本发明专利技术提供了一种提高银杏类黄酮含量的方法，其步骤包括：用金雀异黄素处理银杏。进一步的，本发明专利技术还提供了金雀异黄素在提高植物类黄酮含量中的应用。通过对银杏施加金雀异黄素，改变了银杏体内生理代谢水平、促进银杏光合作用，从而促进类黄酮积累，提高银杏类黄酮含量，提高银杏的药用和经济价值，且操作简便，成本低廉。经金雀异黄素处理的叶片，类黄酮、花青素含量、可溶性糖含量、叶绿素含量显著提高，抗氧化酶活性、苯丙氨酸解氨酶、查尔酮合成酶及查尔酮异构酶活性明显增强，因此不仅提高类黄酮含量，还大大提高了植物的抗性，从而提高植物产量和品质，具有良好的推广应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于农业科技
，特别涉及一种提高银杏类黄酮含量的方法及金雀 异黄素的应用。
技术介绍
银杏(Ginkgo biloba L.)原产我国，银杏科银杏属，落叶乔木，雌雄异株，又称白 果树、公孙树。银杏是目前世界上最古老的孑遗植物，有着"活化石"之称。科学家早在上世 纪70年代已研究证明银杏叶提取物对心脑血管疾病非常好的治疗效果，自此银杏的药用价 值被人们广泛关注，如今银杏已经成为国际药用植物研究开发的热点之一。其中银杏类黄 酮化合物是治疗老年性痴呆症的首选天然药物，对高血压、动脉粥样硬化、糖尿病、心血管 疾病等也有十分显著的治疗效果。此外，黄酮类化合物广泛分布于植物界，具有很多的生物 学功能，如调节植物生长，保护植物免受紫外线，抗氧化活性，抗衰老，抵御致病菌侵袭，影 响植物的生殖力和花粉的萌发。虽然银杏类黄酮类化合物具有重要的药理和生理活性，但 是在银杏体内含量低，不易提取，所以提高银杏叶类黄酮含量从而提高银杏的抗性已经成 为研究重点。金雀异黄素(Genistein，GNT)又称为染料木黄酮或染料木素，是一种大豆体内天 然存在的异黄酮类物质，还是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂，被用来研究细胞G蛋白信号的转 导。金雀异黄酮及其糖苷具有弱雌激素样活性，具有良好的抗癌、抗氧化和抑制过氧化氢生 成、预防中老年骨质疏松症、改善女性更年期综合症和心血管疾病、增加抗氧化酶活性等作 用，广泛用作营养食品补充剂。 近年来众多研究表明GNT可以促进畜禽类的生长，提高泌乳或产蛋性能，提高繁殖 力和增强机体免疫力，可以促进蟠桃果实着色，提高蟠桃糖酸比，促进苹果果实着色和桃果 实着色，增加葡萄果实花青苷积累等。但是对于GNT在植物类黄酮方面的研究，未有任何相 关报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了， 解决了银杏叶片类黄酮含量极低的问题，提供了一种操作简便，成本低，可以高效提高银杏 类黄酮含量方法。 本专利技术第一方面提供了一种提高银杏类黄酮含量的方法，其步骤包括：用金雀异 黄素处理银杏。 本专利技术第二方面提供了金雀异黄素在提高植物类黄酮含量中的应用。 本专利技术的有益效果是:①本专利技术通过对银杏施加金雀异黄素，改变了银杏体内生 理代谢水平，促进银杏光合作用，从而促进类黄酮积累，提高银杏类黄酮含量，提高银杏的 药用和经济价值，且操作简便，成本低廉。 ②经金雀异黄素处理的叶片，类黄酮、花青素含量、可溶性糖含量、叶绿素含量显 著提高，抗氧化酶活性、苯丙氨酸解氨酶、查尔酮合成酶及查尔酮异构酶活性明显增强，因 此不仅提高类黄酮含量，还大大提高了植物的抗性，从而提高植物产量和品质，具有良好的 推广应用前景。【具体实施方式】本专利技术第一方面提供了一种提高银杏类黄酮含量的方法，其步骤包括：用金雀异 黄素处理银杏。对银杏施加金雀异黄素，改变了银杏体内生理代谢水平、促进银杏光合作 用，从而促进类黄酮积累，提高银杏类黄酮含量，且植物的花青素含量、可溶性糖含量、叶绿 素含量显著提高，抗氧化酶活性、苯丙氨酸解氨酶、查尔酮合成酶及查尔酮异构酶活性明显 增强。优选的，所述金雀异黄素配制为金雀异黄素的水溶液后处理银杏，所述金雀异黄 素浓度为50-150ymol/L。一定范围内随着喷施金雀异黄素浓度的增高，银杏叶片中的类黄 酮含量呈上升趋势，而银杏叶花青素、苯丙氨酸解氨酶含量呈现先上升后下降的趋势，50-150ymol/L的浓度范围内各个参数均较佳，更加有利于银杏光合作用及体内生理代谢。 更加优选的，所述金雀异黄素水溶液中含有增溶剂。