本发明专利技术提供了一种银杏叶中高纯度黄酮组分的高效提取分离制备方法，其主要的成分是山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷，芦丁，槲皮素葡萄糖基鼠李糖苷，山奈酚-3-O-芸香糖苷，异鼠李素-3-O-芸香糖苷，槲皮素对香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷以及山奈酚对香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷。其制备方法为将银杏叶药材粉碎后醇水溶液提取，浓缩后滤液经非极性大孔吸附树脂柱层析，再经新型硅胶基质键合材料进行二维分离，用甲醇溶液洗脱，收集洗脱液并浓缩干燥，获得银杏黄酮组分。本发明专利技术提高了目标成分含量，黄酮组分含量确定。提取分离工艺过程重复性高、可操作性好，适用于自银杏叶大规模分离制备黄酮组分，并可作为舒血宁注射液原料。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药
，具体地说，涉及。
技术介绍
银杏属银杏科裸子植物，又叫白果树、公孙树，是我国特有的珍贵树种，也是世界上最古老的树种，被称做“活化石”，在我国有着广泛的分布。银杏在我国作为药用已有5000多年的历史，现代医学研究发现银杏叶具有降血脂、清除氧自由基、增强神经系统功能、调节急速水平、抗炎抗过敏等作用，近年来，银杏叶用作保健食品和植物药，广泛用于防治记忆力下降、痴呆及心脑血管疾病。银杏叶的化学成分较为复杂，其主要有效成分为黄酮和内酯两类。到目前为止，国内外关于银杏叶及其制剂的质量监控方法主要是测定黄酮醇苷和内酯含量，国际标准要求银杏制剂中的银杏黄酮含量大于24%，银杏内酯含量大于6%。关于银杏叶及其制剂中黄酮含量的测定方法，目前都是在水解的基础上，以槲皮素、山奈酚、异鼠李素三种黄酮苷元为对照，利用HPLC方法测定三种苷元的量，再乘以系数2.51计算得到的。这一系数是根据银杏叶总黄酮苷中认为活性强的香豆酰基黄酮醇苷的平均分子量760与苷元的分子量进行换算，是 建立在假设银杏叶中所有的黄酮醇苷分子量都是760的基础上，而实际上它只占银杏黄酮的一小部分。为了达到银杏黄酮24%的含量，个别银杏叶提取物会有人为添加芦丁的现象。同时，利用水解的方法测定银杏黄酮的含量，水解时间长，耗时费力，并且水解的条件如盐酸的浓度与加热时间会影响水解的程度，可能会出现水解不完全或水解过度，影响测定结果。为了提高银杏叶及其制剂的质量，同时能够充分体现银杏叶中黄酮醇苷的真实含量与成分，从而达到在生产和制剂过程中质量均一性，需要发展一种银杏叶提取制备方法，将银杏黄酮有效组分制备出来，明确成分，不需要水解便能直接测得它的真实含量，以此为指标，监测生产中每一步银杏黄酮的含量，可以提高产品的质量及稳定性。
技术实现思路
针对上述缺陷，本专利技术提供一种能够将银杏黄酮有效组分制备出来，明确成分，不需要水解便能直接测得它的真实含量，并且提高产品的质量及稳定性的银杏叶中高纯度黄酮组分的高效提取分离制备方法。为解决上述问题，本专利技术所采用的技术方案是:，其特征在于:步骤如下:1)、提取:称取含水量为1%_10%的银杏叶，加入其重量8-12倍，浓度为10%_50%乙醇，20-50°C浸泡提取2-5次，每次1-5天，合并提取液，将提取液浓缩得到相对密度为1.15-1.25 的浸膏；2)、醇沉:将浸膏中加入乙醇使乙醇体积浓度达到50-70%，并充分搅拌，0-4°C冷藏静置12-36小时，过滤，将滤液浓缩至相对密度为1.10-1.25的浸膏；再加入乙醇使乙醇体积浓度达到70-90%，并充分搅拌，0-4°C冷藏静置12-48小时过滤，将滤液浓缩挥发除去乙醇，浓缩得到相对密度为1.15-1.25的浸膏；3)、水沉:将醇沉完的浸膏中按照1:5-1:10的体积比加入水，充分搅拌，0-4°C冷藏静置24-240小时，过滤，样品溶液经过10000-25000转/分钟的高速离心机离心，样品浓缩至相对密度为1.05-1.10的浸膏；4)、大孔树脂分离:将水沉完的浸膏上样于非极性大孔树脂柱，上样量与分离材料体积比为1:5-1:50，分别采用不同体积浓度的乙醇水溶液作为洗脱液