含有GKN1的抗癌用组合物制造技术

本发明专利技术涉及将GKN1作为有效成分来含有的抗癌用组合物，更为具体地涉及包含抗癌活性优秀的GKN1基因的表达载体或将GKN1蛋白质作为有效成分来含有的抗癌用组合物。由于本发明专利技术的GKN1具有不仅抑制癌细胞产生的活性优秀，而且在过度表达时抑制癌细胞转移的活性也优秀的特征，因而具有能够有效用作抗癌治疗用组合物的效果。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及含有GKNl (Gastrokinel,胃动蛋白I)的抗癌用组合物，尤其涉及能够抑制胃癌的产生、抑制癌细胞转移的活性优秀的GKNl基因的新用途。
技术介绍
胃癌(Stomach cancer)作为在全世界范围内在韩国、日本等地多发的癌症，虽然在美国、欧洲等西方癌症的发病率较低，但是在韩国，癌症发病率排在第一位的为胃癌，死亡率紧随肺癌排在第二位。察看胃癌的分类，整个胃癌的95%为在胃壁黏膜的腺细胞中产生的腺癌，之外还有在淋巴系统产生的淋巴瘤、在间质组织中产生的胃肠道间质瘤。在引起胃癌的多种发病原因中，尤其食物成了最重要的发病原因，在加工的肉类中大量含有的硝酸盐、亚硝酸盐被认为是最有力的致癌物质，烧焦的食物、又辣又咸的食物被认为会成为导致胃癌的原因。除此之外，最近备受瞩目的幽门螺旋杆菌作为胃炎和胃溃疡的病原菌，被查明与胃癌的产生有相关性。并且，察看癌症发病的原因，由于诱发癌症的致癌基因的不正常的活性化，导致细胞增殖或与之相反地抑制细胞的不正常增殖，或者启动细胞凋亡程序来杀死特定细胞，从而在阻断癌细胞生成的癌症抑制基因出现异常而产生癌症，即使是具有被不正常活性化的癌基因的细胞，只要癌症抑制基因表现出正常的活性，则该细胞就不能形成癌症而凋亡。因而，为了成为癌细胞则不仅要有致癌基因的活性化，而且在一个细胞中应同时出现癌症抑制基因的非活性化。对此，最近在全世界范围内正就通过对与癌症的生成及治疗相关的基因的功能进行研究来发掘治疗用靶，并将这些用于诊断及治疗剂的开发而展开着激烈的竞争。随着与基因组研究的活跃相伴，对人类基因DNA芯片或蛋白质组学分析研究活跃，并大量发掘与癌症相关的基因，从而构 建了很多基因的目录和相关数据库，但是对于这些基因的在细胞内的具体生物学功能及癌症相关性大部分还没有被研究或不确定，因而与实际与癌症的相关性或诊断及作为靶基因来使用一同，进而在发掘能够有效治疗癌症的基因方面存在相当大的困难。因此，实际情况是，除了到目前为止被查明的与癌症相关的基因之外，还需要发掘新的基因。另一方面，在目前治疗癌症的方法中3种主要的治疗方法为外科治疗方法、药物疗法、放射疗法，其中药物疗法在治疗过程中伴随的痛苦较少，比起外科治疗或放射治疗，在治疗后癌症的复发相对较少，因而受到期待。因此，开发了很多能够满足这种期待的抗癌剂并被使用，其中大部分的抗癌剂主要针对癌症的异常增殖，通过使分裂活跃的细胞选择性地凋亡来表现出抗癌效果。这种抗癌剂伴有会一同杀死作为通常在人体内分裂活跃的细胞的免疫细胞、毛根细胞等的正常细胞的严重的副作用，因而具有不能长时间使用的问题。并且，作为用于治疗胃癌的方法，使用淋巴结切除术、内镜下黏膜切除术、腹腔镜下胃切除术等的方法，内镜下黏膜切除术作为对黏膜内的早期胃癌，在存在癌症病变的胃黏膜周围注入生理盐水来使得病变部位鼓起后切除存在病变的黏膜的方法，虽然具有能够通过简单的内镜下手术来避免胃切除手术的痛苦的优点，但在局限于黏膜的早期胃癌中淋巴结转移可能性低的情况下使用时会受到限制。因而，实际情况是，需要发掘用于与癌症的发病相关联来起到主要功能并能够利用该功能在癌症的早期进行预防和治疗的新的抗癌剂的开发的靶基因。
技术实现思路