所述增溶剂可增加金雀异黄 素在水溶液中的溶解度，分散更加均匀，有利于植物对金雀异黄素的吸收。 进一步优选的，所述增溶剂为吐温，所述吐温占金雀异黄素水溶液的体积百分比 为0.05-0.2% 〇 优选的，所述处理的方法为在银杏发芽一个月后将金雀异黄素喷布于银杏叶片表 面。施用金雀异黄素的最佳时机为银杏发芽一个月后，此时对银杏作用的效果更加显著。 更加优选的，所述金雀异黄素的用量为1-5μπι〇1。 本专利技术第二方面提供了金雀异黄素在提高植物类黄酮含量中的应用。 优选的，所述植物为银杏。 更加优选的，所述应用的步骤包括:在银杏发芽一个月后，将金雀异黄素配制为金 雀异黄素的水溶液后喷布于银杏叶片表面，所述金雀异黄素浓度为50-150ymol/L，所述金 雀异黄素水溶液中含体积百分比为〇. 05-0.2 %的吐温。 下面将结合实施例对本专利技术提供的一种提高银杏类黄酮含量的方法及金雀异黄 素的应用予以进一步说明。 实施例1 1测试方法 本实施例中各测定方法如下，实施案例中未注明具体条件的实验方法，按照常规 条件，或按照制造厂商所建议的条件。 1.1银杏叶绿素含量测定按照下列方法进行叶绿素 a，叶绿素 b含量的测定。取3g鲜叶、打孔取样、研磨、加入 80%丙酮浸提，定容后在663nm和645nm波长下测量，根据C(mg · L-4 = 20.31 OD 645+8.04 00 663，（00为分光值)计算叶绿素浓度。最后用公式:￥〇1^(11^2)=换算成叶绿素含量。进行3次重复测定，取平均值。 1.2花青素含量的测定 利用分光光度法对叶片花青素的含量进行测定，进行3次重复测定，取平均值。 1.3银杏可溶性糖含量的测定采用蒽酮比色法测定可溶性糖，四组处理分别称量IOg银杏叶烘干，取Ig烘干后的 叶片用IOml乙醇溶液研磨成匀浆，静置30min后，4500rpm离心15min，取上清液3ml到25ml容 量瓶加水定容。然后取Iml稀释液加入5ml蒽酮试剂，煮沸lOmin，冷却后在620nm测定吸光 值。 1.4银杏苯丙氨酸解氨酶活性的测定 用紫外分光光度法测定银杏苯丙氨酸解氨酶活性，取2.Og新鲜银杏叶片，加入3ml 硼酸缓冲液和〇. 5g PVP，研磨，10 OOOrpm离心15min，取上清。取O . 5mL苯丙氨酸溶液加入 0.5ml上清液。然后加入IOml蒸馏水，在40°C的水浴中加热30min，再在沸水中煮5min终止反 应，在290nm下测定分光光度值，以吸收变化0.01所需酶量作为一个酶活性单位(U)。进行3 次重复测定，取平均值。 1.5银杏类黄酮含量的测定紫外分光光度法测定提取物中总黄酮含量，称取银杏鲜叶I . 0 g后烘干，加 10ml70 %乙醇浸泡、抽滤，重复三次。合并滤液，定容至50ml待测。吸取5ml 100ug/L芦丁溶 液、30%乙醇 10ml、0.7ml 5%NaN〇2、混匀后加入0.7ml 10%AlCl3(35min后加5ml 40%Na0H， 30%乙醇定容25ml。35°(3水浴IOmin后，510nm波长测定吸光度。以芦丁为标样，类黄酮含量 以百分比表示。 1.6银杏抗氧化酶活性的测定采用氮蓝四唑法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性，以抑制NBT光化学还原的50 %为 一个酶活性单位(U);采用愈创木酚显色法测定过氧化物酶(POD)活性，以每分钟内470nm下 的光密度(D470nm)变化0.1为一个酶活性单位(U);采用紫外吸收法测定过氧化氢酶(CAT)活性，以Imin内A24q降低0.1为一个酶活性 单位(U);利用APX在H2O2存在的条件下使抗坏血酸量减少的原理测定酶活性，紫外本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种提高银杏类黄酮含量的方法，其步骤包括：用金雀异黄素处理银杏。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：许锋，叶家保，杨湘虹，张威威，廖咏玲，陈强文，
申请(专利权)人：长江大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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