本发明专利技术涉及一株丁香假单胞菌（Pseudomonas?syringae），命名为ZY-1，微生物保藏号为CGMCC?No.7906，保藏日期为2013年07月10号，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。以及该菌株的代谢产物对植物的病害的治愈功能，本发明专利技术具有功效明显、治愈时间短、对环境无污染、操作简便等优点。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一株丁香假单胞菌（Pseudomonas?syringae），命名为ZY-1，微生物保藏号为CGMCC?No.7906，保藏日期为2013年07月10号，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。以及该菌株的代谢产物对植物的病害的治愈功能，本专利技术具有功效明显、治愈时间短、对环境无污染、操作简便等优点。【专利说明】一株丁香假单胞菌及其在番茄灰霉病防治中的应用
本专利技术涉及一株丁香假单胞菌，尤其涉及该菌株在番茄灰霉病防治中的应用，属于生物
。
技术介绍
番爺灰霉病是一种常见且危害较重的真菌病害，除危害番爺外，还可危害爺子、辣椒、黄瓜等20多种作物。低温、连续阴雨天气多的年份危害严重，发病严重时造成茎叶枯死和大量的烂花、烂果，直接影响产量。目前常用的防治措施就是摘取老叶，加大通风，降低空气湿度。药物方面主要是利用万霉灵粉剂、百菌清烟剂熏棚或是用甲霜灵可湿性粉，但是无论用哪种方法其治愈效果都不理想。为了寻求安全有效的防治措施，人们越来越关注生物防治。生物防治是利用一种或多种生物(除人类外)或其代谢产物来降低植物病原物的数量或抑制其致病能力而减轻植物病害的一类措施。与传统的防治技术相比，生物防治技术具有不污染环境、对人和其他生物安全、防治作用持久、产品无残留、对病虫的杀伤特异性强，易于同其他植物保护措施协调配合并能节约能源等优点，必将在有害生物综合防治中发挥着越来越重要的作用。到目前为止，真菌、酵母菌、细菌、放线菌都可用于生物防治。例如:利用稻黑孢菌46和链格孢菌的代谢产物进行生物防治。利用细菌制约有害微生物是开发、利用微生物资源的重要研究领域之一，也是植物病害防治中最具有潜力、应用前景最为广阔的有效途径之一。其主要优势在于:繁殖速度快、对病原菌的作用方式较广、培养成本低廉，而且在培养时还会产生很多的抗菌物质，如细菌素、抗生素、胞外裂解酶、脂肽类等多种形式，有些细菌不仅能防治病害而且可以增加作物产量。近年来，国内外的许多学者都在利用有益的微生物或其代谢产物来抑制病原微生物，使生物防治发展迅速，其中假单胞菌在植物病害防治中起到了非常重要的作用。非致病假单胞菌活跃于植物根际，属于植物根际促生菌一类，植物根际假单胞菌已被应用在谷物种子或土壤中以抑制谷物病原菌的生长。非致病假单胞菌生物防治作用主要通过根际营养竞争、分泌降解微生物的酶及抗生作用等实现。分离自小麦全蚀病自然衰退土壤的荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens) 2P24能产生多种抗菌物质,可以有效防治多种植物病原真菌、细菌引起的土传病害。随着人们对环境保护意识的增强，对绿色食品需求的增加，利用微生物代谢产物替代化学药物防治农作物病虫害将是今后农业发展的重点，它必将有力地推进生防事业的发展，造福人类。
技术实现思路
本专利技术针对番爺灰霉的生物防治问题,提供了一种丁香假单胞菌(P seudomonassyringae) ZY-1， 及利用该菌株发酵培养液防治植物灰霉病害的方法。本专利技术丁香假单胞菌的分离、筛选与鉴定:1、从黑龙江伊春五营森林公园土壤样品中分离、纯化后获得一株具有抗真菌活性的细菌；经微生物分类学鉴定为丁香假单胞菌(Pseudomonas sp.)，命名为丁香假单胞菌(Pseudomonas sp.)ZY-1。所述菌株微生物保藏号为:CGMCC N0.7906，保藏日期2013年07月10号,其分类命名为:假单胞菌科假单胞菌属丁香假单胞菌Pseudomonas sp.,保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所。