具有镇痛作用并抑制ASIC通道的新型肽制造技术

本发明专利技术涉及引起痛觉缺失并抑制ASIC通道(酸敏感离子通道)的新型分离的肽，涉及编码所述肽的多核苷酸，还涉及包含其的药物组合物、宿主细胞和载体。具体地，所述肽从蛇黑树眼镜蛇(Dendroaspis?polylepis)的毒液分离。本发明专利技术还涉及其用作诊断工具或用作药物、具体地用作镇痛剂、或用于鉴定镇痛剂分子或抑制ASIC通道的分子的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及引起痛觉缺失并抑制ASIC通道(酸敏感离子通道)、更具体地包含选自ASICla和ASIClb的至少一种亚基的同聚体ASICla通道、同聚体ASIClb通道和/或异聚体通道的新型肽，涉及编码所述肽的多核苷酸，还涉及包含其的药物组合物、宿主细胞和载体。具体地，所述肽展现与所附序列表中的氨基酸序列SEQ ID No:1至少56%的同一性。具体地，它们是从蛇黑树眼镜蛇(Dendroaspis polylepis)(黑曼巴蛇)的毒液分离的两种57 个氨基酸的肽 ASICalgin-1 (i1-Dpi)和 ASICalgin-2 ( π-Dp2)，序列分别为 SEQ ID No:2 和 SEQ ID No:3o本专利技术还涉及其用于获得诊断工具或药物、具体地镇痛剂、和用于鉴定镇痛剂分子或抑制ASIC通道的分子的用途。具体地，本专利技术在预防或治疗疼痛、尤其是牵涉ASIC通道的活化的疼痛(例如炎症性疼痛、神经病性疼痛、癌症相关疼痛、手术后疼痛、肌肉骨骼痛、内脏痛等疼痛)、中枢神经疾病(例如，创伤后应激、抑郁、焦虑、中风、癫痫、多发性硬化、大脑炎症、神经退行性疾病等)、和其中已经提出牵涉ASIC通道的病理状况(例如，炎症、癌症、纤维肌痛、过敏性肠综合征等)方面具有应用。在以下说明书中，方括号([])中的参考文献是指在说明书末尾展示的参考文献的列表。现有技术水平疼痛的考虑和治疗是改进患者生活质量的必要方面。疼痛影响可观数目的个体，每年欧洲约6000万人，这代表用于 治疗所述疼痛的镇痛剂药物的每年10亿美元的开销。每年全世界花在镇痛剂药物上的总额可评估为大约250亿美元，在2010年应达到420亿美元。疼痛分为两类:急性疼痛和慢性疼痛。急性疼痛对应时间有限的快速和短暂疼痛。相反地，慢性疼痛是持续的疼痛，可以与例如痛觉增敏关联，并构成巨大的疾病负担，影响大约20 %的成年人和50 %的年长人群。疼痛的治疗基本上是基于抗炎药的处方，无论抗炎药是非类固醇抗炎药(NSAID)还是类固醇抗炎药(肾上腺皮质激素)，以及弱的或是强的阿片。NSAID由于其对炎症和对疼痛本身的大的效力，成为全世界最广泛开处方的治疗剂种类。它们用在所有类型的炎性疼痛中，无论是急性还是慢性的[Bertin和Vergne-Salle，2007] [I]。当NSAID和/或肾上腺皮质激素不足以缓解炎性疼痛时，开处方的医师组合非抗炎性镇痛剂，例如扑热息痛、弱的阿片样物质(opioid)(可待因、曲马多)，如果疼痛继续对治疗耐受，则组合强的阿片样物质(吗啡、氧可酮、芬太尼)[Gutstein & Akil, 2006] [2]。尽管NSAID非常有效，然而它们仍然是不利副作用的主要提供者。在最标准的不利副作用之中，消化影响是非常常见的并限制NSAID在许多临床情况中的应用。还存在肾、皮肤、粘膜、变应性和呼吸、血液学、肝以及最后感觉神经和心理学不利副作用[Bertin和Vergne-Salle，2007，上述][I]。此外，NSAID并非对所有类型的疼痛有效。阿片样物质也在对抗疼痛中起主要作用，但会导致幻觉现象和心肺衰减(cardiorespiratorydepression)。镇痛剂还可以是依赖性的来源,例如吗啡、美沙酮等的依赖性。还存在习惯镇痛剂的情形，即获得恒定作用必需的剂量必须增加。这一习惯随着时间增加，因此导致增加剂量的需要，并可导致药物无效。事实上，缓解疼痛必需的剂量可以变得大于所述药物的毒性剂量。最后，用阿片样物质治疗还可以伴有不利作用，诸如严重便秘或治疗停止时痛觉增敏(例如手术后疼痛)[Gutstein & Akil, 2006,上述；Bannister & Dickenson, 2010] [2,3] ο尽管现有治疗剂库的多样性，许多类型的疼痛仍然对已知镇痛剂相对不敏感，诸如神经系统损伤后的神经病性疼痛(50%的患者未经历缓解)、慢性内脏疼痛诸如过敏性肠综合征或慢性炎性肠病、纤维肌痛、癌症和骨转移带来的疼痛等。[Yennurajalingam等，2004 ；Mizoguchi 等，2009] [4，5]。因此在这一背景下，补偿这些不足和缺陷的新型镇痛剂和/或新型镇痛剂靶的发现应代表真正的进展。制药工业对疼痛的研究在过去数年仅获得数个有限的发展。可提及例如，用于偏头痛的曲坦类、和其用途仍然有限的某些新型药物，诸如用于癌症相关的疼痛和神经病性疼痛的四氢大麻酚和大麻二酚的组合。事实上，过去二十年取得的进展基本上来自于可获得的镇痛剂的更好用途和剂量的调整。由于有限的效力和/或显著的副作用，这些镇痛剂的主要家族都不具有最佳的益处/风险比。在过去数年鉴定的分子靶之中，离子通道占据特别重要的位置，因为它们直接参与感觉和中枢神经元对疼痛信号的检测和传递。ASIC通道(酸敏感离子通道)是由细胞外介质的酸化(细胞外酸中毒)活化的阳离子通道[Waldmann & Lazdunski, 1998 ；ffemmie等，2006 ;Lingueglia等，2007] [6，7，8]。