本发明专利技术涉及长柱金丝桃药材HPLC指纹图谱的建立方法，包括供试品溶液的制备、色谱条件的选择，通过对10批次长柱金丝桃药材HPLC指纹图谱的对比，确定其共有指纹特征峰，得到长柱金丝桃药材的标准指纹图谱。本发明专利技术长柱金丝桃药材标准指纹图谱将长柱金丝桃药材作为一个整体对待，通过比较其共有特征峰可以找出不同药材之间的细微差异，因此适于对长柱金丝桃药材的真伪的鉴别和质量控制，保证了长柱金丝桃药材质量的稳定、均一和可控。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药质量控制标准
，涉及一种中药材指纹图谱的建立方法，尤其是长柱金丝桃高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱和应用。
技术介绍
中药指纹图谱特指中药样本经光谱或色谱等现代分析技术得到的中药各组分群体特征的图谱的图象。目前指纹图谱已成为国内外公认的鉴别中药品种和评价中药质量的最有效的手段之一。美国食品药品管理局在1996年制定的中，要求对植物原料、植物药中间品和植物药产品提供相应的《FDA关于植物制品的指南》指纹图谱。英国草药典、印度草药典以及加拿大药用及芳香植物学会、德国药用植物学会液接受色谱指纹图谱。中国国家药品监督管理部门于2000年发布了《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》，明确要求对新申报的中药注射剂和已上市的中药注射剂实行指纹图谱标准。中药指纹图谱经过了数十年的研究，使用了包括紫外、红外、气相、高效液相、薄层、核磁共振、扫描电子显微镜、计算机图像分析、电泳技术、同工酶分析法、分子生物学技术、聚类分析技术等许多现代分析测试手段，为中药的物质鉴定和成分分析积累了大量的数据。但从中药全面质量控制的角度看，还远未达到有效地反应和控制中药的整体质量的目的。高效液相色谱(HPLC)指纹图谱在国际上容易获得认可，包括美国、英国、法国、加拿大、德国、日本和印度在内的许多国家更愿意接受HPLC指纹图谱。因此，为中药材建立相应的HPLC指纹图谱，是现阶段控制中药内在质量的有效手段之一。长柱金丝桃(Hypericum ascyron L.)又名红旱莲,为藤黄科金丝桃属植物黄海棠的干燥地上部分，以全草入药，别名湖南连翘、黄海棠，收载于《全国中草药汇编》，性寒，味微苦。具有凉血止血、清热解毒。用于治疗出血、跌打损伤、疮疖肿毒、肝炎等症。现代药理研究表明长柱金丝桃具有平喘，止咳，祛痰的作用。目前，人们对长柱金丝桃的质量控制还只限于对其诸多组分中的某个有效成分或指标性成分进行定性、定量分析，缺乏全面反映长柱金丝桃质量标准的控制手段。通过检索，尚未发现与本专利技术申请相关的专利公开文献。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种方法简单、易于操作、稳定性和重现性良好的长柱金丝桃高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱，该方法及标准指纹图谱可应用于长柱金丝桃药材的真伪的鉴别和质量控制中。本专利技术实现目的的技术方案是:一种长柱金丝桃药材HPLC指纹图谱的建立方法，步骤如下:⑴供试品溶液的制备:取长柱金丝桃阴干全草粉碎成粗粉，采用超声萃取法提取长柱金丝桃中的总黄酮，在超生功率700W，乙醇浓度60%，料液比为1:30的条件下，超生30min，离心，取上清液作为供试品溶液；⑵指纹图谱的制作:色谱分离柱填料为5 μ m Kromasil_C18, 250X4.6mm ;流动相为水-乙腈；采用梯度洗脱的方式:0min — 5min, 5min — IOmin, IOmin — 15min,15min — 30min，30min — 60min，60min — 90min,乙腈 5% — 10%, 10% — 15%, 15% — 17%,17%— 17%, 17% —25%，25% —45% ;流速0.8 1.0ml/min ;检测波长 275nm ;柱温 25 35°C，在此条件下分析供试品溶液，得到长柱金丝桃药材的指纹图谱；⑶标准指纹图谱的确定:按照本专利技术提供的方法，对扩13批长柱金丝桃药材建立了 HPLC指纹图谱，通过分析比较，确定了 26个共有特征峰，其保留时间分别为:3.734min,10.577min,13.21Omiη，15.43Omiη，17.263min,18.197min,19.457min,20.81Omin，21.69Omin，22.378min，26.799min，27.84Imin，32.829min，38.435min，46.334min，48.764min,51.484min,52.485min，56.275min，59.479min，61.069min，64.092min，66.858min，67.513min，76.489min，78.637min，这些共有特征峰构成了长柱金丝桃药材的指纹特征，可作为长柱金丝桃药材的标准指纹图谱。如上所述的建立方法在长柱金丝桃药材的真伪的鉴别和质量控制中的应用。如上所述的建立方法所得到的柱金丝桃药材HPLC标准指纹图谱在长柱金丝桃药材的真伪的鉴别和质量控制中的应用。本专利技术的优点和有益效果为:1、本专利技术长柱金丝桃药材标准指纹图谱将长柱金丝桃药材作为一个整体对待，通过比较其共有特征峰可以找出不同药材之间的细微差异，因此适于对长柱金丝桃药材的真伪的鉴别和质量控制，保证了长柱金丝桃药材质量的稳定、均一和可控。2、本专利技术制备方法所采用的供试品制备简单，高效液相色谱条件易于实现，因此方法简单、易于操作；而且，该方法的精密度、稳定性和重现性良好、特征峰多、准确可靠，所建立的指纹图谱能够有效的表征长柱金丝桃药材的质量。