一种快速提取鱼类总RNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速提取鱼类总RNA的方法，它是将鱼类软组织经液氮速冻、研钵研磨、TRNzol裂解液处理后低温高速离心，再经氯仿萃取后异丙醇沉淀并经预冷的75%乙醇洗涤而获得鱼类RNA的方法。本发明专利技术针对RNA易降解的特性而开发，成本低、稳定性高、速度快，优于原提取鱼类总RNA的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及提取鱼类总RNA的方法，特别是涉及一种快速提取鱼类总RNA的方法。
技术介绍
提取鱼类总RNA是鱼类分子生物学研究的一种基础手段，近年来研究人员专利技术了多种提取鱼类总RNA的方法，但这些方法均存在提取时间长、RNA容易降解等问题，增加了试验的难度，提高了试验成本。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述技术的不足，提供一种快速提取鱼类总RNA的方法。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是:一种快速提取鱼类总RNA的方法，将鱼类软组织经液氮速冻、研钵研磨、TRNzol裂解液处理后低温高速离心，再经氯仿萃取后异丙醇沉淀并经预冷的乙醇溶液洗涤而获得鱼类RNA。包括以下步骤:(I)取鱼类软组织，迅速投入装有液氮的保温桶内，经液氮速冻；(2)将速冻的鱼类软组织迅速置于装有液氮的研钵内，充分研磨成细粉，研磨过程中反复补充研钵内的液氮，将研磨成细粉的鱼类软组织收集至一处，并迅速用TRNzol裂解液均匀覆盖，室温静置至融化，待完全融化后再研磨，保证研磨充分并混合均匀，并转移至的离心管中静置； (3) 4°C，11000-13000r/min,离心，取上清，加入氯仿，剧烈震荡，室温静止；(4) 4°C，11000-13000r/min,离心，取上清，加入异丙醇，颠倒混匀，室温放置，4°C，11000-13000r/min,离心,弃上清；(5)用预冷的乙醇溶液洗涤沉淀，4°C，7000-8000r/min,离心，吸掉乙醇，干燥后用无核酸酶水溶解；(6)经琼脂糖凝胶电泳检测后直接进行反转录或置于-80°C冰箱内保存。具体包括以下步骤:(I)取0.1g鱼类软组织，迅速投入装有液氮的保温桶内，经液氮速冻；(2)将速冻的鱼类软组织迅速置于装有液氮的研钵内，充分研磨成细粉，研磨过程中反复补充研钵内的液氮，将研磨成细粉的鱼类软组织收集至一处，并迅速用ImLTRNzol裂解液均匀覆盖，室温静置至融化，待完全融化后再研磨一遍，以保证研磨充分并混合均勻，并转移至1.5ml的离心管中静置5min ；(3) 4°C，11000-13000r/min，离心IOmin,小心吸取上清至一新离心管中，加入200uL氯仿，剧烈震荡15s，室温静止5min ；(4) 4 °C, 11000-13000r/min,离心 15min,取上清,移入一新的 1.5mL 离心管中，力口入500uL异丙醇,颠倒混勻，室温放置10min,4°C, 11000-13000r/min,离心IOmin,弃上清；(5)用预冷的质量百分比浓度75%乙醇洗涤沉淀，4°C，7000-8000r/min，离心5min,小心吸掉乙醇,超净工作台干燥2_3min后用30uL无核酸酶水溶解；(6)经琼脂糖凝胶电泳检测后直接进行反转录或置于_80°C冰箱内保存。所述鱼类软组织为新鲜的肌肉、肝脏、性腺和大脑。本专利技术的有益效果是: 1、能在I小时内就可以获得用于反转录的鱼类总RNA样品，比原来提取鱼类总RNA的方法大大的缩短的时间，提高了工作效率。2、成本低，其稳定性、准确性优于原来提取鱼类总RNA的方法。3、用研钵配合液氮对组织进行研磨，避免了 RNA在研磨过程中的降解，同时也避免了研磨不充分的问题，另外直接用TRNzol裂解液覆盖组织粉末避免了组织粉末在转移过程中造成的RNA不必要的降解。4、用预冷的75%乙醇洗漆沉淀,能够获得更好的实验结果。5、本专利技术提取的鱼类的总RNA既可以直接进行反转录，还可以-80°C保存备用。附图说明图1是现有技术所得RNA样品经电泳检测拍照效果。图2是本专利技术方法所得RNA样品经电泳检测拍照效果。具体实施例方式下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步详细说明:本专利技术的快速提取鱼类总RNA的方法，将鱼类软组织经液氮速冻、研钵研磨、TRNzol裂解液处理后低温高速离心，再经氯仿萃取后异丙醇沉淀并经预冷的乙醇溶液洗涤而获得鱼类RNA。