技术问题为此，本专利技术者鉴于GKNl基因在正常的胃黏膜细胞上表达而在胃癌组织中其表达下降的问题，对上述基因的功能进行研究的结果，最先查明了 GKNl基因具有能够抑制胃癌细胞的增殖及活性，并阻碍癌症转移的功能，确认了能够将上述基因用作癌症治疗剂的事实，进而完成了本专利技术。因此，本专利技术的目的在于，提供包含GKNI蛋白质或对GKNl蛋白质进行编码的多核苷酸的抗癌用组合物。本专利技术的再一目的在于，提供一种抗癌剂筛选方法，该抗癌剂筛选方法包括如下步骤:培养GKNl蛋白质或表达上述蛋白质的重组细胞和候选物质(candidate substance)的步骤；以及测定GKNl蛋白质的活性或对细胞内表达水平的增加所产生的效果的步骤。解决问题的手段为了实现如上所述的本专利技术的目的，本专利技术提供包含GKNl蛋白质或对GKNl蛋白质进行编码的多核苷酸的抗癌用组合物。在本专利技术的一实施例中，上述GKNl蛋白质可以包含序列第I位的氨基酸序列。在本专利技术的一实施例中，对上述GK`Nl蛋白质进行编码的多核苷酸可以是包含序列第2位的碱基序列多核苷酸。在本专利技术的一实施例中，上述多核苷酸可以是包含于表达载体内的多核苷酸。在本专利技术的一实施例中，上述表达载体可以是具有图12的酶切图(cleavagemap)的 pcDNA3.1-GKNl0在本专利技术的一实施例中，上述癌症可以是胃癌。并且，本专利技术提供一种抗癌剂筛选方法，其特征在于，包括如下步骤:培养GKNl蛋白质或表达上述蛋白质的重组细胞和候选物质的步骤；以及测定GKNl蛋白质的活性或对细胞内表达水平的增加所产生的效果的步骤。在本专利技术的一实施例中，还可包括如下步骤:在上述候选物质增加GKNl蛋白质的活性或在细胞中增加GKNl基因的表达水平的情况下，将上述候选物质判断为具有抗癌活性的抗癌剂的步骤。在本专利技术的一实施例中，上述GKNl蛋白质的活性或细胞内表达水平可以通过选自由免疫共沉淀法(coimmunoprecipitation)、放射免疫分析法(RIA, Radioimmunoassay) >酶联免疫分析法(ELISA, enzyme-linked immuno sorbent assay)、免疫组织化学、蛋白质印迹法(Western Blotting)以及突光激活细胞分拣术(FACS, fluorescence-activatedcell sorting)组成的组中的某一种方法来执行。在本专利技术的一实施例中，上述抗癌剂能够预防或治疗胃癌。专利技术的效果由于本专利技术的GKNl蛋白质具有不仅抑制癌细胞产生的活性优秀，而且在过度表达时抑制癌细胞转移的活性也优秀的特征，因而具有能够有效用作抗癌治疗用组合物的效果O附图说明图1表示胃癌组织的GKNl蛋白质免疫染色结果，图1的(A)部分表示在陷窝细胞和浅表性胃上皮细胞中的免疫活性，图1的(B)部分表示在胃腺瘤中的免疫阳性，图1的(C)表示在管状腺瘤中的阴性免疫染色结果，图1的(D)部分表示在胃癌中的免疫阳性，图1的(E)部分和(F)部分表示在肠型胃癌和扩散型胃癌中的阴性免疫染色结果。图2表示GKNl蛋白质的甲基化状态，图2的⑷部分表示在胃癌组织⑴和正常的胃黏膜(N)中对GKNl基因甲基化的DNA(M)和非甲基化的DNA⑶，图2的⑶表示在胃癌细胞株中对GKNl蛋白质基因甲基化的(M)DNA和非甲基化的(U)DNA。图3为表示在胃癌中与对照组相比较的(A)GKNl蛋白质DNA复制数量和⑶GKNl蛋白质mRNA表达的倍数变化的图表。图4分别表示在肠型⑴、扩散型⑶及混合型(M)胃癌组织⑴和正常胃黏膜(N)中的GKNl蛋白质的表达。图5的(A)部分表示利用3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)分析法，在转染GKNl蛋白质的胃癌细胞中随着时间经过而发生的细胞的生存能力，图5的(B)部分为表示利用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)分析法，在转染GKNl蛋白质的胃癌细胞中随着时间经过而发生的细胞增殖的图表。图6表示通过 膜联蛋白V本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：朴元相，尹晶桓，
申请(专利权)人：加图立大学校产学协力团，
类型：
国别省市：