本发明专利技术公开了一种酿酒酵母菌株及其在制备耐热超氧化物歧化酶中的应用。本发明专利技术提供了酿酒酵母Saccharomyces?cerevisiae菌株TY-SC-2-2013.1.1，其保藏号为CGMCC?No.7249。本发明专利技术还提供了一种制备SOD的方法，包括如下步骤：发酵上述的酿酒酵母Saccharomyces?cerevisiae菌株TY-SC-2-2013.1.1，收集发酵产物，即得到SOD。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术具有如下优点：本发明专利技术筛选出一种酿酒酵母，其可直接表达出食品级的耐热超氧化物歧化酶产物，弥补了耐高温酵母菌能减少发酵生产中由于降温所带来的麻烦和费用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种酿酒酵母菌株及其在制备耐热超氧化物歧化酶中的应用。
技术介绍
超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)广泛存在于各类生物体中，是机体内超氧阴离子自由基的天然消除剂，对机体细胞起保护作用。因此，SOD在抗衰老以及预防肿瘤和抗炎等方面起着重要的生理作用，收到国内外医药日用化工，食品及生化界的极大关注。根据SOD所含金属辅基的不同，一般可将其分为Cu、Zn-SOD, Mn-SOD和Fe-SOD三种类型。SOD在临床上有较广泛的应用，如用于骨关节炎、急性肝与慢性肝的炎症反应，SOD可去除由炎症反应产生的大量的超氧化自由基，对消除炎症，恢复肝功能起到一定的作用:用于治疗因超氧阴离子伤害引起的疾病，如心肌缺血及缺血再灌注综合症，类风湿关节炎，放射性膀胱炎，红斑狼疮等。SOD在食品工业主要应用四方面:1)作为保健食品的功效因子或食品营养强化齐U，添加到各种食品中。2)制成多种剂型的SOD或复合型食品。3)用作食品的天然抗氧化齐U。4)以富含SOD的原料加工制成保健食品。此外，SOD添加于化妆品中可起到防晒，防止脂褐素的形成，防治皮肤病以及防治瘢痕形成等作用。我国自上世纪八十年代以来，对SOD的应用研究主要侧重于动植物SOD的提取和纯化，国内产品大部 分是从动物血液中制备的，但由于原材料有限及卫生安全性等原因，导致制品产量有限，且血液制品的安全性风险加大，这种方法慢慢的被淘汰。利用基因工程是广开SOD酶源，降低成本和获得具有天然活性的SOD有效途径。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),又叫面包酵母,在酿酒业和面包业中的使用也有数千年历史，被认识是GARS生物(generally recognized as safe),已被美国FDA认定为安全性的生物，其表达产物不需经过大量宿主安全性实验。酿酒酵母作为一种模式生物，是亦今了解最完全的真核生物，上千个基因已被分析，自从酿酒酵母表达人干扰素成功以后，人们还用酿酒酵母表达了多种原核和真核蛋白。作为一种单细胞真核生物，它表达外源基因时具有一定的翻译后加工能力，具有一定程度上的折叠加工和糖基化修饰，有利于保护生物产品的活性和稳定性。但是酿酒酵母本身含有耐热SOD的野生菌株还未被筛选。耐高温酵母菌能减少发酵生产中由于降温所带来的麻烦和费用，保证工业发酵能在高温下正常进行，因此，围绕耐高温酵母菌的筛选成为研究热点。近年来，已有多株人工选育的耐高温酵母菌投入到生产中，并取得了良好的经济效益。目前，耐高温酵母菌的选育主要集中在自然筛选和高温驯化，使耐高温酵母菌的研究取得了显著进展。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一株酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae菌株。本专利技术提供的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae 菌株 TY-SC-2-2013.1.1，其保藏号为 CGMCC N0.7249。上述的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae 菌株 TY-SC-2-2013.1.1 在制备 SOD中的应用也是本专利技术保护的范围。上述应用中，所述SOD为耐高温酶，具体可耐100°C，即在100°C水浴保温lh，仍保留77.89%的酶活性。本专利技术的另一个目的是提供一种制备SOD的方法。本专利技术提供的方法，包括如下步骤:发酵上述的酿酒酵母Saccharomycescerevisiae菌株TY-SC-2-2013.1.1，收集发酵产物，即得到S0D。上述方法中，所述发酵中使用的培养基为酵母培养基，其中酵母培养基中的碳源为葡萄糖、麦芽糖、棉籽糖、蔗糖或淀粉；所述碳源在所述酵母培养基中的质量百分含量为2% ；上述方法中，所述碳源为棉籽糖。 