包括以下步骤:(I)取鱼类软组织，迅速投入装有液氮的保温桶内，经液氮速冻；(2)将速冻的鱼类软组织迅速置于装有液氮的研钵内，充分研磨成细粉，研磨过程中反复补充研钵内的液氮，将研磨成细粉的鱼类软组织收集至一处，并迅速用TRNzol裂解液均匀覆盖，室温静置至融化，待完全融化后再研磨，保证研磨充分并混合均匀，并转移至的离心管中静置；(3) 4°C，11000-13000r/min,离心，取上清，加入氯仿，剧烈震荡，室温静止；(4) 4°C，11000-13000r/min,离心，取上清，加入异丙醇，颠倒混匀，室温放置，4°C，11000-13000r/min,离心,弃上清；(5)用预冷的乙醇溶液洗涤沉淀，4°C，7000-8000r/min，离心，吸掉乙醇，干燥后用无核酸酶水溶解；(6)经琼脂糖凝胶电泳检测后直接进行反转录或置于_80°C冰箱内保存。具体包括以下步骤:(1)取0.1g鱼类软组织，迅速投入装有液氮的保温桶内，经液氮速冻；(2)将速冻的鱼类软组织迅速置于装有液氮的研钵内，充分研磨成细粉，研磨过程中反复补充研钵内的液氮，将研磨成细粉的鱼类软组织收集至一处，并迅速用ImLTRNzol裂解液均匀覆盖，室温静置至融化，待完全融化后再研磨一遍，以保证研磨充分并混合均勻，并转移至1.5ml的离心管中静置5min ；(3) 4°C，11000-13000r/min，离心IOmin,小心吸取上清至一新离心管中，加入200uL氯仿，剧烈震荡15s，室温静止5min ；(4) 4 °C, 11000-13000r/min,离心 15min,取上清,移入一新的 1.5mL 离心管中，力口入500uL异丙醇,颠倒混勻，室温放置10min,4°C, 11000-13000r/min,离心IOmin,弃上清；(5)用预冷的质量百分比浓度75%乙醇洗涤沉淀，4°C，7000-8000r/min，离心5min,小心吸掉乙醇,超净工作台干燥2_3min后用30uL无核酸酶水溶解；(6)经琼脂糖凝胶电泳检测后直接进行反转录或置于_80°C冰箱内保存。所述鱼类软组织为新鲜的肌肉、肝脏、性腺和大脑。 实施例1本专利技术需要的主要材料包括:活体解剖获得的新鲜的肌肉、肝脏、性腺、大脑等鱼类软组织、液氮、TRNzol裂解液、异丙醇、氯仿、75%的酒精。(I)取0.1g活体解剖的草金鱼背部肌肉组织，迅速投入装有液氮的保温桶内，经液氮速冻。(2)将速冻的鱼类组织迅速置于装有液氮的研钵内，充分研磨成细粉，研磨过程中反复补充研钵内的液氮。(3)用药匙将研磨成细粉的鱼类组织收集至一处，并迅速用ImLTRNzol裂解液均匀覆盖，室温静置至融化。(4)待完全融化后再研磨一遍，以保证研磨充分并混合均匀，并转移至1.5ml的离心管中静置5min。(5) 4°C，12000r/min，离心lOmin，小心吸取上清至一新离心管中。(6)加入200uL氯仿，剧烈震荡15s，室温静止5min。(7) 4°C, 12000r/min,离心15min,取上清,移入一新的1.5mL离心管中。(8)加入500uL异丙醇,颠倒混勻，室温放置lOmin, 4°C, 12000r/min,离心IOmin,弃上清。(9)用预冷的质量百分比浓度75%乙醇洗漆沉淀，4°C,7500r/min,离心5min。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速提取鱼类总RNA的方法，其特征在于，将鱼类软组织经液氮速冻、研钵研磨、TRNzol裂解液处理后低温高速离心，再经氯仿萃取后异丙醇沉淀并经预冷的乙醇溶液洗涤而获得鱼类RNA。

【技术特征摘要】
1.一种快速提取鱼类总RNA的方法，其特征在于，将鱼类软组织经液氮速冻、研钵研磨、TRNzol裂解液处理后低温高速离心，再经氯仿萃取后异丙醇沉淀并经预冷的乙醇溶液洗漆而获得鱼类RNA。2.根据权利要求1所述的快速提取鱼类总RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)取鱼类软组织，迅速投入装有液氮的保温桶内，经液氮速冻； (2)将速冻的鱼类软组织迅速置于装有液氮的研钵内，充分研磨成细粉，研磨过程中反复补充研钵内的液氮，将研磨成细粉的鱼类软组织收集至一处，并迅速用TRNzol裂解液均匀覆盖，室温静置至融化，待完全融化后再研磨，保证研磨充分并混合均匀，并转移至的离心管中静置； (3)4°C，11000-13000r/min,离心，取上清，加入氯仿，剧烈震荡，室温静止； (4)4°C, 11000-13000r/min,离心，取上清，加入异丙醇，颠倒混匀，室温放置，4°C，11000-13000r/min,离心，弃上清； (5)用预冷的乙醇溶液洗涤沉淀，4°C，7000-8000r/min,离心，吸掉乙醇，干燥后用无核酸酶水溶解； (6)经琼脂糖凝胶电泳检测后直接进行反转录或置于_80°C冰箱内保存。3.根据权利要求2所述的快速提取鱼类总RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤: ...

【专利技术属性】
技术研发人员：张升利，梁拥军，张欣，孙向军，
申请(专利权)人：北京市水产科学研究所，
类型：发明
国别省市：