一种降钙素原乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种降钙素原乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法，该试剂盒包括试剂R1和试剂R2两种组分，其中R1主要由缓冲液1、稳定剂1、防腐剂1、增凝剂、保护剂1和EDTA组成，试剂R2主要由缓冲液2、稳定剂2、防腐剂2、聚苯乙烯胶乳微球、PCT抗体、和保护剂2组成；所述试剂R2中的聚苯乙烯胶乳微球的粒径为100～600nm，PCT抗体应为鼠抗人PCT抗体、山羊抗人降钙素原抗体或兔抗人降钙素原抗体的一种或者几种，其中PCT抗体与聚苯乙烯胶乳微球之间以共价偶联或物理吸附方式连接。与现有技术相比，本发明专利技术中的降钙素原（PCT）检测试剂盒具有制备低廉、稳定性好、易于保存、检测灵敏度高、特异性强的优点，比较容易的在临床进行推广。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种降钙素原乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法，该试剂盒包括试剂R1和试剂R2两种组分，其中R1主要由缓冲液1、稳定剂1、防腐剂1、增凝剂、保护剂1和EDTA组成，试剂R2主要由缓冲液2、稳定剂2、防腐剂2、聚苯乙烯胶乳微球、PCT抗体、和保护剂2组成；所述试剂R2中的聚苯乙烯胶乳微球的粒径为100～600nm，PCT抗体应为鼠抗人PCT抗体、山羊抗人降钙素原抗体或兔抗人降钙素原抗体的一种或者几种，其中PCT抗体与聚苯乙烯胶乳微球之间以共价偶联或物理吸附方式连接。与现有技术相比，本专利技术中的降钙素原（PCT）检测试剂盒具有制备低廉、稳定性好、易于保存、检测灵敏度高、特异性强的优点，比较容易的在临床进行推广。【专利说明】一种降钙素原乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒
本专利技术涉及一种体外诊断试剂领域，尤其是一种降钙素原胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒。
技术介绍
降钙素原(procalcitonin，PCT)是一种由116个氨基酸组成的糖蛋白，是降钙素(calcitonin, CT)的前体肽。降钙素原可被酶裂解为许多小的片断，最终形成氨基降钙素原、成熟的降钙素和钙抑肽。降钙素原可以以游离形式存在于正常人血清中。在正常情况下，人体内血清PCT水平很低,大多低于0.lng/ml,0.5ng/ml是全身性感染(脓毒症)诊断的分界值；新生儿出生2天内PCT生理性增高，最高可达21ng/ml ;长期血液透析患者血浆PCT值可达1.5ng/ml。降钙素原在感染后2_3h即可增高，6_12h后到达顶峰，在48h内保持较高水平，2d后降到基线水平。半衰期大约25-30h。PCT在体内外稳定性较好，与常规用于炎症诊断的指标相比，已被公认为最理想的诊断严重细菌感染的指标。它在细菌性感染和非细菌性感染的鉴别，细菌性感染的严重程度，严重感染或脓毒症的早期诊断，高危患者(如ICU，器官移植术后或免疫抑制治疗的患者)感染性疾病的监测，疾病转归的评估，以及指导治疗方案的选择等方面有很高的价值，优于目前常用的其他检测项目，有很好的应用前景。PCT可广泛用于I⑶病房、血液科、肿瘤科、儿科、早产儿及新生儿监护室、外科、内科、器官移植科、急诊科和治疗实验室等。对于PCT检测，现有检测方法主要有定量方法、半定量检测方法和定性检测方法，定量检测方法有双抗夹心法(ELISA)、免疫发光法、高效液相色谱分析、放射免疫分析法等，其中放射免疫分析法和高效液相色谱分子法在临床中有一定的限制，而ELISA (双抗夹心法)和免疫发光法临床比较常用，ELSA的灵敏度较高，但其操作复杂，需要较多时间，一般结果为定性或半定量，定量时偏差较大，且线性范围窄，对于样品稀释度不好控制；免疫化学发光法具有灵敏度高的优点，可以满足临床PCT测定需求，但是需要配套专门仪器使用，价格昂贵不利于医院推广，而且标准曲线会随着时间漂移(发光持续时间长，可在不同时间测量)。定性方法主要有免疫层析法，其可以作为定性或半定量检测方法，可以快速给出结果，定性时不需要特殊仪器，但是不能给出定量数据，而且主观误差较大。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述不足，本专利技术所要解决的技术问题是:提供一种制备成本低廉，稳定性好，易于保存，数据重复性好，检测灵敏度高的降钙素原检测试剂盒，以及降钙素原试剂盒的制备方法。