一种二维液相色谱-质谱联用制备高纯度芦丁的方法技术

技术编号:8741654 阅读:254 留言:0更新日期:2013-05-29 19:12
本发明专利技术涉及医药技术领域,是一种二维液相色谱-质谱联用制备高纯度芦丁的方法,采用二维液相色谱-质谱联用技术,以甲醇-水或乙腈-水为流动相,以反相色谱柱为一维制备色谱柱,对银杏叶提取物进行组分切割,收集目标组分为芦丁粗品。再以反相色谱柱为二维制备色谱柱,在质谱选择离子峰指导下,对芦丁粗品进行组分切割,收集,旋转蒸发浓缩,得到高纯度的芦丁,纯度可以达到80%以上。本发明专利技术无需加热,避免水解产物的掺杂,制备过程简单、重复性高,可操作性好,同时银杏叶资源丰富,容易获取,降低了成本,适合大规模生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药
,具体地说,涉及一种二维液相色谱一质谱联用制备高纯度芦丁的方法。
技术介绍
芦丁(Rutin),亦称芸香苷,广泛存在于植物界中。现已发现的含芦丁的植物已有50种以上。芦丁属于黄酮类化合物,能降低毛细血管通透性和脆性,促进细胞增生和防止血细胞凝聚,在心脑血管疾病的治疗上起到了举足轻重的作用。同时,芦丁还具有抗炎、抗过敏、利尿、解痉、镇咳、降血脂等方面的作用。临床上芦丁主要用于高血压病的辅助治疗和用于防治因芦丁缺乏所致的其它出血症,如防治脑血管出血、高血压、视网膜出血、紫癜、急性出血性肾炎、慢性气管炎、血液渗透压不正常、恢复毛细血管弹性等症,同时还用于预防和治疗糖尿病及合并高血脂症。国内外医药工业中用芦丁作原料生产芦丁片、维脑路通(羟乙芦丁)、芦丁镁铬盐、多维葡萄糖羟丁芦丁、槲皮素等心血管药物。特别是羟乙基芦丁片因其适合于闭塞型脑血管病、中心性视网膜炎、动脉硬化、冠心病、梗塞前综合征、血栓性静脉炎等,扩大了芦丁产品的应用范围和疗效,使芦丁的需求量进一步增大。对于芦丁的提取,通常采用碱提取酸沉淀方法,此法是利用芦丁具有酸性,可与碱成盐而溶于水,再加酸使其成酸性后游离析出,再经重结晶得到较纯的芦丁。此法虽然多年来一直被视为较理想的方法,但是因为加热提取,常有一定的水解产物存在,并且产率较低。近年来,人们开始逐步探索运用新技术、新方法提取纯化芦丁,包括热水提冷析出方法,热水提大孔树脂吸附纯化法,超声法,超临界C02提取法,连续回流提取法,煎煮法,渗漉法等(孟祥颖。芦丁的来源、用途及提取纯化方法,长春中医学院学报,2003,第19卷第2期:61-64)。但是目前的这些方法,处理步骤都比较繁琐,大部分的方法都存在高温加热而出现水解产物,使后续处理步骤增加。为了充分利用药材,使芦丁能够从药材中以原本状态被制备出来,无需经过酸碱添加,无需加热,避免水解产物的掺杂,因此需要发展一种操作简便、易于规模化生产、高 效率、高纯度芦丁的制备方法。银杏叶为银杏科植物银杏(Ginkgo biloba)的干燥叶,其提取物具有活血化瘀通络的功效。现在药理研究表明,银杏叶中富含大量黄酮和银杏内酯。我国是银杏资源的古国和大国,全国有20多个省市区大面积种植银杏树,银杏资源占全世界的70%,银杏叶的总产量每年在2X 107kg以上,资源极大丰富。而目前我国芦丁的生产主要以槐米为原料进行提取。槐米是槐花的花蕾,资源少,不能充分满足市场的需求。因此利用银杏叶提取芦丁,可以缓解芦丁原料供应紧张的现状,扩大心血管药物的来源,具有重要的现实意义。二维液相色谱技术是一门新兴技术,是用两根性质相同或不同的色谱柱对复杂样品进行分离。作为一种分析复杂样品的理想工具,它已被广泛应用于医药卫生、食品科学、环境和农业科学等各个领域。近年来,随着二维液相色谱理论及应用的发展,二维制备液相色谱也逐渐发展起来。与单维制备液相色谱相比,二维制备液相色谱不但具有更高的峰容量,而且两维具有不同的选择性。经过第一维简化的组分可以在第二维上根据不同的选择性而实现互补分离。结构相似的化合物可能在第二维得到有效分离,从而提高制备的效率和化合物纯度。
技术实现思路
