本发明专利技术涉及微生物生物制剂，具体的说是一种培养基中含腐植酸钠的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂的生产方法。枯草芽孢杆菌菌株经一级固体种子培养，二级液体种子发酵培养，得菌种液。菌种液接种于葡萄糖、腐植酸钠、豆粕、玉米、麦麸等为主要原料的培养基中进行三级固体有氧发酵，经调整培养条件出芽孢处理，干燥，粉碎，生产出枯草芽孢杆菌生物制剂。制剂含枯草芽孢菌(cfu)≥200亿个/g，pH值5.6～6.6，水分≤10％，粒度≥100目，色泽呈现特有的浅灰色或灰黑色、保质期18个月。本制剂在水产、畜禽养殖中作为添加剂应用，可以提高生产性能，改善养殖环境。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物生物制剂，具体的说是一种培养基中含腐植酸钠的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂的生产方法。
技术介绍
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),是芽孢杆菌属的一种，单个细胞0.7 0.8X2 3微米，革兰氏阳性菌，无荚膜，周生鞭毛，能运动。芽孢大，椭圆到柱状，0.6 0.9X1.0 1.5微米，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙，污白色或微黄色，在液体培养时，常形成皱醭。枯草芽孢杆菌具有繁殖速度快、耐高温、耐酸碱、耐挤压、稳定性能好、应用范围广等特点，在现代分子遗传学的科研探索中常作为模式菌株，在现实的生产实践中广泛应用于食品工业、饲料工业、水产养殖、环境保护和保健医药等诸多方面；因此，愈来愈受到科技工作者和企业界人士的重视。枯草芽孢杆菌菌体及其分泌物中含有丰富的蛋白质、氨基酸、有机酸、维生素、不饱和脂肪酸、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和肽类抗生素等生物活性物质。因此，在畜禽养殖和水产养殖中均有较高的应用价值 。在以往研究中，科技工作者对枯草芽孢杆菌的分类学地位、生理生化特征、发酵条件及其调控等方面均有深入研究。近年来，对枯草芽孢杆菌应用研究也取得很大的进展。但对饲料用高浓度枯草芽孢杆菌发酵技术报道的并不多，对培养基含腐植酸钠的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂的研制与生产未并见报道。本专利技术采用枯草芽孢杆菌菌株，经一级固体种子培养，液体二级种子发酵培养，采用含有腐植酸钠的固体培养基进行有氧发酵，再经调整培养条件出芽孢处理，干燥、粉碎，生产出培养基含腐植酸钠、饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂产品。此工艺设计和生产尚属国内和国际首创。腐植酸钠是大分子有机物质，主要是羟基、酚羟基、甲氧基、醌基等。综合各项报道，腐植酸应用在畜禽饲料中可对肠道炎性物和有毒物质进行吸附，对肠粘膜起保护作用；可抑制和杀灭肠道致病菌，提高饲料的利用率，并有止血止痛作用；可吸附粪便中的氨气、硫化氢，减轻粪便的臭味；腐植酸钠资源广泛、价格低廉、无药物残留，没有任何配伍禁忌，利于环保。但腐植酸的活性基团常被杂质所封闭，几乎不能发挥作用，通过发酵处理可以大大提高其生物学活性。将腐植酸钠作为芽孢菌制剂培养基使用，必将提升制剂生物效能。本专利技术产品功能是:1.利用芽孢菌产酶能力强的特点，提高饲料利用率；2.芽孢菌进入胃肠后，经过复苏增殖，可消耗肠道氧，有利于乳酸、双歧等厌氧益生菌发挥作用；3.腐植酸钠经微生物发酵后，生物活性增强，对芽孢菌作用具有增效性；4.芽孢菌进入后肠后甚至排除体外后还能发挥作用，可显著改善养殖环境。培养基中含腐植酸钠的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂产品无毒、无害、无任何副作用，是一种绿色的微生物制剂添加剂，具有广阔的市场前景。目如,在畜禽养殖和水广养殖中，提闻蛋白质利用率，减少抗生素使用是急需解决的问题。而本专利技术恰恰非常有助于解决上述两个问题或难题。产品已在广东、湖北、江苏、河北、山东、北京、沈阳、大连等地区广泛应用，取得了很好的经济效益和社会效益。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种培养基中含腐植酸钠的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂的生产方法。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为:以枯草芽孢杆菌为菌株，经一级固体种子培养，二级液体种子发酵，生产出枯草芽孢杆菌种子液。以葡萄糖、腐植酸钠、豆柏、玉米、麦麸等为主要培养基，将种子液接种于培养基上进行三级固体有氧发酵，之后调整培养条件进行出芽孢处理，再经干燥，粉碎，生产出含枯草芽孢杆菌(Cfu) ^ 200亿个/g，pH值5.6 6.6，水分< 10%，粒度彡100目，色泽呈现特有的浅灰色或灰黑色、保质期18个月的生物制剂产品。