2、本专利技术所述丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)的分离和纯化(I)菌株的分离:将IOg 土壤样品加入到90ml无菌水中，用10倍稀释法分别配置10_5、10_6、10_7g/ml的土壤悬液，分别涂布到分离培养基(分离培养基即为LB固体培养基)上，32°C培养2天，观察出现抑菌圈的菌落，测定溶真菌圈直径(D)、菌落直径(d)，根据能否产生溶菌圈与D/d值大小来初步确定菌株的抑菌能力，将D/d ^ 1.5的菌株在LB培养基上划线纯化、32°C培养I天；(2)菌株的纯化:接种环挑取上述分离菌株培养物，划线接种到LB固体培养基平板上，32°C培养，待出现单菌落后，重复上述操作2-3次，直到出现单菌落。将单菌落培养物接种至无菌LB试管斜面培养基，32°C培养I天后，于4°C下保存备用。3、本专利技术所述丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)的分离和纯化后经鉴定，具有如下生物学特征:(I)菌株形态特征:该菌株单菌落直径小于1mm，在固体培养基上的菌落呈白色，圆形，较小，表面光滑，不透明，易挑取，菌落不粘稠，菌体细胞在电镜下呈短杆状，有鞭毛，革兰氏阴性。在32°C条件下最适生长，通过电镜观察细菌的形态，该细菌是杆状，细菌的大小是 1.3 μ mX 3.7 μ m。(2)菌株生理生化特征:革兰氏染色阴性；能够液化明胶；脂酶实验呈阴性；能利用D-葡萄糖产酸；氧化酶实验呈阴性；甲基红实验呈阴性；V-P实验结果呈阴性。(3)菌株分子生物学特征:菌株ZY-1的16SrRNA共测出1436个碱基，在核酸数据库 GenBank(NCBI,网址:http://www.ncb1.nlm.nih.gov)登录号为 KC355362,16S rRNA 的序列见SEQ N0.1。4、防治番爺灰霉真菌病害的丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae) ZY-1菌株的代谢产物制备，包括以下步骤:(1)菌种的活化培养:将分离保存的丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae) ZY-1菌株转接到LB固体培养基上，32°C ±1°C条件下培养，培养24h得到活化后的菌种，用直径4mm打孔器打孔获得菌饼，供接种用；(2)发酵培养:发酵培养基(g/L)为2.05%蛋白胨、1.5%甘油、0.8%MgS04.7H20、0.25%K2HP04，每个250ml三角瓶装发酵培养液100ml ;配置后在121°C灭菌30min，冷却至35°C时，无菌条件下接种该细菌，在32°C ±1°C条件下，摇床转速110r/min，发酵培养24h。发酵液经过旋转蒸发仪60°C浓缩2h后4°C冰箱保存备用，用于后续的抗性检测。本专利技术的有益效果:( I)本专利技术是从土壤中分离筛选出代谢产物对部分植物真菌病害尤其是番茄灰霉病害具有较强的抑制效果的丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)ZY_1,为生物防治提供了一种微生物菌株；(2)本专利技术是利用丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae) ZY-1液体发酵培养后获得的发酵液，该发酵液经浓缩后应用于植物真菌病害的生物防治，为微生物应用于生物防治的开发提供了新的途径。【专利附图】【附图说明】图1为丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae) ZY-1 的电镜图；图2为丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae) ZY-1的生长曲线图；图3为丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)ZY-1的抗番爺灰霉图本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株丁香假单胞菌（Pseudomonas?syringae），命名为ZY?1，微生物保藏号为CGMCC?No.7906，保藏日期为2013年07月10号，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：曲娟娟，金羽，于敏，张春苗，黎扣扣，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：
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