蝗虫取食偏好性检测的方法及检测试剂盒技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体地涉及蝗虫取食偏好性检测的方法及检测试剂盒。方法包括使用针对克氏针茅基因特异性引物序列、羊草基因特异性引物序列、糙隐子草基因特异性引物序列、小叶锦鸡儿基因特异性引物序列、冷蒿基因特异性引物序列、猪毛菜基因特异性引物序列进行荧光定量PCR的步骤。本发明专利技术所提供的检测方法可以用于快速而精准的检测蝗虫食性。本发明专利技术的检测方法涉及的材料来源广，易购买，操作简单，省时，省力，适于推广应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体地涉及蝗虫取食偏好性检测的方法及检测试剂盒。
技术介绍
植物为昆虫提供食物与栖境，植食性昆虫对寄主植物有明显的选择性。蝗虫是生态系统中重要的成员，在生物链中发挥重要的作用。同时也是消费者之一，为害农业生产，与牲畜争食饲用植物。定性定量检测蝗虫的食性食量可以生物防治、生态治理、多样性调控提供技术指导。蝗虫食性研究方法有罩笼内蝗虫取食特性研究、蝗虫口器结构适应性测试、蝗虫粪便形态特征分析、蝗虫消化道形态学研究、直翅目昆虫嗦囊内含物(食糜)显微分析技术等；最常见的蝗虫食量测定方法包括:叶面积消耗测定食量法、对比称重测定食量法、粪便量推测食量法罩等。这些方法在同时分析不同种类蝗虫、取食多种植物时存在一定局限，定量误差较大。高等植物中的ITS序列是18SrDNA-5.8SrDNA_26SrDNA间隔区序列，所受的选择压力小，进化速率较快，在物种间表现出较高的差异。因此，ITS序列可以作为植物种类定性遗传标记，应用定量PCR技术，可以精准而快速的定性定量检测蝗虫取食特性。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种蝗虫取食偏好性检测的方法。本专利技术的再一目的是提供蝗虫取食偏好性检测的试剂盒。根据本专利技术的方法，首先克隆得到:1、克氏针茅 ITS 区基因序列(5，-3，)SEQ ID N0.1:TACGACAACAGACCGCGCACGCGTCACCCATCCCGCCGGCGGTGGCACTGCCCGCCGTCCGGCCAAGTCCCCGACCACCTCCCCTCCCCGGAGGGGGGGCCGGGGCGACAGAACCCACGGCGCCGAAGGCGTCAAGGAACACTATGCCTAACTCGGGGGCGCGGCTGGCCTGCCGGCCGCCCCCTGCGTTGCGATGCTATCTAATCCACACGACTCTCGGCAACGGATATCTCGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGTAGCGAAATGCGATACCTGGTGTGAATTGCAGAATCCCGCGAACCATCGAGTCTTTGAACGCAAGTTGCGCCCGAGGCCACCCGGCCGAGGGCACGCCTGCCTGGGCGTCACGCCAAAACACGCTCCCACCCCCCTCACCGGGGAGCGGGACGCGGCGTCTGGCCCCCCGTGCCGCGAGGCGCGGTGGGCCGAAGATCGGGCTGCCGGCGTACCGTGCCGGGCACAGCGCGTGGTGGATCTCTACTCGGCGCAGTGCACCCGGCGCGTAGCCAGCGCAGTGGCCCCCTAAGGACCCAACGAACGGAGCGCGAGCCGCTCCGACCGCGACCCCAGGTCAGGCGGGACTACCCGCTGAGTTTAAGCATATCAATAAA2、羊草 ITS 区基因序列(5，-3，)SEQ ID N0.2:GACGACAAACAGAC CGCGCACGCGTCATCCAATCCGCCGGTGGCGGCACCGTCCGTCGCTCGGCCAAGTCCTCGACCGCCTCCCCTCCTCGGAGTGGGGGCTCGGGGTAAAAGAACCCACGGCGCCGAAGGCGTCAAGGAACACTGTGCCTAACCCGGGGGCATGGCTAGCTTGCTAGTCGTCCCCCGTGTTGCAAAGCTATTTAATCCACACGACTCTCGGCAACGGATATCTCGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGTAGCGAAATGCGATACCTGGTGTGAATTGCAGAATCCCGCGAACCATCGAGTCTTTGAACGCAAGTTGCGCCCAAGGCCACTCGGCCGAGGGCACGCCTGCCTGGGCGTCACGCCAAAACACGCTCCCAACCCCCCTCATCGGGAATAGGGATGCGGCATATGGTCCCTCGTCTCGCAAGGGGCGGTGGGCCGAAGATCGGGCTGCCGGCGGACCGCGCCGGACACAGCGCATGGTGGGCGTCCTCGCTTTATCAACGCAGTGCATCCGACGCGTAGCCGGCGTGATGGCCTCAAAAGGACCCAGCAAACGAAGCGCACGTCGCTTCGACCGCGACCCCAGGTCAGGCGGGACTACCCGCTGAGTTTAAGCATATCAATAAA3、糙隐子草 ITS 区基因序列(5，-3，)SEQ ID