一种培养基中含腐植酸钠的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂的生产方法，包括如下步骤:I)单菌落种子纯化与优选:将枯草芽孢杆菌斜面菌种，在盛有细菌培养基的培养皿上涂布，经培养，得到枯草芽孢杆菌单菌落种子；2) 一级固体种子培养:将步骤I)中得到的单菌落种子接种到200ml茄形瓶，经培养，得到一级固体种子；3)液体发酵培养二级种子:将步骤2)中得到的茄形瓶种子接种到发酵罐液体培养基中，一个茄形瓶与液体培养基的接种比例为I瓶:200公斤。经培养得到二级液体种子。得到的发酵液体种子标准为:颜色正常，无异味，芽孢占总菌数20%以上，pH 6.0 6.5,菌体大小为0.7 0.8 X 2 3 μ m,芽抱0.6 0.9 X 1.0 1.5 μ m,含枯草芽抱杆菌(cfu) > 200 亿个/ml。4)三级固体发酵料有氧发酵:将步骤3)中得到的二级液体种子接种到固体发酵料中，经通风供氧，发酵培养，得到经培养的固体发酵料。5)出芽孢处理:将步骤4)中得到的固体发酵料进行出芽胞处理，即停止通风供氧，将其摊开、翻倒，降低温度和湿度，促使固体发酵料中含有的枯草芽孢杆菌形成芽孢。6)干燥与粉碎处理:对步骤5)得到的形成了芽胞的固体发酵料进行烘干处理，通过粉碎，生产出含枯草芽孢杆菌(cfu) > 200亿个/g的含发酵腐植酸钠的饲料用高浓度枯早牙抱杆囷生物制剂广品。上述枯草芽孢杆菌培养过程中，步骤I)和2)所采用的枯草芽孢杆菌固体种子培养基的重量组成为:葡萄糖0.8 1.2%、蛋白胨0.8 1.2%、牛肉膏0.3 0.6%、氯化钠0.03 0.07%、硫酸镁0.03 0.07%、磷酸氢二钾0.05 0.15%、余量为纯净水、pH6.8 7.2、琼脂 1.5 2.2% ;灭菌条件:0.08MPa、115°C、18min ； 培养温度:28 °C 32 °C，时间为48 72h。上述枯草芽孢杆菌培养过程中，步骤3)所采用的枯草芽孢杆菌种子发酵培养基的重量组成为:葡萄糖0.5 1.5 %、蛋白胨0.2 0.8 %、酵母粉0.2 0.8 %、玉米面1.0 3.0%、豆柏1.0 3.0%、硫酸铵0.1 0.3%、氯化钠0.03 0.07%、硫酸镁0.03 0.07%、磷酸氢二钾0.05 0.15%、余量为纯净水、pH6.8 7.2 ;灭菌条件:0.lMPa、121°C、20min ;发酵培养条件:罐压0.01 0.1OMpa,通气量0.5 1.0V/V.min、转速100-200rpm、温度 28。。 34°C、时间为 48 72h ；上述步骤4)所述固体发酵料有氧发酵过程中，固体发酵料中各种原料重量比例为:葡萄糖I 3份、腐植酸钠10 40份、豆柏10 20份、玉米面10 20份、麸皮50 70份；液体二级种子与固体发酵料混合的重量比例分别为:①30: 100、②40: 100、③50: 100;发酵培养条件:通气量0.5 1.0V/V*min、发酵温度50°C 60°C、发酵时间48 64h。步骤5)所述出芽孢处理中:需对经培养的固体发酵料，停止通风供氧，将其摊开、翻倒。出芽孢处理条件:温度20°C 30°C、含水量20 30%、时间24 48h ；步骤6)将步骤5)所述含有芽胞的固体发酵料进行干燥处理与粉碎，干燥处理条件为:采用干燥炉进行干燥，干燥炉内温度60°C 80°C、干燥炉出口温度38°C 42°C、时间8 IOmin ； 粉碎处理条件为:在无菌洁净条件下进行，粉碎后粒度80 120目、含水量8 1本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种培养基中含腐植酸钠饲料用枯草芽孢杆菌生物制剂的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：1)单菌落种子纯化与优选：将枯草芽孢杆菌斜面菌种，在装有细菌培养基的培养皿上涂布，经培养，得到枯草芽孢杆菌单菌落种子；2)一级固体种子培养：将步骤1)中得到的单菌落种子，挑出单菌落接种到一级固体种子培养基中，固体种子培养瓶为200ml茄形瓶，装量为固体培养基50ml，经培养，得到一级固体种子；3)二级液体种子发酵培养：将步骤2)中得到的一级固体种子(茄形瓶菌种)接种到二级发酵罐液体培养基中，一级固体种子与二级发酵罐液体种子培养液的接种量为：一级固体种子与1吨发酵罐(装液量70％)接种比例为1瓶：200公斤，经培养，得到二级液体种子；4)三级固体发酵料有氧发酵：将步骤3)中得到的二级液体种子接种到固体发酵料中，二级液体种子与固体发酵料混合的重量比例为40∶100；经通风供氧，发酵培养，得到经培养的固体发酵料；5)出芽孢处理：将步骤4)中得到的固体发酵料进行出芽胞处理，即对经培养的固体发酵料，停止通风供氧，将其摊开、翻倒，温度降低到20℃～30℃，含水量降低到20％～30％，促使固体发酵料中含有的枯草芽孢杆菌形成芽孢；6)干燥与粉碎处理：将步骤5)中得到的含有芽胞的固体发酵料进行干燥处理，经干燥炉烘干，微粉机粉碎，生产出培养基中含腐植酸钠的枯草芽孢杆菌(cfu)≥200亿个/g的饲料用高浓度枯草芽孢杆菌生物制剂产品。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：潘军，薛德林，宋颖，张伟强，
申请(专利权)人：沈阳博善英胜生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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