本发明专利技术公开了蛋白及其组合物与在制备预防、诊断或治疗EHEC感染产品中的应用。本发明专利技术提供如下A-D中任一所示的物质在制备具有如下1）和/或2）功能的产品中的应用：1）预防、诊断和/或治疗由病原菌EHEC感染或引发的疾病；2）降低病原菌EHEC对肠道感染损伤。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术通过基因工程技术获取Z0390蛋白和Z4191蛋白，体内外评估蛋白的免疫学功能等实验研究，证实这两种蛋白及其组合物是EHEC病原菌重要的核心抗原，可作为抗原试剂用于感染诊断；可以防治O157：H7感染，表明该蛋白可以作为针对EHEC引发疾病的疫苗或药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种蛋白及其组合物与在制备预防、诊断或治疗EHEC感染产品中的应用。
技术介绍
肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhage E.coli, EHEC)是毒力最强、致病性也最强的大肠杆菌，受到广泛的关注。EHEC感染可使人患腹泻、出血性结肠炎(HC)，还可引发溶血性尿毒综合症(HUS)及血栓性血小板减少紫癜(TTP)等严重并发症，严重者可导致死亡，致死率达5% 10%。2011年4月，德国暴发了肠出血性大肠杆菌0104:H4感染和溶血性尿毒综合征(HUS)疫情，蔓延到欧洲和北美洲的16个国家。同年四、五月间，日本富山地区暴发了新感染疫情，血清型为0111，某些病例在引起HUS之后，出现了神经症状，并发弥散型血管内凝血和脑病。在EHEC中，致病性强、危害大的还有0157:H7。自1975年被首次分离、1982年被确认为致病菌以来的20多年中，世界各地包括中国都有不同规模的暴发流行。1999年在我国江苏、安徽两省有过大规模暴发流行，患者超过2万例，死亡177例。EHEC感染已经成为欧美国家儿童肾衰的首位病因，对人们的健康构成了巨大威胁。另外，作为一种重要的人兽共患病病原体，EHEC病原菌可长期驻留于牛、羊、猪、鸡等家畜家禽的肠道中，造成动物的腹泻，并污染畜禽的肉奶蛋制品以及水源和农作物等，给农牧业生产造成巨大的损失。因此，EHEC感染已经成为全球性的公共卫生问题。目前，临床针对EHEC感染主要采取对症治疗，因为抗生素治疗具有加剧病情的危险性而被谨慎使用，没有可以使用的疫苗和特异治疗药物。如果能发现和获得病原菌的核心抗原或优势保护性抗原，就可以进一步发展新型的疫苗、治疗药物和诊断试剂。目前，由多 抗原组分制备多价重组蛋白疫苗是EHEC疫苗发展的热点，备受关注。其研制成功的关键在于选择强免疫原性的候选抗原，而已经被证实具有良好免疫原性和一定保护力的有Intimin, Tir, EspB, EspA, Hly和外毒素Stxs抗原组分等。不同抗原组分的组合尝试也一直在进行=PotterAA等研制以Tir和EspA为免疫原制备的防止牛感染EHEC 0157:H7的新型疫苗，试验显示有效率达59%。易勇等利用基因重组技术分别构建了Stx2B-1ntiminC300融合蛋白疫苗，以致死剂量的EHEC 0157:H7菌超声破菌液对免疫小鼠进行攻毒实验，免疫保护作用为65%，后又相继构建了 Intimin、EspA及Hly等多价亚单位融合基因工程疫苗，在小鼠定植和致死动物模型中的实验证明同时具有抗定植和抗毒素的作用。本专利技术人也曾先后制备 Intimin、StxIB、Stx2B、Stx2B_StxIB、Stx2B_StxIB-1ntimin以及SAmB等单一组分和多组分抗原，还新发现了 Paa抗原，并证实均有不同程度的抗EHEC0157:H7感染的能力。尽管如此，由于EHEC病原菌致病岛涉及基因复杂多样，很多毒力因子的功能尚未阐明。虽然Genbank中已公开了大量的EHEC病原菌的全基因组，但是基因组的功能注释并不完全，大量的编码蛋白的功能没有得到确认，特别是可用于诊断和防治药物开发的功能蛋白还没有全面被发现，还有很大空间去鉴定发现新的具有临床应用价值的功能分子。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供如下A-D中任一所示的物质的新用途。本专利技术提供的如下A-D中任一所示的物质在制备具有如下I)和/或2)功能的产品中的应用:I)预防和/或治疗由病原菌EHEC感染或引发的疾病；2)降低病原菌EHEC对肠道感染损伤；A、Z0390蛋白、B、含有Z0390蛋白的蛋白组合物、C、含有Z0390蛋白的融合蛋白、D、含有Z0390蛋白的融合蛋白的蛋白组合物；所述Z0390蛋白为如下(I)- (3)中任一所示的蛋白:(I)序列表中 的序列2所示的氨基酸组成的蛋白质；(2)序列2自N’末端第1-370位氨基酸组成的蛋白质；(3)将I)或2)所示蛋白的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质。上述含有Z0390蛋白的融合的蛋白为由Z0390蛋白和其他蛋白形成的融合蛋白。上述应用中，所述含有Z0390蛋白的蛋白组合物为由所述Z0390蛋白和其他蛋白组成的组合物，所述含有Z0390蛋白的融合蛋白的蛋白组合物为由所述含有Z0390蛋白的融合蛋白和其他蛋白组成的组合物；所述其他蛋白为修饰蛋白、标签蛋白或功能蛋白；所述含有Z0390蛋白的蛋白组合物为如下a-c中任一种:a为由所述Z0390蛋白和Z4191蛋白组成的组合物、b为由所述Z0390蛋白和Intimin蛋白组成的组合物、c为由所述Z0390和SAmB蛋白组成的组合物；所述Z4191蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列4或序列4自N’末端第1_190位氨基酸；所述Intimin蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列5 ；所述SAmB蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列6。