一种橙皮甙含量的测定方法技术

一种橙皮甙含量的测定方法，包括以下步骤：（1）稀释溶液的制备；（2）萃取溶液的制备；（3）对照品溶液的制备；（4）供试品溶液的制备；（5）确定色谱条件；（6）检测程序。本发明专利技术操作简便快捷、专属性好、重复性好、回收率高、能够准确测定橙皮甙的含量，便于柑橘生物类黄酮和维生素C复合制剂质量控制。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物测试领域，尤其涉及维生素C和柑橘生物类黄酮复合制剂中橙皮甙含量的測定方法。
技术介绍
柑橘生物类黄酮是从柑橘果实中提取出来的一系列具有显著生物活性的黄酮类化合物，柑橘类黄酮具有独特的芳香性、良好的水溶性和显著的药理作用。柑橘类黄酮功能有:1、调节血脂，降低血液粘稠度，改善血清脂质，延长红血球寿命并增强造血功能，预防心脑血管疾病。2、抑制HL-60白血病细胞生长和溶解癌细胞的作用。3、能够有效清除体内的自由基及毒素，预防、減少疾病的发生。4、消炎、抗过敏、广谱抗菌、抗病毒作用。维生素C具有抗氧化性，能保护人体免受自由基的伤害，有助巩固细胞组织，強健骨骼和牙齿，增强免疫力，预防感冒等疾病及促进钙、铁的吸收，帮助胶原蛋白合成。在氧化还原代谢反应中起调节作用，缺乏它可引起坏血病。柑橘生物类黄酮可以防止维生素C被氧化破坏，而维生素C能促进柑橘生物类黄酮的生物活性，以适当的配比将两者组成复合制剂，能产生协调作用，更好地发挥柑橘生物类黄酮和维生素C的保健作用。 柑橘生物类黄酮和维生素C复合制剂尚未有正式的国家标准，在主要活性成分橙皮甙定量检测方面没有系统、完善的检测方法。《中国药典》2010版中陈皮的橙皮甙测定方法为:色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:醋酸:水(35:4:61)为流动相，供试品提取:在索氏提取器中，加石油醚(60 90°C )80ml，加热回流2 3小时，弃去石油醚，药渣挥干，加甲醇80ml，再加热回流至提取液无色，放冷，滤过，滤液置IOOml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。该方案如用于柑橘生物类黄酮混合物中橙皮甙的測定，一是供试品溶液杂质太多，等度洗脱不能将杂质完全清除，ニ是索氏提取样品前处理复杂，前处理时间过长，三是没有考虑到维生素C对于橙皮甙提取的干扰，该方法并不完全适用于柑橘生物类黄酮和维生素C复合制剂中橙皮甙的測定。因此，有必要针对该产品的特点制定橙皮甙的检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供ー种橙皮甙含量的測定方法，它操作简便快捷、专属性好和重复性好、回收率高、能够准确测定橙皮甙的含量，便于柑橘生物类黄酮和维生素C复合制剂质量控制。本专利技术是这样实现的:ー种橙皮甙含量的測定方法，其特征在于包括以下步骤:(I)稀释溶液的制备:取20mmol/l的氢氧化钠溶液和50%甲醇溶液按0.5 1.5:1.5 0.5比例混合均匀；(2)萃取溶液的制备:取75mmol/l的氢氧化钠溶液和50%甲醇溶液按0.9 1.1:1.1 0.9比例混合均匀；(3)对照品溶液的制备:精密称取橙皮甙和柚皮甙对照品适量，加稀释溶液制成橙皮甙和柚皮甙浓度均为0.05mg/ml的对照品溶液；(4)供试品溶液的制备:精密称取550-650mg样品于IOOml容量瓶中，加入80ml萃取溶液，60 70°C超声提取10 20min，取出，冷却至室温后，用萃取溶液定容至刻度，取部分溶液用微孔滤膜过滤后备用； (5)确定色谱条件:色谱柱:C18色谱柱,4.6mmX 250mm, 5 u m ;流动相A:0.1%三氟こ酸水溶液；流动相B:0.1%三氟こ酸的甲醇-こ腈1:1溶液；柱温:35°C;流速:lml/min ;进样量:20 ii 1 ；检测波长:292nm ;按流动相A:流动相B=90% 10% 90%:10% 90% 10%进行梯度洗脱，梯度洗脱时间见图1 ;保留时间:柚皮甙约17.6min 橙皮甙约18.0min ；(6)检测程序:分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 u 1，注入液相色谱仪，測定，在规定条件下，每针运行时间应三倍于橙皮甙的保留时间；系统适应性条件:完全分离两种系统适应性物质，柱效应达到:理论塔板数大于2000，橙皮甙和柚皮甙的分离度大于1.5 ；通过测得数据计算橙·皮甙含量橙皮甙mg/g=A# XC对X IOOA5itXWt^式中:C对:橙皮甙标准工作溶液浓度mg/ml ；A#:样品峰面积:橙皮甙标准工作溶液峰面积平均值:样品的质量mg。