为了解决上述问题，本专利技术采用了以下的技术方案: 一种降钙素原乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，包括试剂Rl和试剂R2两种组分，所述试剂Rl主要由缓冲液1、稳定剂1、防腐剂1、EDTA、增凝剂和保护剂I组成；所述试剂R2主要由交联PCT抗体的聚苯乙烯胶乳微球、缓冲液2、稳定剂2、防腐剂2、保护剂2组成，其中聚苯乙烯胶乳微球与PCT抗体之间以共价交联方式连接。本技术方案中的防腐剂I和2是指可以抑制试剂中细菌和微生物污染的一类试齐U，对试剂具有防腐杀菌的作用。试剂R2中的保护剂一类能够保护胶乳颗粒表面的抗体的试剂。稳定剂I和2可以保持试剂内的电荷平衡。本技术方案中的降钙素原胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，将PCT抗体交联在聚苯乙烯胶乳微球表面，当血液中的PCT与PCT抗体反应时，带动聚苯乙烯胶乳微球聚集产生一定浊度，而浊度与血液中的PCT含量在一定范围成正比，可以用全自动生化仪在400-800nm波长下检测血液中PCT的含量。作为优化，所述试剂Rl中的缓冲液I选自Ifepes缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼砂缓冲液中的一种或几种，其pH为7.0?9.0，浓度为25?500mmol/L ;所述试剂R2中的缓冲液2选自PBS缓冲液、硼砂缓冲液、甘氨酸缓冲液、Ifepes缓冲液、GOODS缓冲液、MOPS缓冲液中的一种或几种，其pH为7.0?9.0，浓度为25 ?500mmol/L。作为优化，所述试剂Rl中的稳定剂I选自KCl、NaCl、CaCl中的一种或者几种，其质量浓度为0.5%?10% ;所述试剂R2中的稳定剂2采用离子稳定剂和悬浮稳定剂配合使用；其中离子稳定剂为NaCl、KCl、Na2C03、Na2SCM或者K2S04，悬浮稳定剂为PEG8000、蔗糖、甘油或者葡萄糖。上述技术方案中稳定剂I选自KCl、NaCl、CaCl中的一种或者几种，其质量浓度为0.5%?10%，这样的稳定剂I具有价格低廉、原料易得的优点。稳定剂2采用离子稳定剂和悬浮稳定剂配合使用；其中离子稳定剂为NaCl、KCl、Na2C03、Na2SCM或者K2S04，悬浮稳定剂为PEG8000、蔗糖、甘油或者葡萄糖；其中优选NaCl和蔗糖配合使用，这样可以保持体系长期稳定。作为优化，所述试剂Rl中的防腐剂I为叠氮钠、硫柳汞或者ProClin300 ;所述试剂R2中的防腐剂2为叠氮钠、硫柳汞或ProClin300。这样的防腐剂I和2具有优良的防腐杀菌性能。作为优化，所述试剂Rl中的增凝剂为PEG8000或者葡聚糖。优选PEG8000，是由于PEG8000属于非离子型水溶性聚合物，在水中的溶解性比较大，可以调节试剂Rl的粘度，促进抗原和抗体分子结合为复合物。作为优化，所述试剂R2中的聚苯乙烯乳胶微球的表面官能团为氨基、羧基、酰肼、醒基或环氧基，聚苯乙烯乳胶微球的的粒径在100?600nm。优选表面官能团为羧基的聚苯乙烯胶乳微球，这是由于聚苯乙烯胶乳微球表面为羧基的官能团很容易被EDC活化，从而快速与PCT抗体结合，增加偶联效果，保证测试结果的稳定性及准确性。作为优化，所述试剂R2中的PCT抗体为鼠抗人PCT抗体、山羊抗人降钙素原IgG抗体或兔抗人降钙素原IgG抗体的一种或者几种。作为优化，所述试剂Rl中的保护剂I为牛血清白蛋白；所述试剂R2中的保护剂2为牛血清白蛋白。本技术方案中的保护剂I和2可以保护聚苯乙烯胶乳颗粒表面的PCT抗体的活性。作为优化,所述EDTA的浓度为10?100mmol/L。作为优化，所述降钙素原乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒，采用如下方法制备: (1)试剂Rl的制备: 在缓冲液I中加入稳定剂1、增凝剂、防腐剂1、保护剂I和EDTA，搅拌混合均匀，即得试剂Rl ; (2)试剂R2的制备: 步骤一:将PCT抗体进行4°C透析，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种降钙素原乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2两种组分，所述试剂R1主要由缓冲液1、稳定剂1、防腐剂1、EDTA、增凝剂和保护剂1组成；所述试剂R2主要由交联PCT抗体的聚苯乙烯胶乳微球、缓冲液2、稳定剂2、防腐剂2、保护剂2组成，其中聚苯乙烯胶乳微球与PCT抗体之间以共价交联方式连接。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李民友，潘能科，高昂，
申请(专利权)人：重庆中元生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：