【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种小鼠裸卵体外成熟方法及小鼠裸卵体外成熟培养液。
技术介绍
卵母细胞又称为卵子，是一个新的生命个体发生发育的前提和基础。随着现代生命科学的发展，卵母细胞是新品种培育、转基因育种和品种改良等方面的重要的材料。对于人类生殖健康而言，卵母细胞的体外成熟培养是试管婴儿诞生的基础。因此，卵母细胞的体外培养技术是现代生殖发育的核心技术。卵母细胞在体内存在于卵巢上，出生后的动物卵巢上存在的卵母细胞停滞于生发泡(germinal vesicle, GV)期，不再增殖且数量有限，伴随着年龄的增长，数量不断减少，并最终枯竭。因此，卵母细胞不像雄性生殖细胞精子具有数量庞大和源源不断发生的特点，卵母细胞的体内发生发育特点也就决定了卵子的稀有珍贵。在正常生长发育的情况下，卵母细胞外周包裹有大量的卵丘细胞，自然排卵时，卵母细胞连同外围的卵丘细胞一起排入输卵管内等待同精子结合。在进行胚胎工程操作或辅助生殖技术应用时，由于从卵巢上直接抽取的卵母细胞还未达到完全成熟状态，其中一半以上的卵母细胞周围未完全由卵丘细胞包裹，临床应用中把未完全被卵丘细胞包裹的卵母细胞称为裸卵。目前，由于...
【技术保护点】
小鼠裸卵体外成熟方法，包括以下步骤：（1）小鼠裸卵的分离培养实验动物为性成熟后小鼠，采用颈部脱臼处死小鼠，取出卵巢组织，清洗血迹，分离除去多余的脂肪组织，将卵巢放置在裸卵洗涤培养液中，体视显微镜下，用分离针轻轻划破卵巢表面有腔卵泡，处于不同发育状态的裸卵进入到裸卵洗涤培养液中，收集裸卵洗涤后随机分组，用裸卵体外成熟培养液进行37℃培养；（2）小鼠裸卵的成熟检测小鼠裸卵体外成熟培养24小时后，在显微镜下观察记录培养成熟裸卵排出第一极体情况，并且要求裸卵形态正常，裸卵胞质颜色光泽均一；成熟培养后小鼠裸卵用多聚甲醛固定液固定，经磷酸盐缓冲液洗涤，TrionX?100细胞膜通透，含...
【技术特征摘要】
1.小鼠裸卵体外成熟方法，包括以下步骤: (1)小鼠裸卵的分离培养 实验动物为性成熟后小鼠，采用颈部脱臼处死小鼠，取出卵巢组织，清洗血迹，分离除去多余的脂肪组织，将卵巢放置在裸卵洗涤培养液中，体视显微镜下，用分离针轻轻划破卵巢表面有腔卵泡，处于不同发育状态的裸卵进入到裸卵洗涤培养液中，收集裸卵洗涤后随机分组，用裸卵体外成熟培养液进行37°c培养； (2)小鼠裸卵的成熟检测 小鼠裸卵体外成熟培养24小时后，在显微镜下观察记录培养成熟裸卵排出第一极体情况，并且要求裸卵形态正常，裸卵胞质颜色光泽均一； 成熟培养后小鼠裸卵用多聚甲醛固定液固定，经磷酸盐缓冲液洗涤，TrionX-1OO细胞膜通透，含牛血清白蛋白磷酸盐缓冲液封闭，通过免疫细胞组织化学方法，用抗微管蛋白的单克隆抗体监测成 熟裸卵纺锤体的微管蛋白发育状态，裸卵内细胞核遗传物质DNA分裂分离形成第一极体的状况，用细胞核遗传物质DNA特异性染料DAPI染...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨盼，曹鸿国，章孝荣，张飞，张运海，刘亚，李运生，陶勇，方富贵，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：
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