上述碳源为棉籽糖的酵母培养基按照如下方法制备:向浓度为8g/L的不含碳源的酵母培养基中加入Ura和棉籽糖，用水补足体积，得到碳源为棉籽糖的酵母培养基，其中Ura在碳源为棉籽糖的酵母培养基中的终浓度为0.01% (质量百分含量)，棉籽糖在碳源为棉籽糖的酵母培养基的终浓度为2% (质量百分含量)。上述方法中，所述发酵方式如下:30°C培养8-48h、且每隔12h，补加一次所述碳源，使所述碳源在发酵体系中的质量百分含量为1%_2%。在本专利技术的实施例中，所述发酵方式如下:30°C培养48h、且每隔12h，补加一次碳源，使碳源在发酵体系中的质量百分含量为2%。在本专利技术的实施例中，碳源为棉籽糖。上述方法中，在收集发酵产物后，还包括如下步骤:将所述发酵产物依次经离心收集菌体沉淀、悬浮所述菌体沉淀得到悬浮液、破碎所述悬浮液、再次离心悬浮液收集上清液，得到S0D。具体为810g的速度离心收集菌体、以pH7.0浓度为50mmol/L的磷酸缓冲液重悬菌体、用超声波破碎仪破碎(功率162.5W、超声时间30min ;间接超声，间接超声是超2s，停3s，总共超声的时间为30min。)，2260g离心25min，收集上清液得到S0D。由上述方法制备的SOD也是本专利技术保护的范围。上述SOD为耐高温酶。TY-SC-2-2013.1.1 菌株，分类命名为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),于2013年2月I日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCCJi址为:北京市朝阳区北辰西路I号院3号)，菌种保藏号为=CGMCC N0.7249。本专利技术的实验证明，本专利技术具有如下优点:1)本专利技术筛选出一种酿酒酵母，其可直接表达出食品级的耐热超氧化物歧化酶产物，弥补了耐高温酵母菌能减少发酵生产中由于降温所带来的麻烦和费用，保证工业发酵能在高温下正常进行和酿酒酵母本身含有耐热SOD的野生菌株还未被筛选的不足；2)若将本专利技术应用于工业化SOD生产，产物可不经过传统的纯化工艺而直接应用于食品，保健品以及化妆品等领域，也可直接应用于食品发酵，用于生产功能食品；3)本专利技术通过该酿酒酵母获得的SOD酶是一种高耐温酶，具有化学催化剂无法比拟的优点，尤其是在高温条件下保持极好的稳定性，克服了中温酶(20°C 5°C)及低温酶(2°C 20°C)在应用过程中出现的化学性质不稳定现象，从而使很多高温化学反应得以实现，从而将极大地促进生物技术产业的发展；4)本专利技术的方法还具有原料生物体生长周期短，生产规模大，成本低廉，稳定性好等优点，具有重要的工业应用前景和实际意义。附图说明图1为菌株TY-SC-2-2013.1.1的生物量的结果图2为菌株TY-SC-2-2013.1.1的SOD酶活结果图3为TY-SC-2-2013.1.1提取的SOD酶纯化后的温度稳定性图4为TY-SC-2-2013.1.1提取的SOD酶纯化后常温保存酶活变化趋势图5为TY-SC-2-2013.1.1提取的SOD酶纯化后pH值对其酶活性的影响具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、耐热超氧化物歧化酶酿酒酵母菌株的分离、筛选及鉴定一、耐热超氧化物歧化酶酿酒酵母菌株TY-SC-2-2013.1.1的分离、筛选1、耐热超氧化物歧化酶酿酒酵母菌株的分离I) 土壤的采集处理从河本文档来自技高网...
【技术保护点】
酿酒酵母Saccharomyces?cerevisiae菌株TY?SC?2?2013.1.1，其保藏号为CGMCC?No.7249。
【技术特征摘要】
1.酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae 菌株 TY-SC-2-2013.1.1，其保藏号为 CGMCCN0.7249。2.权利要求1所述的酿酒酵母Saccharomycescerevisiae菌株TY-SC-2-2013.1.1在制备SOD中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于:所述SOD为耐高温酶。4.一种制备SOD的方法，包括如下步骤:发酵权利要求1所述的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae 菌株 TY-SC-2-2013.1.1,收集发酵产物，即得到 SOD。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于:所述发酵中使用的培养基为酵母培养基，其中酵母培养基中的碳源为葡萄糖、麦...
【专利技术属性】
技术研发人员：左德全，姜广，董亮，蒋峰臣，
申请(专利权)人：北京奇化美生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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