【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种。
技术介绍
卵母细胞又称为卵子，是一个新的生命个体发生发育的前提和基础。随着现代生命科学的发展，卵母细胞是家畜新品种培育、转基因育种和品种改良等方面的重要的材料。对于人类生殖健康而言，卵母细胞的体外成熟培养是试管婴儿诞生的基础。因此，卵母细胞的体外培养技术是现代生殖发育的核心技术。卵母细胞在体内存在于卵巢上，出生后的动物卵巢上存在的卵母细胞停滞于生发泡(germinal vesicle, GV)期，不再增殖且数量有限，伴随着年龄的增长，数量不断减少，并最终枯竭，卵母细胞的体内发生发育特点也就决定了卵子的稀有珍贵。在正常生长发育的情况下，卵母细胞外周包裹有大量的卵丘细胞，卵丘细胞在卵母细胞开始形成时就已颗粒细胞的形式存在，伴随着卵母细胞的生长和发育，其数量逐步增多，并且在卵母细胞生长发育的过程中，分泌各种物质，同卵母细胞进行物质和信息的交换，从而调控卵母细胞的发生发育，因此，卵丘细胞在卵母细胞外围的存在质量将直接影响卵母细胞发育的状态和结果。维甲酸(retinoic acid, RA)是体内维生素A的代谢中间产物，主要影响骨的生长和促进上皮细胞...
【技术保护点】
山羊卵丘细胞体外培养抗凋亡处理方法，包括以下步骤：（1）卵丘卵母细胞复合物体外成熟培养卵巢采集于屠宰场宰杀后的山羊，分离出2～8mm卵泡中的卵丘卵母细胞复合物；挑取有3～5层致密卵丘包裹的卵母细胞用于成熟培养；挑取的卵丘卵母细胞复合物经操作液清洗后，置于成熟液中，培养时，将维甲酸添加到成熟液中，50～80个卵丘卵母细胞复合物/孔，覆盖矿物油，于饱和湿度下，38.5°C培养；所述操作液组分为TCM199?+?5%?FBS?+?100?IU/ml?青霉素?+?0.1?mg/ml?链霉素；所述成熟液组分为TCM199+?10%?FBS?+?10?IU/ml?PMSG?+?5?IU...
【技术特征摘要】
1.山羊卵丘细胞体外培养抗凋亡处理方法，包括以下步骤: (1)卵丘卵母细胞复合物体外成熟培养 卵巢采集于屠宰场宰杀后的山羊，分离出2 8mm卵泡中的卵丘卵母细胞复合物；挑取有3 5层致密卵丘包裹的卵母细胞用于成熟培养；挑取的卵丘卵母细胞复合物经操作液清洗后，置于成熟液中，培养时，将维甲酸添加到成熟液中，50 80个卵丘卵母细胞复合物/孔，覆盖矿物油，于饱和湿度下，38.5° C培养；所述操作液组分为TCM199 + 5% FBS +100 IU/ml青霉素+ 0.1 mg/ml链霉素；所述成熟液组分为TCM199+ 10% FBS + 10 IU/ml PMSG + 5 I U/ml hCG + 0.1 mg/ml L-半胱;氛酸 + 10ng/ml EGF ； (2)卵丘细胞凋亡相关基因表达检测 成熟培养后的卵丘卵母细胞复合物经透明质酸酶液滴中脱去卵丘细胞；收集卵丘细胞置于1.5mI离心管中，离心去上清后，提取卵丘细胞总RNA ;将总RNA反转录至cDNA ;经荧光定量PCR分析凋亡相关基因表达水平； (3)卵丘细胞凋亡末端...
【专利技术属性】
技术研发人员：蒲勇，曹鸿国，章孝荣，王张帆，卞雅尼，张运海，刘亚，李运生，方富贵，陶勇，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：
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