本发明专利技术公开了氯化镁在提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性上的应用，属于微生物农药领域。本发明专利技术还公开了利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法，以及一种芽孢耐热性强的枯草芽孢杆菌菌剂，主要是向枯草芽孢杆菌发酵培养前的发酵培养基或者发酵培养结束后的发酵液中添加MgCl2，添加比例为每100mL发酵培养基或发酵液中添加0.1g～0.3g?MgCl2。本发明专利技术添加MgCl2所得的枯草芽孢杆菌菌剂中，其芽孢耐热能力显著提高；其次，本发明专利技术枯草芽孢杆菌菌剂的货架期长。
【技术实现步骤摘要】
氯化镁在提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性上的应用
本专利技术属于微生物农药领域，具体涉及氯化镁在提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性上的应用；以及利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法；此外还涉及一种芽孢耐热性强的枯草芽孢杆菌菌剂及其制备方法。
技术介绍
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是土壤中一类比较重要的生防微生物群体，能够防治多种植物病害(何礼远.生物防治通报，1985，1(3):28-31 ；Yu G Y等，SoilBiology and Biochemistry.2002，34:955-963)。芽孢是芽孢杆菌在发酵后期产生的一类抗逆性较强的休眠体(沈萍等，微生物学，高等教育出版社.2006，55-60)，常被作为有效成分制作成微生物农药，但是相对于化学农药，以芽孢为有效成分的微生物农药货架期相对较短，而芽孢的耐热能力是影响其货架期的主要因素之一。芽孢的耐热性能除了受相关基因的控制外，外界环境中金属离子、温度、酸碱度等均能影响芽孢的形 成与性能，其中金属离子Ca2+、Mn2+、Fe2+对芽孢的耐热性能有不同程度的提高效果(Granger A C等.Applied and EnvironmentalMicrobiology.2011，77(1):32-40)。因此，提高枯草芽孢杆菌芽孢的耐热性是延长相应的微生物农药货架期的有效途径之一。
技术实现思路
针对枯草芽孢杆菌微生物农药货架期短的问题，本专利技术目的在于提供氯化镁在提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性上的应用。本专利技术另一目的在于提供利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法。本专利技术第三目的在于提供一种芽孢耐热性强的枯草芽孢杆菌菌剂。本专利技术第四目的在于提供上述芽孢耐热性强的枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法。本专利技术的目的通过以下的技术方案实现:氯化镁在提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性上的应用。本专利技术利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法，包括向枯草芽孢杆菌发酵培养前的发酵培养基或者发酵培养结束后的发酵液中添加MgCl2，搅拌均匀。上述利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法，按照每IOOmL发酵培养基中添加0.1g 0.3g MgCl2的比例向发酵培养基中添加MgCl2 ;其中所述的发酵培养基的组成成分及质量百分比为:葡萄糖2% 2.5%，可溶性淀粉3% 5%，蛋白胨0.1% 0.2%，NaN03l% 2%, K2HPO40.2% 0.4%, MgSO4.7Η200.1% 0.2%, CaCO30.05% 0.15%，其余为水。上述利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法，按照每IOOmL发酵液中添加0.1g 0.3g MgCl2的比例向发酵液中添加MgCl2 ;其中所述的发酵液中枯草芽孢杆菌的总菌数为1.0X IO9 1.0X IOltl个/mL，其中芽孢约占枯草芽孢杆菌总菌数的90%。所述的枯草芽孢杆菌是指以芽孢作为微生物农药有效成分的枯草芽孢杆菌；如BAB-K2007年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为:CGMCC N0.2099)ο上述利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法中，其所述的发酵液按照如下方法制备:(I)菌种活化将低温保存的枯草芽孢杆菌菌种在LB培养基固体平板上划线，然后在28V 32°C下培养20 24小时，得活化菌种；(2)种子液制备按照将一接种环活化菌种接种于IOOmL种子液培养基的比例将活化菌种接种于种子液培养基中，在30°C 32°C、170 210r/min条件下振荡培养10 15h，得种子液；(3)发酵液制备按照体积百分比为3% 5%的比例将步骤(2)所得的种子液接种到发酵培养基中，在30°C 32°C、pH7.0 7.5、170 210r/min条件下振荡培养40 50h，得发酵液。上述利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法中所述的LB培养基、种子液培养基、发酵培养基按照常规方法制备。上述利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法中所述的LB培养基的组成成分及质量百分比为:酵母膏0.5%，胰蛋白胨1%，氯化钠0.5%，琼脂1.2%，其余为水。