附图说明图1为本专利技术的长柱金丝桃药材的HPLC标准指纹图谱，其中，从左到右分别为其26个共有的特征峰。图2为本专利技术的10批长柱金丝桃药材的HPLC指纹图谱。具体实施例方式下面通过具体实施例对本专利技术作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本专利技术的保护范围。如无特殊说明，本专利技术中所使用的试剂为常规试剂；如无特殊说明，所使用的方法为常规方法。长柱金丝桃药材HPLC指纹图谱的建立方法，步骤如下:1、供试品溶液的制备:取长柱金丝桃药材阴干，全草粉碎成粗粉，过60目分析筛，采用超声萃取法提取长柱金丝桃药材中的总黄酮，在超生功率700W，乙醇浓度60%，料液比(g: ml)为1:30的条件下,超生30min, 5000rpm离心IOmin,取上清液作为供试品溶液；2、高效液相色谱分析:色谱分离柱填料为5 μ m Kromasil-C18, 250X4.6mm ;流动相为水-乙腈；采用梯度洗脱的方式:Omin — 5min, 5min — IOmin, IOmin — 15min,15min — 30min，30min — 60min，60min — 90min,乙腈 5% — 10%, 10% — 15%, 15% — 17%,17%— 17%, 17% — 25%，25% — 45% ;流速 0.8 1.0ml/min ;检测波长 275nm ;柱温 25 35°C。在此条件下分析供试品溶液，得到长柱金丝桃药材的指纹图谱。3、按照本专利技术提供的方法，对10批长柱金丝桃药材(10批长柱金丝桃采样地点为内蒙古海拉尔，采样时间为2008年7月，8月；2009年7月，8月；2010年7月，8月；2011年7月，8月；2012年7月，8月)建立了 HPLC指纹图谱，该10批长柱金丝桃药材的10项指纹图谱见附图2，通过分析比较，确定了 26个共有特征峰，其保留时间分别为:3.734min,10.577min,13.21Omin，15.43Omin，17.263min，18.197min，19.457min,20.81Omin，21.69Omin，22.378min，26.799本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种长柱金丝桃药材HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：步骤如下：⑴供试品溶液的制备：取长柱金丝桃阴干全草粉碎成粗粉，采用超声萃取法提取长柱金丝桃中的总黄酮，在超生功率700W，乙醇浓度60%，料液比为1：30的条件下，超生30min，离心，取上清液作为供试品溶液；⑵指纹图谱的制作：色谱分离柱填料为5μm?Kromasil?C18，250×4.6mm；流动相为水?乙腈；采用梯度洗脱的方式：0min→5min，5min→10min，10min→15min，15min→30min，30min→60min，60min→90min，乙腈5%→10%，10%→15%，15%→17%，17%→17%，17%→25%，25%→45%；流速0.8～1.0ml/min；检测波长275nm；柱温25～35℃，在此条件下分析供试品溶液，得到长柱金丝桃药材的指纹图谱；⑶标准指纹图谱的确定：按照本专利技术提供的方法，对9~13批长柱金丝桃药材建立了HPLC指纹图谱，通过分析比较，确定了26个共有特征峰，其保留时间分别为：3.734min，10.577min，13.210min，15.430min，17.263min，18.197min，19.457min，20.810min，21.690min，22.378min，26.799min，27.841min，32.829min，38.435min，46.334min，48.764min，51.484min，52.485min，56.275min，59.479min，61.069min，64.092min，66.858min，67.513min，76.489min，78.637min，这些共有特征峰构成了长柱金丝桃药材的指纹特征，可作为长柱金丝桃药材的标准指纹图谱。...
【技术特征摘要】
1.一种长柱金丝桃药材HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于:步骤如下: ⑴供试品溶液的制备:取长柱金丝桃阴干全草粉碎成粗粉，采用超声萃取法提取长柱金丝桃中的总黄酮，在超生功率700W，乙醇浓度60%，料液比为1:30的条件下，超生30min，离心，取上清液作为供试品溶液； ⑵指纹图谱的制作:色谱分离柱填料为5 μ m Kromasil-C18, 250 X 4.6mm；流动相为水-乙腈；采用梯度洗脱的方式:0min — 5min, 5min — IOmin, IOmin — 15min,15min — 30min，30min — 60min，60min — 90min,乙腈 5% — 10%, 10% — 15%, 15% — 17%,17%— 17%, 17%—25%，25% —45% ;流速0.8 1.0ml/min ;检测波长 275nm ;柱温25 35°C，在此条件下分析供试品溶液，得到长柱金丝桃药材的指纹图谱； ⑶标准指纹图谱的确定:按照本发明提供的方法，对扩...
【专利技术属性】
技术研发人员：张同存，李秀梅，罗学刚，王楠，周采菊，马宁，李琨，廖兴华，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。