免疫层析装置、方法和试剂盒制造方法及图纸

本发明专利技术提供了用于确定测试样品中分析物的存在或量的基于膜的分析装置、方法和试剂盒。免疫层析装置包含膜，所述膜在测试区具有与其结合的捕获抗体，其中所述捕获抗体能够与分析物结合，特别是在来自PiZ基因携带者的样品中存在的Z-AAT蛋白。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及与特异性结合有关的装置和测定，尤其涉及免疫层析装置和测定。
技术介绍
在流通型测定(flow-through assay)中通常使用多种分析方法和装置来确定测试样品中可能存在的分析物的存在和/或浓度。例如，在用于医学诊断的护理点(point-of-care, P0C)装置中通常使用侧流测试，也称作侧流免疫层析测定或侧流测定(lateral flow assay, LFA)。各个测定设计适合于特定应用。α -1抗胰蛋白酶缺陷症(AATD)是一种遗传性疾病，其可以通过基因检测来诊断。但是，AATD诊断不足，仅有10 15%被识别。无法识别的患者有时候被分别错误诊断为“常见”的慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary, C0PD)和哮喘。依然需要用于有效确定分析物(特别是Z-AAT蛋白)存在的侧流测定。
技术实现思路
在一个方面，本专利技术提供了免疫层析装置，其包含膜，所述膜在测试区具有与其结合的捕获抗体，其中所述捕获抗体能够与分析物结合。所述分析物可以是在来自PiZ基因携带者的样品中存在的Z-AAT蛋白。在一些方面，本专利技术提供了一种免疫测定装置，其包含:膜，所述膜具有由固定于其上的捕获抗体限定的Z-AAT蛋白捕获区，其中所述捕获抗体是抗Z-AAT蛋白抗体。在另一些方面，本专利技术提供了用于确定流体样品中Z-AAT蛋白的存在或量的免疫测定装置。所述装置包含:样品施加区；微孔膜，其具有由固定于其上的捕获抗体限定的Z-AAT蛋白捕获区，其中所述捕获抗体是LG96或其抗原结合片段；从样品施加区到Z-AAT蛋白捕获区的流径，其中流体样品中Z-AAT蛋白的存在或量可通过捕获抗体与流体样品中可能存在的Z-AAT蛋白之间复合物的形成来确定；以及位于流径内的缀合物结构(conjugate structure),其中缀合物结构包含有特异性针对Z-AAT蛋白的检测试剂，所述检测试剂是移动的或可移动的，其中所述检测试剂是金缀合LG96或其金缀合抗原结合片段。在一个方面，提供了用于检测对象中Z-AAT蛋白的方法，所述方法包括:将来自对象的生物样品施加于本专利技术的免疫测定装置；和检测捕获抗体与流体样品中可能存在的Z-AAT蛋白之间形成的复合物，其中复合物的检出表明样品中存在Z-AAT蛋白。在另一方面，本专利技术提供了用于确定PiZ基因携带者的方法。所述方法包括:使用根据本专利技术的装置对来自对象的样品进行免疫层析；和确定分析物与捕获抗体的结合，其中所述分析物与所述捕获抗体的结合表明所述对象为PiZ携带者。在一些方面，本专利技术提供了用于诊断AAT缺陷相关的病症或疾病的方法。所述方法包括:使用根据本专利技术的装置对来自对象的样品进行免疫层析；和确定分析物与捕获抗体的结合，其中所述分析物与所述捕获抗体的结合表明所述对象具有所述病症或疾病。在另一些方面，本专利技术提供了一种用于确定对象发生与AAT缺陷相关病症或疾病之易感性的方法。所述方法包括:使用根据本专利技术的装置对来自对象的样品进行免疫层析；和确定分析物与捕获抗体的结合，其中所述分析物与所述捕获抗体的结合表明对象易感于发生AAT缺陷相关病症或疾病。在一个方面，本专利技术提供了一种用于确定生物样品中Z-AAT蛋白的存在的方法。所述方法包括:将生物样品与第一抗体以混合状态提供到膜上，所述膜在测试区具有与其结合的第二抗体，其中第一抗体和第二抗体各自都能与Z-AAT蛋白结合；其中在测试区捕获第二抗体表明样品中存在Z-AAT蛋白。