上述应用中，a所示的蛋白组合物中，所述Z0390蛋白和所述Z4191蛋白的质量比为 1:1 ;b所示的蛋白组合物中，所述Z0390蛋白和所述Intimin蛋白的质量比为1:1 ；c所示的蛋白组合物中，所述Z0390蛋白和所述SAmB蛋白的质量比为1:1 ；所述产品为疫苗或药物。上述应用中，所述肠道为人或动物肠道；所述病原菌EHEC为EHEC 0157:H7。上述应用中的所述A-D中任一所示的物质作为靶标或检测标志物在开发或制备诊断感染病原菌EHEC的产品中的应用。本专利技术的第二个目的是提供一种产品。本专利技术提供的产品，其活性成分为上述A-D中任一所示的物质；所述产品为具有如下I)或2)中至少一种功能的产品:I)预防、诊断和/或治疗由病原菌EHEC引发疾病；2)降低病原菌EHEC对肠道感染损伤。Z0390蛋白作为抗原制备的抗体也是本专利技术保护的范围；或Z4191蛋白作为抗原制备的抗体也是本专利技术保护的范围；所述Z0390蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列2或序列2自N’末端第1_370位氨基酸；所述Z4191蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列4或序列4自N’末端第1_190位氨基酸。上述抗体为多克隆抗体或单克隆抗体，在本专利技术的实施例中为多克隆抗体。检测上述Z 0390蛋白的广品在制备用于诊断病原囷EHEC广品中的应用；所述病原菌EHEC具体为EHEC 0157:H7 ;检测上述Z0390蛋白的产品进一步具体为上述的Z0390蛋白作为抗原制备的抗体；或检测上述Z4191蛋白的广品在制备用于诊断病原囷EHEC广品中的应用；所述病原菌EHEC具体为EHEC 0157:H7 ;检测上述Z4191蛋白的产品进一步具体为上述的Z4191蛋白作为抗原制备的抗体。上述的抗体在制备提高宿主抗病原菌EHEC感染产品中的应用也是本专利技术保护的范围；所述宿主具体为人或动物；所述病原菌EHEC具体为EHEC 0157:H7。或一种产品，其活性成分为权利要求7或8所述的抗体；所述产品为具有如下I)和/或2)功能的产品也是本专利技术保护的范围:I)用于检测病原菌EHEC ；2)提高宿主抗病原菌EHEC感染；所述宿主具体为人或动物；所述病原菌EHEC具体为EHEC 0157:H7。本专利技术的实验证明，本专利技术本文档来自技高网...
【技术保护点】
如下A?D中任一所示的物质在制备具有如下1）和/或2）功能的产品中的应用：1）预防、诊断和/或治疗由病原菌EHEC感染或引发的疾病；2）降低病原菌EHEC对肠道感染损伤；A、Z0390蛋白、B、含有Z0390蛋白的蛋白组合物、C、含有Z0390蛋白的融合蛋白、D、含有Z0390蛋白的融合蛋白的蛋白组合物；所述Z0390蛋白为如下（1）?（3）中任一所示的蛋白：（1）序列表中的序列2所示的氨基酸组成的蛋白质；（2）序列2自N’末端第1?370位氨基酸组成的蛋白质；（3）将1）或2）所示蛋白的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质。
【技术特征摘要】
1.如下A-D中任一所示的物质在制备具有如下I)和/或2)功能的产品中的应用: O预防、诊断和/或治疗由病原菌EHEC感染或引发的疾病； 2)降低病原菌EHEC对肠道感染损伤； A、Z0390蛋白、B、含有Z0390蛋白的蛋白组合物、C、含有Z0390蛋白的融合蛋白、D、含有Z0390蛋白的融合蛋白的蛋白组合物；所述Z0390蛋白为如下(1)_ (3)中任一所示的蛋白: (1)序列表中的序列2所示的氨基酸组成的蛋白质； (2)序列2自N’末端第1-370位氨基酸组成的蛋白质； (3)将I)或2)所示蛋白的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相 同功能的蛋白质。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于: 所述含有Z0390蛋白的蛋白组合物为由所述Z0390蛋白和其他蛋白组成的组合物， 所述含有Z0390蛋白的融合蛋白的蛋白组合物为由所述含有Z0390蛋白的融合蛋白和其他蛋白组成的组合物； 所述其他蛋白为修饰蛋白、标签蛋白或功能蛋白； 所述含有Z0390蛋白的蛋白组合物为如下a-c中任一种:a为由所述Z0390蛋白和Z4191蛋白组成的组合物、b为由所述Z0390蛋白和Intimin蛋白组成的组合物、c为由所述Z0390和SAmB蛋白组成的组合物； 所述Z4191蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列4或序列4自N’末端第1-190位氨基酸； 所述Intimin蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列5 ； 所述SAmB蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列6。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于: a所不的蛋白组合物中，所述Z0390蛋白和所述Z4191蛋白的质量比为1:1; b所示的蛋白组合物中，所述Z0390蛋白和所述Intimin蛋白的质量比为1:1; c所示的蛋白组合物中，所述Z0390蛋白和所述SAmB蛋白的质量比为1:1; 所述产品为疫苗或药物。4.根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于:所述肠道为人或动物...
【专利技术属性】
技术研发人员：王慧，李涛，王琴，韩燃，李崭，陈芳红，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所，
类型：发明
国别省市：
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