本发明专利技术公开了一株降解牛奶过敏原的地衣芽孢杆菌，于2013年9月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC?NO：M2013451，经发酵优化产酶活力达到3500U/ml。此菌株是从土壤中筛选得到,具体通过微生物的富集，目的菌株的分离，透明圈法筛选得到，利用SDS-PAGE验证菌株具有降解过敏原的效果。该菌株能够高效降解牛奶中主要过敏原αs1-酪蛋白，并通过纯化最终获得纯酶液，在一定时间内可以特异性降解牛奶过敏原，为制备脱敏奶粉提供了一种新的方法，同时有效地保护了牛奶中其他的营养成分。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一株降解牛奶过敏原的地衣芽孢杆菌，于2013年9月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC?NO：M2013451，经发酵优化产酶活力达到3500U/ml。此菌株是从土壤中筛选得到,具体通过微生物的富集，目的菌株的分离，透明圈法筛选得到，利用SDS-PAGE验证菌株具有降解过敏原的效果。该菌株能够高效降解牛奶中主要过敏原αs1-酪蛋白，并通过纯化最终获得纯酶液，在一定时间内可以特异性降解牛奶过敏原，为制备脱敏奶粉提供了一种新的方法，同时有效地保护了牛奶中其他的营养成分。【专利说明】一株降解牛奶过敏原的地衣芽孢杆菌及其应用
本专利技术涉及到一株降解牛奶过敏原的地衣芽孢杆菌及其应用，特别是牛奶过敏原a S1-酪蛋白的地衣芽孢杆菌。
技术介绍
牛奶含有丰富的营养物质，包括30多种蛋白，为酪蛋白和乳清蛋白。其中乳清蛋白主要包括a-乳白蛋白、(6-乳球蛋白、牛乳血清白蛋白、乳铁蛋白、免疫球蛋白等，这些蛋白都具有潜在致敏性。目前普遍认为酪蛋白、P -乳球蛋白、a -乳白蛋白是主要过敏原。对大多数婴幼儿而言，由于生长发育初期需要补充大量的营养，牛奶就成为了营养摄入的第一选择。但是在3岁以下的儿童中牛奶过敏反应达到25%，其中酪蛋白是牛奶中存在的主要过敏原，约占牛奶总蛋白含量的80%，酪蛋白包含有a s1-(32%)，aS2-(10%),(6-(28%)和K-酪蛋白(10%)。由于母乳中不含有a s1-酪蛋白，因而其致敏性最强。目前如何降解牛奶中的过敏原ct sl-casein就成为了一个急需解决的问题。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供了一种优先降解牛奶过敏原的菌株CN1，命名为命名为地衣芽孢杆菌Bacillus LicheniformisCNl，于2013年9月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC N0:M2013451，保藏地址为:中国武汉、武汉大学。所述地衣芽孢杆菌能够降解牛奶过敏原a S1-酪蛋白。用于培养权利要求1所述地衣芽孢杆菌的最佳培养基:可溶性淀粉3% (w/v),牛肉膏 0.6% (w/v),KH2P040.05% (w/v), K2HP04.0.05% (w/v)pH9.0，最佳培养条件:37°C下培养24h，接种量6%。本专利技术还提供了一种应用所述地衣芽孢杆菌降解牛奶过敏原a S1-酪蛋白的方法，将所述地衣芽孢杆菌发酵上清稀释后添加到2%的脱脂牛奶中。优选方案为:将纯酶液稀释20倍后，以4%的比例添加到2%的脱脂牛奶中，在20min内能够特异性降解牛奶过敏原a sl_酪蛋白。分离所述地衣芽孢杆菌蛋白酶的方法，在地衣芽孢杆菌发酵培养后利用硫酸铵沉淀、疏水柱Phenyl-FFUOKDa超滤管超滤获得一定纯度的蛋白酶。所述蛋白酶专一丨丨生降解牛奶过敏原a S1-酪蛋白。使用本专利技术提供的菌株发酵24h后酶活可以达到3500U/mL。本专利技术将发酵液中目的酶进行纯化的方法也属于保护的内容。其中纯酶对牛奶过敏原a S1-酪蛋白的降解效果更为明显，特异性降解牛奶过敏原a S1-酪蛋白。【专利附图】【附图说明】图1为将发酵上清液稀释20倍后以8%的比例添加到含2%的脱脂牛奶中定时反应后取样进行SDS-PAGE图(1:2%的脱脂牛奶，2—8反应时间在5min、10min、20min、30min、40min、50min、60min后高温终止反应)。图2为将纯酶液稀释20倍后以4%比例添加到含2%的脱脂牛奶中定时反应后取样进行 SDS-PAGE 图(1: 2% 的脱脂牛奶，2—8 反应时间在 5min、lOmin、15min、20min、25min、30min、35min后高温终止反应)。图3为地衣芽孢杆菌的16S rDNA序列构建的进化树。【具体实施方式】实施例1特异性降解牛奶过敏原a s1-酪蛋白菌株的定性筛选1、来源:菜园土壤中筛选2、培养方法:将采样所得土壤IOg,加入90ml无菌生理盐水，摇床(200rpm)震荡6h。3、筛选:将土壤菌悬液稀释不同倍数后涂布脱脂牛奶平板上，37°C培养，选取可以产生透明圈的菌株进行酪蛋白平板复筛，最终获得目的菌株，其16S rDNA分析结果确定为地衣芽孢杆菌，命名为CNl。实施例2蛋白酶酶活测定1、L-酪氨酸标准曲线的绘制L-酪氨酸标准溶液:按表1配制表1【权利要求】1.一株降解牛奶过敏原的地衣芽孢杆菌，于2013年9月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2013451，经发酵优化产酶活力达到3500U/ml。2.根据权利要求1所述的地衣芽孢杆菌，其特征在于能有效降解牛奶过敏原asl-酪蛋白。3. 用于培养权利要求1或2所述地衣芽孢杆菌的最佳培养基为:可溶性淀粉3%(w/v)，牛肉膏 0.6% (w/v), KH2PO40.05% (w/v)，K2HPO4.0.05% (w/v) ρΗ9.0。最佳培养条件:37°C下培养24h，接种量6%。4.用于培养权利要求1或2所述地衣芽孢杆菌的最佳培养条件为:37°C下培养24h，接种量6% ο5.应用权利要求1所述地衣芽孢杆菌降解牛奶过敏原aS1-酪蛋白的方法，其特征在于，将所述地衣芽孢杆菌发酵上清稀释后添加到2%的脱脂牛奶中。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述地衣芽孢杆菌发酵上清稀释20倍后，以4%的比例添加到2%的脱脂牛奶中，在20min内能够特异性降解牛奶过敏原a s1-酪蛋白。7.分离权利要求1-3任一所述地衣芽孢杆菌蛋白酶的方法，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌发酵培养后利用硫酸铵沉淀、疏水柱Phenyl-FF、IOKDa超滤管超滤后获得一定纯度的蛋白酶。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于专一性降解牛奶过敏原αS1-酪蛋白。【文档编号】C12N1/20GK103525733SQ201310483057【公开日】2014年1月22日 申请日期:2013年10月15日 优先权日:2013年10月15日 【专利技术者】陈坚, 汝成业, 张娟, 堵国成 申请人:江南大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株降解牛奶过敏原的地衣芽孢杆菌，于2013年9月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC?NO：M2013451，经发酵优化产酶活力达到3500U/ml。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈坚，汝成业，张娟，堵国成，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：
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