针对上述缺陷,针对目前芦丁的提取制备中会有水解产物掺杂,操作繁琐,药材利用率低,药材资源不足的问题,本专利技术提供了一种以银杏叶提取物为原料,采用二维液相色谱一质谱技术制备芦丁的方法。为解决上述问题,本专利技术所采用的技术方案是:一种二维液相色谱一质谱联用制备高纯度芦丁的方法,其特征在于:步骤如下:从中药提取物中制备高纯度芦丁 ;将中药提取物溶于甲醇一水溶液,制得中药提取物溶液;采用分离纯化技术从中药提取物中制备高纯度芦丁 ;进一步地说:所述中药提取物为银杏叶提取物。更进一步地说:所述银杏叶提取物溶于25% - 75%的甲醇一水溶液,制得银杏叶提取物溶液,银杏叶提取物浓度为10 - 500mg/mL ; 所述银杏叶提取物溶于40 - 60%的甲醇一水溶液,银杏叶提取物浓度最佳为150 — 250mg/mL ;更进一步地说:所述分离纯化技术为二维液相色谱一质谱联用进行银杏叶提取物制备芦丁 ;采用液相色谱进行一维制备的色谱柱为反相C18,反相C8,Click OEG0采用液相色谱进行二维制备的色谱柱为反相C18,反相C8,Click OEG ;一维液相色谱制备采用的流动相为有机相与水相混合,洗脱条件按照有机相5 -65%等度或O — 50分钟有机相由5%提高到70%梯度进行;有机相为甲醇或乙腈,水相为水;对保留时间5 - 30分钟主成分为芦丁的组分进行收集,旋转蒸发至干,作为一维制备芦丁粗品;将一维制备芦丁粗品用25% - 75%的甲醇一水溶液溶解,至浓度为10 -80mg/mL ;对一维制备芦丁粗品,进行二维液相色谱制备;采用的流动相为有机相与水相混合,洗脱条件按照有机相5 - 30%等度或经O — 30分钟有机相由5%提高到40%梯度进行,二维制备根据质谱选择离子指导组分收集;有机相为甲醇或乙腈,水相为水;制备时流动相流速为60 - 120mL/min,制备时柱温为室温或25 — 40°C,制备时进样量为200 - 3000 μ L/针,检测器为DAD紫外检测器和质谱检测器;制备时流动相最佳流速为80 - lOOmL/min,制备时柱温为室温,制备时进样量为2000 — 2500 μ L/针,紫外检测器为360nm ;将二维液相色谱制备收集到的芦丁馏分进行旋转蒸发浓缩至干,得到芦丁化合物。更进一步地说:所述一维制备收集10 - 25分钟为主要含芦丁的组分,一维制备芦丁粗品用40% - 60%的甲醇一水溶液制成浓度为40 - 60mg/mL的芦丁粗品溶液。所述一维制备最佳流动相为乙腈(或含0.1%甲酸)与水(或含0.1%甲酸),采用梯度方式,乙腈比例由10%经15 — 20分钟增加到15% — 25% ;更进一步地说:所述二维制备最佳流动相为乙腈(或含0.1%甲酸)与水(或含0.1%甲酸),采用等度条件,乙腈(或含0.1%甲酸)浓度为10 - 15%,二维制备质谱选择离子为m/z = 303。由于采用了上述技术方案,与现有技术相比,本专利技术与现有技术相比具有以下特占-^ \\\.I)、芦丁纯度高。由于本专利技术所用的技术方法,直接针对植物中所含的芦丁进行制备,无需经过加热、酸碱的变化,芦丁以在药材中本身存在的状态被制备出来,没有水解产物掺杂,因此得到的芦丁纯度高,达到80%以上。2)、方法简单易行,操作简便。本专利技术所涉及的制备高纯度芦丁的方法,仪器自动化程度高,操作方便、简单,常温常压下就可进行,适合大规模生产的需要。3)、药材来源广,易获得,价格便宜。银杏是我国特有的珍贵树种,占全世界资源的70%,银杏叶的总产量每年在2 X 107kg以上,资源极大丰富。三九牌舒血宁注射液、银杏叶酊剂作为应用时间久、疗效明确、使用安全的中药注射剂,有着广泛的应用,而本专利技术 制得的高纯度芦丁是三九牌舒血宁注射液、银杏叶酊剂中一种重要的原料。而本专利技术提供的制备方法,过程重复性高,可操作性好,同时银杏叶资源丰富,容易获取,适合大规模生产的要求,可用于舒血宁注射液、银杏叶酊剂原料高纯度芦丁的制备。具体实施例方式实施例:本专利技术是以银本文档来自技高网
...

【技术保护点】
一种二维液相色谱-质谱联用制备高纯度芦丁的方法,其特征在于:步骤如下:从中药提取物中制备高纯度芦丁;将中药提取物溶于甲醇-水溶液,制得中药提取物溶液;采用分离纯化技术从中药提取物中制备高纯度芦丁。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:丰加涛付冬梅王海涛冯志琼
申请(专利权)人:北京华润高科天然药物有限公司
类型:发明
国别省市:

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1