迄今已经在哺乳动物中鉴定了编码至少七种亚基(ASICla、ASIClb、ASIClb2、ASIC2a、ASIC2b、ASIC3 和 ASIC4)的四种基因。不同 ASIC亚基缔合为三聚体产生功能性ASIC通道[Jast`i等2007] [9]，导致同聚体或异聚体通道[Lingueglia 等，1997 ；Benson 等，2002 ；Hesselager 等，2004] [10,11,12]。ASIC 通道基本上在外周神经系统的感受伤害的感觉神经元和中枢神经系统神经元中表达[Waldmann等，1997a ;Lingueglia 等，2007，上述；Noel 等，2010] [13，8，14]。尽管 ASICla 和 ASIC2 同种型在中枢神经系统和外周神经系统二者中都存在，但ASIClb和ASIC3同种型的表达限于感觉神经兀[Waldmann 等，1997b ；Bassler 等，2001 ；Chen 等，1998] [15,16,17]。已经假设，由感觉神经元表达的ASIC通道、尤其是ASIC3通道，能够检测缺血、炎症、血肿、骨折、病变、手术程序(手术后疼痛)、或某些肿瘤发展期间可能发展的细胞外酸化[Reeh和Steen，1996] [18]。当其发生时，多年来已经已知细胞外酸中毒导致疼痛[Steen等，1995a ；Issberner等，1996] [19, 20],而且对健康人类志愿者进行的实验[Ugawa等，2002 Jones等，2004] [21，22]借助为ASIC通道的非特异性抑制剂的阿米洛利和某些NSAID已经显示ASIC通道牵涉在酸性皮肤疼痛中[Waldmann等，1997a，上述；Voilley等，2001] [13，23]。还已经证实了中枢神经系统神经元中表达的某些ASIC通道在神经元活性(海马、杏仁核的突触可塑性)和脊髓神经元传递疼痛信息(ASICla通道)的神经调节中的重要作用[Noel 等，2010] [14]。直到最近，能够抑制ASIC通道的活性配体的清单主要限于阿米洛利、某些NSAID和化合物A-3175本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.07.26 FR 10031361.一种肽，所述肽包括氨基酸序列LKCX4QHGKVVTCHRDMKFCYHNTGMPFRNLKLILQGCSSSCSETENN KCCSTDRCNK(SEQ ID No:1)其中X4代表任何氨基酸；或展现与序列SEQ ID No:1至少56%的同一性并保留包括序列SEQ ID No:1的所述肽的生物特性的序列。2.按权利要求1所述的肽，其中所述肽是包含选自由ASICla亚基和ASIClb亚基组成的组的至少一种亚基的至少一种ASIC通道的阻断剂。3.按权利要求2所述的肽，其中所述肽是同聚体ASICla通道、同聚体ASIClb通道、异聚体ASICla+ASIClb通道和/或异聚体ASICla+ASIC2a通道的阻断剂。4.按权利要求1至3任一项所述的肽，其中在序列SEQID No:1中，X4代表Y或F。5.一种多核苷酸，包括编码如权利要求1至4任一项所定义的肽的核苷酸序列。6.按权利要求5所述的多核苷酸,包括核苷酸序列: atgaaaactctgctgctgaccttgctggtggtgacaatcgtgtgcctagacttaggatactccctgaaatg t73txx75caacatggtaaagttgtgacttgtcatcgagatatgaagttttgctatcataacactggcatgcc ttttcgaaatctcaagctcatcctacagggatgttcttcttcgtgcagtgaaacagaaaacaataagtgttgctcaacagacagatgcaacaaatag(SEQ ID No:4);或ctgaaatgt10txx12caacatggtaaagttgtgacttgtcatcgagatatgaagttttgctatcataacact ggcatgccttttcgaaatctcaagctcatcctacagggatgttcttcttcgtgcagtgaaacagaaaacaa taagtgttgctcaacagacagatgcaacaaatag(SEQ ID No:22)；其中 73txx75 和 1Qtxx12 代表 tac、tat、ttt 或 ttc。7.按权利要求5所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸在严格条件下与核苷酸序列SEQID No:4或SEQ ID No:22、或其互补序列杂交。8.按权利要求5或7所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸包括展现与序列SEQID No:4或序列SEQ ID No:22至少76%的同一性的天然或合成序...

【专利技术属性】
技术研发人员：埃里克·林古艾格利亚，西尔维·狄奥舒特，安妮·巴伦福斯特，米格尔·萨利纳斯，米歇尔·拉兹敦斯基，
申请(专利权)人：国家科学研究中心，
类型：
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