在又一些方面，本专利技术提供了试剂盒，其包含:根据本专利技术的装置；和检测试剂。附图说明图1示出了使用单克隆抗体LG96和MG97的夹心式ELISA (sandwich-ELISA)的配对测定的结果。使用部分纯化的单克隆抗体LG96和MG97作为捕获抗体或作为标记有辣根过氧化物酶的检测抗体(分别为LG96HRP或MG97HRP)。将汇集的ZZ或丽血清用样品缓冲液连续稀释并且用作抗原溶液。配对LG96-LG96HRP、LG96-MG97HRP、MG97-LG96HRP和MG97-MG97HRP表现出与PiZZ血清特异性结合，但是不与PiMM血清特异性结合。图2示出了包被有AAT(M型)的单克隆抗体LG96和MG97的交叉反应的测定结果。使用M特异性抗体F43.8.1和IAT作为阳性对照，两者表现出与包被的AAT(M型)强的特异性结合，相比之下，抗体LG96和MG97未表现出与经包被的M型AAT的结合。图3示出了用于根据本专利技术的一个实施方案的免疫层析的侧流测定(LFA)装置的示意性设计。图4示出如图3所示的示意性设计，其中样品不含目标分析物。图5是LFA装置的照片，其中所述免疫层析组件显示为包装于外壳中，所述外壳由例如塑料材料制成。测试线或区显示为不存在，因此表明对于样品中分析物存在与否的测试结果是阴性的。对照线或区是阳性的，表明装置正常工作。图6示出了如图3所示的示意性设计，其中样品包含目标分析物。图7是LFA装置的照片，其中所述免疫层析组件显示为包装于如图5的外壳中。检测线或区域显示为存在，因此表明对于样品中分析物存在与否的测试结果是阳性的。对照线或区域也是阳性的，表明装置正常工作。图8示出了根据本专利技术的一个实施方案的LFA的原理，其中样品是来自ZZ型个体的血液。捕获抗体是LG96 ;检测抗体是缀合有HRP的MG97 ;对照抗体:Ig。图9示出了根据本专利技术的另一实施方案的LFA的原理，其中样品是来自MM型个体的血液。捕获抗体是LG96 ;检测抗体是缀合有HRP的MG97 ;对照抗体:Ig。图10示出了根据本专利技术的又一实施方案的LFA的原理，其中样品是来自MZ型个体的血液。捕获抗体是LG96 ;检测抗体是缀合有HRP的MG97 ;对照抗体:Ig。图11示出了 LG96-MG97HRP与ZZ和丽血清的结合曲线的结果。图12示出了 LG96-MG97HRP与ZZ血清特异性结合。不结合丽血清。图13示出了在空白测定中筛选实际样品(I: 20稀释)的结果。图14示出了使用PiZZ-ELISA对不同的市售和自制血清/血浆样品中Z-AAT浓度的确定。图15A至I 示出以每一可能的抗体组合的测试血清样品#1至6，其中先提到的抗体是固定在硝酸纤维素上的捕获抗体，斜线后面的抗体是与金粒子结合的检测抗体。图16示出了本专利技术的装置的一个实施方案的侧视图。图17是图16所示装置的纵切面。图18是图16所示装置的进料区域的放大图。图19是以下装置的反应区域的放大图:(A)图16所示装置；和⑶装置的另一实施方案，其中所述装置包括单个药盒。图20示出了图16所述装置的帽和切割部分的侧视图。图21示出了本专利技术装置的一个实施方案的纵切面。图22是本专利技术装置的另一实施方案。图23是根据一些实施方案的本专利技术装置。图24是根据另一些实施方案的本专利技术装置。图25是根据又一些实施方案的本专利技术装置。图26示出了使用本专利技术装置的一个实施方案对ZZ (+)血清样品的三种分离筛选的结果图27示出了毛细血管血液与血清样品对比的测定(比较来自同一供体的20 μ I毛细血管血液和血清样品)。在15分钟后使用光读取仪(QuickSens OmegalOOreader)测量测试信号。单位为mg/dL的数字表明通过浊度法确本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：马尔科·格雷贝，
申请(专利权)人：基立福疗法公司，
类型：
国别省市：