一种琼脂糖免疫磁性微球的制备方法及其应用技术

技术编号:8953384 阅读:294 留言:0更新日期:2013-07-24 19:23
一种琼脂糖免疫磁性微球的制备方法及其应用,涉及一种微球的制备方法及其应用。本发明专利技术是要解决现有纯化的单克隆抗体的过程复杂,收率低,成本高且偶联剂有剧毒的技术问题。制备方法:一、制备油酸铁前驱体;二、制备磁流体;三、制备油相和水相;四、制备琼脂糖磁性微球;五、制备活化交联的琼脂糖磁性微球;六、制备接入间隔臂的琼脂糖磁性微球;七、制备琼脂糖免疫磁性微球。本发明专利技术的一种琼脂糖免疫磁性微球用于纯化基因工程重组曲妥珠单克隆抗体。本发明专利技术制备琼脂糖免疫磁性微球应用于单克隆抗体分离纯化领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种微球的制备方法及其应用。
技术介绍
单克隆抗体是指由单一克隆杂交瘤细胞产生的只识别某一特定抗原表位的同源抗体。是经过人工制备的一类特殊抗体,其本质是球蛋白,具有球蛋白的各种理化性质、空间结构和生物学活性,具有可变区和恒定区:可变区结合抗原,形成抗原抗体复合物;恒定区有补体结合位点,介导补体发挥作用,形成攻膜复合物,杀伤变异的细胞.单克隆抗体具有一般抗体的性质,是由B细胞增殖分化为浆细胞时所产生的一类球蛋白,存在于体液中,具有免疫功能,能够介导体液免疫,与相应抗原(如病原体)发生特异性结合,并在其他免疫分子和细胞的参入下发挥免疫效应.。单克隆抗体除了具有抗体的一般性质外,还具有其特殊的优点:理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强、便于人为处理和质量控制,并且来源容易、易于体外大量制备和纯化等优点。这些优点使它一问世就受到高度重视,并广泛应用于生物学和医学研究领域,有广阔的发展前景。IgG是人体免疫球蛋白的一种,是唯一可以通过胎盘的免疫球蛋白,是血清主要的抗体成分,约占血清的75%。其中40 50%分布于血清中,其余的分布在各种组织中。IgG的功能作用主本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种琼脂糖免疫磁性微球的制备方法,其特征在于琼脂糖免疫磁性微球的制备方法是按以下步骤进行:一、取10~15g的FeCl3·6H2O和30~50g的油酸纳溶解在混合溶剂中,加热至60~80℃,保温4~6h,反应完成后,取上层有机溶剂用蒸馏水洗涤三次,旋蒸去除有机溶剂,得到油酸铁前驱体;其中,混合溶剂由乙醇、蒸馏水和正己烷按体积比60~80∶40~60∶120~140混合而成;二、室温下,将30~40g的油酸、5~8g的步骤一得到的油酸铁前驱体和100~200g的十八烯混合,再以每分钟3~5℃的升温速度加热到320~340℃,并保温20~50min,然后自然冷却至室温,加入400~600mL的无水...

【技术特征摘要】
1.一种琼脂糖免疫磁性微球的制备方法,其特征在于琼脂糖免疫磁性微球的制备方法是按以下步骤进行: 一、取10 15g的FeC13.6H20和30 50g的油酸纳溶解在混合溶剂中,加热至60 80°C,保温4 6h,反应完成后,取上层有机溶剂用蒸馏水洗涤三次,旋蒸去除有机溶齐U,得到油酸铁前驱体;其中,混合溶剂由乙醇、蒸馏水和正己烷按体积比60 80: 40 60: 120 140混合而成; 二、室温下,将30 40g的油酸、5 8g的步骤一得到的油酸铁前驱体和100 200g的十八烯混合,再以每分钟3 5°C的升温速度加热到320 340°C,并保温20 50min,然后自然冷却至室温,加入400 600mL的无水乙醇,在3000 5000rpm的转速下离心分离10 15min,得到磁流体; 三、称取20 50mL的液体石腊、5 IOmL的石油醚以及I 2g的表面活性剂span-80,预热至60 80°C,作为油相;将0.2 1.0g的琼脂糖,0.5 1.2g的氯化钠加入到5 15mL的蒸馏水中,加热溶解,配制琼脂糖质量浓度为3%的琼脂糖水溶液作为水相; 四、取0.05 0.5g的步骤二得到的磁流体加入到步骤三得到的水相中,超声分散后,转移到步骤三得到的油相中,在3000 5000rpm的转速下搅拌10 30min,然后迅速冷却至室温,得到琼脂糖磁性微球; 五、取4 6g的步骤四得到的琼脂糖磁性微球加入到混合溶液中,室温下反应20 40min,得到水解后的琼脂糖磁性微球溶液,然后向琼脂糖磁性微球溶液中加入二甲基亚砜和环氧氯丙烷,至二甲基亚砜的体积分数为40 % 60 %,环氧氯丙烷的体积分数为20 %,在20 40°C恒温震荡反应8 12h,得到活化交联的琼脂糖磁性微球;其中,混合溶液由9 Ilmg的硼氢化钠和8 IOmL的氢氧化钠溶液组成; 六、取4 6g的步骤五得到的活化交联的琼脂糖磁性微球,加入8 12mL的氨水,室温下反应4 6h,将氨解后的微球洗净抽干,然后加入9 12mL的戊二醛,室温下震荡反应I 3h,用蒸馏水洗净过量的戊二醛,得到接入间隔臂的琼脂糖磁性微球; 七、取2 4g的步骤六得到的接入间隔...

【专利技术属性】
技术研发人员:赵九蓬侯雪梅李垚马丽华潘磊赵长杰
申请(专利权)人:哈尔滨益材新材料有限公司
类型:发明
国别省市:

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