一种Barnase基因定量PCR检测方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种Barnase基因定量PCR检测方法及其应用，涉及分子生物学及转基因检测技术领域。本检测方法是：①检索分析Barnase基因序列；②利用该序列特征设计Barnase基因特异性定量PCR检测的引物和探针；③建立标准曲线；④定量体系的精确性验证。本检测方法应用于转基因植物及其产品中Barnase基因的检测。本发明专利技术利用发现的序列特征，首次建立Barnase基因特异性定量PCR检测方法；适用于对转基因作物及其衍生品、加工品中Barnase基因的检测、监测和安全管理。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种Barnase基因定量PCR检测方法，其特征在于：①检索分析Barnase基因序列将NCBI数据库（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/）中检索的Barnase基因序列(Genbank?Accession?No.?M14442.1)与转基因油菜MS1、MS8中的进行比对，确定了Barnase基因的检测靶标，其序列特征是：SEQ?NO.1；②利用该序列特征设计Barnase基因特异性定量PCR检测的引物和探针合成引物序列如下：qBarnaseF：5’AATCAGAAGCACAAGCCCTCG?3’和qBarnaseR：5’AGTTTGCCTTCCCTGTTTGAGAA?3’；合成TaqMan探针序列如下：qBarnaseP：5’FAM－TGTCTCCGCCGATGCTTTTCCCCG－TAMRA?3’；③建立标准曲线提取样品总DNA，分别利用上述引物qBarnaseF/qBarnaseR和探针qBarnaseP组合进行实时荧光定量PCR扩增；转基因油菜MS1基因组DNA被相同浓度非转基因油菜基因组DNA稀释至不同含量，分别以100、20、4、0.8、0.016ng?MS1基因组DNA的混和DNA样品，进行荧光定量PCR反应并建立标准曲线；④定量体系的精确性验证以标准曲线为参照测定含有MS1基因组DNA的混和油菜基因组DNA样品中Barnase基因的量。...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：李俊，吴刚，武玉花，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，
类型：发明
国别省市：