N0.3:TCCCGTCTTTAGTCTTGTCGTGACCTGACCAAACAGACCGTGAACATGTCATCCATGCGGCCGGGTCACGGGACTTGCACCCGTGTCTCGGTAC AGGCCGCTGACCTTCTTTCGGAGGTGAGTAGCCACAAAAGAACCCACGGCGCTGTATGGCGTCAAGGAACACTAATATTGCCTTGCTCGGGGCAGCACCGGCTCGCCGGCCGCACCCTGTGCAGCGATGCTATGATAATCCACATGACTCTCGGCAACGGATATCTCGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGTAGCAAAATGCGATACCTGGTGTGAATTGCAGAATCCCGTGAACCATCGAGTTTTTGAACGCAAGTTGCGCCCGAGGCCTTCTGGTTGAGGGCACGTCTGCCTGGGCGTCACGCCAAAAGACACTCCCCACCCACCCCGGTGCGGACGTGGTGTTTGGCCCCTCGTGCCAAAGGGCGCGGTGAGCCAAAGTTGGGGCTGCCGGCGGTGCCGATCACAGCACAAGGTGGATGACGCATGTTGTTCTCGGTGCTCTGTTATGGACCGCTACCGGTGATATGGCCCTCAGGACCCATGGACCGAAGCGCAAGTTGCTTGGACCGCGACCCCAGGTCAGTCGGGATTACCCGCTGAGTTTAAGTATAATTCAATAAAA4、小叶锦鸡儿ITS区基因序列(5，-3，)SEQ ID N0.4:CCGTGCGGTAGTCTTGTCGATGCCTTACATGCAGACCGACCTGTGAATCTGTTTGAACACGTAGGGCTGGCTTGAGGTGTTCCACGCCTCGACCTCCCTTGAGGTAGGAGGGGGCCATGAGTGTGTTCCCCTGCTTGCCCAAACACAAACCCCGGCGCTGAATGCGCCAAGGAACTAAATTTCGTTCAGTGCGCCCCCGTTGGCCCGGAGACGGTGCTCCTACGGGTGGTGTTTTGAAGCATGACACATAATGACTCTCGGCAACGGATATCTAGGCTCTTGCATCGATGAAGAACGTAGCGAAATGCGATACTTGGTGTGAATTGCAGAATCCCGTGAACCATCGAGTCTTTGAACGCAAGTTGCGCCCGAAGCCATTAGGTTGAGGGCACGTCTGCCTGGGCGTCACA本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蝗虫取食偏好性检测的方法，其特征在于，所述方法包括使用以下一对或多对引物进行荧光定量PCR扩增的步骤：（1）克氏针茅基因特异性引物序列：F：5’GGCACAGCGCGTGGTGGATCTC3’R：5’TGCTTAAACTCAGCGGGTAGTC3’。（2）羊草基因特异性引物序列：F：5’AATCGGGATGCGGCATC3’R：5’CATCCGACGCGTAGCCG3’（3）糙隐子草基因特异性引物序列：F：5’CTGTGCAGCGATGCTATGA3’R：5’TGCGGACGTGGTGTTTG3’（4）小叶锦鸡儿基因特异性引物序列：F：5’CTGTGCAGGGTGAATGA3’R：5’TGAGACTCTACCAAACT3’（5）冷蒿基因特异性引物序列：F：5’CACAATGTGTGCCAAGGA3’R：5’GGGATGCGGCTTCTTTAT3’（6）猪毛菜基因特异性引物序列：F：5’TGCGGCACCCACTCTAAAA3’R：5’GATGTGGGGGAGGAGGA3’。

【技术特征摘要】
1.一种蝗虫取食偏好性检测的方法，其特征在于，所述方法包括使用以下一对或多对引物进行荧光定量PCR扩增的步骤: (O克氏针茅基因特异性引物序列:F:5’ GGCACAGCGCGTGGTGGATCTC3’R:5’ TGCTTAAACTCAGCGGGTAGTC3’。(2)羊草基因特异性引物序列:F:5’ AATCGGGATGCGGCATC3’R:5，CATCCGACGCGTAGCCG3， (3)糙隐子草基因特异性引物序列:F:5’ CTGTGCAGCGATGCTATGA3’R:5’ TGCGGACGTGGTGTTTG3’ (4)小叶锦鸡儿基因特异性引物序列:F:5’ CTGTGCAGGGTGAATGA3’R:5’ TGAGACTCTACCAAACT3’ (5)冷蒿基因特异性引物序列: F:5’ CACAATGTGTGCCAAGGA3’R:5’ GGGATGCGGCTTCTTTAT3’ (6)猪毛菜基因特异性引物序列:F:5，TGCGGCACCCACTCTAAAA3，R:5’ GATGTGGGGGAGGAGGA3’。2.根据权利要求1所述蝗虫取食偏好性检测的方法，其特征在于，克氏针茅基因特异性引物序列的退火温度为55°C，羊草基因特异性引物序列的退火温度为57°C，糙隐子草基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴惠惠，曹广春，张泽华，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：