，分别采用水、体积浓度10-30%乙醇、体积浓度30-60%乙醇和60-90%乙醇洗脱，每次洗脱的体积为3_6个柱体积，流速为1-3个柱体积/小时；收集10-30%乙醇和60-90%乙醇洗脱组分，合并洗脱液并浓缩至相对密度为1.10-1.20的浸膏；5)、新型硅胶基质键合材料的二维液相色谱制备:以粒径10-100微米的新型硅胶基质键合材料为填料，以不同体积浓度的甲醇水溶液作为洗脱液，收集目标洗脱组分为一维组分，再以粒径为5-80微米的新型硅胶基质键合材料为填料，以不同体积浓度的甲醇水溶液作为洗脱液，收集目标洗脱组分为二维组分，干燥处理即为银杏黄酮组分化合物。进一步地说:所述步骤3)中，提取物水沉工艺结束后，先通过转速为10000-25000转/分钟的高速离心机离心，再进行大孔树脂分离。更进一步地说:所述步骤4)中，大孔树脂的型号为非极性聚苯乙烯型，大孔树脂分离洗脱时，其目标组分采用体积浓度为10 -30%乙醇和60-90%乙醇溶液洗脱，并将两种洗脱液合并浓缩。更进一步地说:所述步骤5)中，一维制备采用的洗脱液为不同体积浓度的甲醇水溶液，甲醇的体积浓度变化范围为15-60%，二维制备采用的洗脱液为不同体积浓度的甲醇水溶液，甲醇的体积浓度变化范围为10-50%。更进一步地说:所述制备得到的银杏叶黄酮组分为山奈酚-3-0-2”，6”_ 二鼠李糖基葡萄糖苷，芦丁，槲皮素葡萄糖基鼠李糖苷，山奈酚-3-0-芸香糖苷，异鼠李素-3-0-芸香糖苷，槲皮素对香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷以及山奈酚对香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷，其总含量占银杏叶质量的1.0-3.5%，得到的银杏黄酮组分纯度在70%以上，其中山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷占7-11%，芦丁占8-12%，槲皮素葡萄糖基鼠李糖苷占12-16%，山奈酚-3-0-芸香糖苷占13-15%，异鼠李素-3-0-芸香糖苷占15-18%，，槲皮素对香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷占9-11%，山奈酚对香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷占6-9%。 由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本专利技术与现有技术相比具有以下特占-^ \\\.1.银杏黄酮组分的含量高，成分和含量明确。由于本专利技术针对目标化合物的结构特点，设计了系统的提取分离制备工艺流程，并使用了大孔树脂和新型硅胶基键合材料，通过二维液相色谱分离制备，得到银杏黄酮组分纯度在70%以上，银杏黄酮组分中各银杏黄酮的成分和含量明确，可作为舒血宁注射原料。2.重现性好:本专利技术利用提取分离工艺的标准化，特别是大孔树脂柱层析分离的标准化，以及新型硅胶基质键合材料化学性能的稳定性，可以保证分离制备的重现性和稳定性。3.方法简单易行，操作简便。本专利技术使用的仪器自动化程度高，操作方便、简单，常温常压下就可进行，适合大规模生产的需要。4.有机残留低。由于本专利技术摒弃了传统工艺中溶剂萃取、硅胶柱层析等工艺，采用了有机溶剂使用量较少的大孔树脂分离和新型分离材料，而且最终产品采用干燥处理，所以最终产品的有机溶剂残留特别小。5.药材来源广，易获得，价格便宜:银杏是我国特有的珍贵树种，占全世界资源的70%，银杏叶的总产量每年在2 X 107kg以上，资源极大丰富。三九牌舒血宁注射液、银杏叶酊剂作为应用时间久、疗效明确、使用安全的中药注射剂，有着广泛的应用，而本专利技术制得的银杏黄酮组分是三九牌舒血宁注射液、银杏叶酊剂中一种重要的原料。而本专利技术提供的制备方法，过程重复性高，可操作性好，同时银杏叶资源丰富，容易获取，适合大规模生产的要求，可用于舒血宁注射液、银杏叶酊剂原料银杏黄酮组分的制备。具体实施例方式实施例:下面结合实例，对本专利技术做进一步说明。实例仅限于说明本专利技术，而非对本专利技术的限定。 