上述利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法中所述的种子液培养基的组成成分及质量百分比为:葡萄糖0.5%，酵母膏0.5%，蛋白胨1%，氯化钠0.5%，其余为水。上述利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法中所述的发酵培养基的组成成分及质量百分比为:葡萄糖2% 2.5%，可溶性淀粉3% 5%，蛋白胨0.1% 0.2%，NaN03l% 2%, K2HPO40.2% 0.4%, MgSO4.7Η200.1% 0.2%, CaCO30.05% 0.15%，其余为水。本专利技术一种芽孢耐热性强的枯草芽孢杆菌菌剂，按照如下方法制备:向枯草芽孢杆菌发酵培养前的发酵培养基或者发酵培养结束后的发酵液中添加MgCl2，搅拌均匀。上述枯草芽孢杆菌菌剂,按照每IOOmL发酵培养基中添加0.1g 0.3gMgCl2的比例向发酵培养基中添加MgCl2 ;其中所述的发酵培养基的组成成分及质量百分比为:葡萄糖2% 2.5%，可溶性淀粉 3% 5%，蛋白胨 0.1% 0.2%, NaNO31% 2%, K2HPO40.2% 0.4%,MgSO4.7Η200.1% 0.2%, CaCO30.05% 0.15%，其余为水。上述枯草芽孢杆菌菌剂，按照每IOOmL发酵液中添加0.1g 0.3g MgCl2的比例向发酵液中添加MgCl2 ;其中所述的发酵液中枯草芽孢杆菌的总菌数为1.0X IO9 1.0X 101°个/mL，其中芽孢约占枯草芽孢杆菌总菌数的90%。所述的枯草芽孢杆菌是指以芽孢作为微生物农药有效成分的枯草芽孢杆菌；如BAB-K2007年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为:CGMCC N0.2099)ο上述枯草芽孢杆菌菌剂中所述的发酵液，按照如下方法制备:(I)菌种活化 将低温保存的枯草芽孢杆菌菌种在LB培养基固体平板中划线，然后在28 32°C下培养20 24小时,得活化菌种；(2)种子液制备按照一接种环活化菌种接种于IOOmL种子液培养基的比例将活化菌种接种于种子液培养基中，在30°C 32°C、170 210r/min条件下振荡培养10 15h，得种子液；(3)发酵液制备按照体积百分比为3% 5%的比例将步骤(2)所得的种子液接种到发酵培养基中，在30°C 32°C、pH7.0 7.5、170 210r/min条件下振荡培养40 50h，得发酵液。所述的枯草芽孢杆菌可以是BAB-1 (2007年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为=CGMCC N0.2099)。上述枯草芽孢杆菌菌剂中所述的LB培养基、种子液培养基、发酵培养基按照常规方法制备。上述枯草芽孢杆菌菌剂中所述的LB培养基的组成成分及质量百分比为:酵母膏0.5%，胰蛋白胨1%，氯化钠0.5%，琼脂1.2%，其余为水。上述枯草芽孢 杆菌菌剂中所述的种子液培养基的组成成分及质量百分比为:葡萄糖0.5%，酵母膏0.5%，蛋白胨1%，氯化钠0.5%，其余为水。上述枯草芽孢杆菌菌剂中所述的发酵培养基的组成成分及质量百分本文档来自技高网...
【技术保护点】
氯化镁在提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性上的应用。
【技术特征摘要】
1.氯化镁在提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性上的应用。2.利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法，其特征在于向枯草芽孢杆菌发酵培养前的发酵培养基或者发酵培养结束后的发酵液中添加MgCl2，搅拌均匀。3.按照权利要求2所述的方法，其特征在于按照每IOOmL发酵培养基中添加0.1g 0.3g MgCl2的比例向发酵培养基中添加MgCl2 ;其中所述的发酵培养基的组成成分及质量百分比为:葡萄糖2% 2.5%，可溶性淀粉3% 5%，蛋白胨0.1% 0.2%, NaNO31% 2%，K2HPO40.2% 0.4%, MgSO4.7Η200.1% 0.2%, CaCO30.05% 0.15%,其余为水。4.按照权利要求2所述的方法，其特征在于按照每IOOmL发酵液中添加0.1g 0.3g MgCl2的比例向发酵液中添加MgCl2 ;其中所述的发酵液中枯草芽孢杆菌的总菌数为1.0X109 1.0X 101°个/mL，其中芽孢约占枯草芽孢杆菌总菌数的90%。5.按照权利要求2或4所述的方法，其特征在于所述的发酵液按照如下方法制备: (1)、将低温保存的枯草芽孢杆菌菌种在LB培养基固体平板上划线，然后在28°C 32°C下培养20 24小时，得活化菌种； (2)、按照将一接种环活化菌种接种于IOOmL种子液培养基的比例将活化菌种接种于种子液培养基中，在30°C 32°C、170 210r/min条件下振荡培养10 15h，得种子液； (3)、按照体积百分比为3% 5%的比例将步骤(2)所得的种子液接种到发酵培养基中，在30°C 32°C、pH7.0 7.5、170 210r/min条件下振荡培养40 50h，得发酵液。6.按照权利要求5所述的方法，其特征在于所述的LB培养基的组成成分及质量百分比为:酵母膏0.5%，胰蛋白胨1%，氯化钠0.5%，琼脂1.2%，其余为水；所述的种子液培养基的组成成分及质量百分比为:葡萄糖0.5%，酵母膏0.5%，蛋白胨1%，氯化钠0.5%，其余为水...
【专利技术属性】
技术研发人员：马平，李社增，鹿秀云，郭庆港，张晓云，
申请(专利权)人：河北省农林科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：
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