶：0.003％?0.02％；②培养温度：接种后培养温度控制在28?34℃，菌丝成熟后降温至29±3℃培养；③发酵周期为90?124小时；④发酵培养基消后pH控制在5.6?6.5；⑤发酵培养过程中为固定转速，控制在120?140rpm；⑥溶氧大于30％。

【技术特征摘要】
1.一种利用金色链霉菌的冷冻摇瓶菌丝替代孢子接种的方法，包括:(1)孢子培养；(2)摇瓶菌丝；(3)种子培养；(4)深层液体通气发酵，其中深层液体通气发酵的条件如下:①发酵培养基组成:花生饼粉或黄豆饼粉:3.0% -5.0% ;玉米淀粉:8.0% -12.0% ;氯化钠:0.2% -0.3%;硫酸铵:0.4% -0.6%;碳酸钙:0.5% -0.8%;酵母粉:0.1% -1.6%;硫酸镁:0.02% -0.03%;磷酸二氢钾:0% -0.03%;淀粉酶:0.003% -0.02%;②培养温度:接种后培养温度控制在28-34°C，菌丝成熟后降温至29±3°C培养；③发酵周期为90-124小时；④发酵培养基消后PH控制在5.6-6.5 发酵培养过程中为固定转速，控制在120-140rpm ；⑥溶氧大于30%。2.根据权利要求1所述的一种利用金色链霉菌的冷冻摇瓶菌丝替代孢子接种的方法，其特征在于:从母瓶上挑取孢子丰满、无白点的单菌落4-10只于约1-1...

【专利技术属性】
技术研发人员：李亚峰，王友琦，张雪峥，
申请(专利权)人：驻马店华中正大有限公司，
类型：发明
国别省市：