实施例1:将含水量为6%的银杏叶原药材粉碎，定量称取10千克，置于200L提取罐加入重量100千克40%乙醇溶液，30°C浸泡提取3次，每次2天，合并提取液，将提取液浓缩得到相对密度为1.21的浸膏3.6L。将浸膏中加入乙醇使乙醇体积浓度达到60%，并搅拌30分钟，4°本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种银杏叶中高纯度黄酮组分的高效提取分离制备方法，其特征在于：步骤如下：1）提取：称取含水量为1%?10%的银杏叶，加入其重量8?12倍，浓度为10%?50%乙醇，20?50℃浸泡提取2?5次，每次1?5天，合并提取液，将提取液浓缩得到相对密度为1.15?1.25的浸膏；2）醇沉：将浸膏中加入乙醇使乙醇体积浓度达到50?70%，并充分搅拌，0?4℃冷藏静置12?36小时，过滤，将滤液浓缩至相对密度为1.10?1.25的浸膏；再加入乙醇使乙醇体积浓度达到70?90%，并充分搅拌，0?4℃冷藏静置12?48小时过滤，将滤液浓缩挥发除去乙醇，浓缩得到相对密度为1.15?1.25的浸膏；3）水沉：将醇沉完的浸膏中按照1:5?1:10的体积比加入水，充分搅拌，0?4℃冷藏静置24?240小时，过滤，样品溶液经过10000?25000转/分钟的高速离心机离心，样品浓缩至相对密度为1.05?1.10的浸膏；4）大孔树脂分离：将水沉完的浸膏上样于非极性大孔树脂柱，上样量与分离材料体积比为1：5?1：50，分别采用不同体积浓度的乙醇水溶液作为洗脱液，分别采用水、体积浓度10?30%乙醇、体积浓度30?60%乙醇和60?90%乙醇洗脱，每次洗脱的体积为3?6个柱体积，流速为1?3个柱体积/小时；收集10?30%乙醇和60?90%乙醇洗脱组分，合并洗脱液并浓缩至相对密度为1.10?1.20的浸膏；5)新型硅胶基质键合材料的二维液相色谱制备：以粒径10?100微米的新型硅胶基质键合材料为填料，以不同体积浓度的甲醇水溶液作为洗脱液，收集目标洗脱组分为一维组分，再以粒径为5?80微米的新型硅胶基质键合材料为填料，以不同体积浓度的甲醇水溶液作为洗脱液，收集目标洗脱组分为二维组分，干燥处理即为银杏黄酮组分化合物。...
【技术特征摘要】
1.一种银杏叶中高纯度黄酮组分的高效提取分离制备方法，其特征在于:步骤如下: 1)提取:称取含水量为1%-10%的银杏叶，加入其重量8-12倍，浓度为10%-50%乙醇，20-50°C浸泡提取2-5次，每次1-5天，合并提取液，将提取液浓缩得到相对密度为.1.15-1.25 的浸膏； 2)醇沉:将浸膏中加入乙醇使乙醇体积浓度达到50-70%，并充分搅拌，0-4°C冷藏静置12-36小时，过滤，将滤液浓缩至相对密度为1.10-1.25的浸膏；再加入乙醇使乙醇体积浓度达到70-90%，并充分搅拌，0-4°C冷藏静置12-48小时过滤，将滤液浓缩挥发除去乙醇，浓缩得到相对密度为1.15-1.25的浸膏； 3)水沉:将醇沉完的浸膏中按照1:5-1:10的体积比加入水，充分搅拌，0-4°C冷藏静置24-240小时，过滤，样品溶液经过10000-25000转/分钟的高速离心机离心，样品浓缩至相对密度为1.05-1.10的浸膏； 4)大孔树脂分离:将水沉完的浸膏上样于非极性大孔树脂柱，上样量与分离材料体积比为1:5-1:50，分别采用不同体积浓度的乙醇水溶液作为洗脱液，分别采用水、体积浓度10-30%乙醇、体积浓度30-60%乙醇和60-90%乙醇洗脱，每次洗脱的体积为3_6个柱体积，流速为1-3个柱体积/小时；收集10-30%乙醇和60-90%乙醇洗脱组分，合并洗脱液并浓缩至相对密度为1.10-1.20的浸膏； 5)新型硅胶基质键合材料的二维液相色谱制备:以粒径10-100微米的新型硅胶基质键合材料为填料，以不同体积浓度的甲醇水溶液作为洗脱液，收集目标洗脱组分为一维组分，再以粒径为5-80微米的新型硅胶基质键合材料为填料，以不同体积浓度的甲醇水溶...
【专利技术属性】
技术研发人员：丰加涛，付冬梅，王海涛，冯志琼，
申请(专利权)人：北京华润高科天然药物有限公司，
类型：发明
国别省市：
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