本专利技术操作简便快捷、专属性和重复性好、回收率高、能够准确測定橙皮甙的含量，便于柑橘生物类黄酮和维生素C复合制剂质量控制。附图说明图1是本专利技术的梯度洗脱时间。具体实施例方式—种橙皮甙含量的測定方法，其特征在于包括以下步骤:(1)稀释溶液的制备:取20mmol/l的氢氧化钠溶液和50%甲醇溶液按0.5 1.5:1.5 0.5比例混合均匀；(2)萃取溶液的制备:取75mmol/l的氢氧化钠溶液和50%甲醇溶液按0.9 1.1:1.1 0.9比例混合均匀；(3)对照品溶液的制备:精密称取橙皮甙和柚皮甙对照品适量，加稀释溶液制成橙皮甙和柚皮甙浓度均为0.05mg/ml的对照品溶液；(4)供试品溶液的制备:精密称取550-650mg样品于IOOml容量瓶中，加入80ml萃取溶液，60 70°C超声提取10 20min，取出，冷却至室温后，用萃取溶液定容至刻度，取部分溶液用微孔滤膜过滤后备用；(5)确定色谱条件:色谱柱:C18色谱柱，4.6mmX250mm，5iim ;流动相A:0.1%三氟こ酸水溶液；流动相B:0.1%三氟こ酸的甲醇-こ腈1:1溶液；柱温:35°C ;流速:lml/min ;进样量:20iil；检测波长:292nm ;按流动相A:流动相B=90% 10% 90%: 10% 90% 10%进行梯度洗脱，梯度洗脱时间见图1 ;保留时间:柚皮甙约17.6min橙皮甙约18.0min ; (6)检测程序:分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 yl，注入液相色谱仪，測定，在规定条件下，每针运行时间应三倍于橙皮甙的保留时间；系统适应性条件:完全分离两种系统适应性物质，柱效应达到:理论塔板数大于2000，橙皮甙和柚皮甙的分离度大于1.5 ;通过测得数据计算橙皮甙含量橙皮甙11^/^=八#\(:对\100/^对\胃# 式中:( :橙皮甙标准工作溶液浓度mg/ml ；A#:样品峰面积:橙皮甙标准工作溶液峰面积平均值;W#:样品的质量mg。具体实施吋，(1)根据橙皮甙易溶于稀碱液以及样品中含有大量的呈酸性的维生素C的特点，以20mmol/L的氢氧化钠溶液和50%甲醇溶液混合溶液作为对照品的稀释溶剤，以75mmol/L的氢氧化钠溶液和50%甲醇溶液混合溶液作为样品的萃取溶剤。使得对照品、供试品溶液保持在PH值8 9，兼顾了橙皮甙的提取和样品峰的柱效。(2)碱溶液有效地提高了橙皮甙的提取效率，50%甲醇溶液改善橙皮甙峰形的対称性。(3) 50 90°C超声提取5 20分钟，较传统的索氏提取法脱脂回流几个小时，效率极大提高。(4)流动相加入0.1%三氟こ酸既调节了流动相PH值，三氟こ酸本身也是离子对试剂。(5 )梯度洗脱通过改善流动相比例，最短时间内完成了所有成分的洗脱。(6)橙皮甙和柚皮甙的分离度、柱效测试，有效地监测了色谱条件。本专利技术专属性好、重复性好、回收率高，对柑橘生物类黄酮橙皮甙的检测更为有效。下面用实验例进ー步说明本专利技术: 实施例1.维生素C和柑橘生物类黄酮复合制剂 (1)稀释溶液的配制:20mmol/l的氢氧化钠溶液和50%甲醇溶液按1:1比例混合均匀； (2)萃取溶液的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种橙皮甙含量的测定方法，其特征在于包括以下步骤：（1）稀释溶液的制备：取20mmol/l的氢氧化钠溶液和50%甲醇溶液按0.5～1.5：1.5～0.5比例混合均匀；（2）萃取溶液的制备：取75mmol/l的氢氧化钠溶液和50%甲醇溶液按0.9～1.1：1.1～0.9比例混合均匀；（3）对照品溶液的制备：精密称取橙皮甙和柚皮甙对照品适量，加稀释溶液制成橙皮甙和柚皮甙浓度均为0.05mg/ml的对照品溶液；（4）供试品溶液的制备：精密称取550?650mg样品于100ml容量瓶中，加入80ml萃取溶液，60～70℃超声提取10～20min，取出，冷却至室温后，用萃取溶液定容至刻度，取部分溶液用微孔滤膜过滤后备用；（5）确定色谱条件：?色谱柱：C18色谱柱，4.6mm×250mm，5μm；流动相A：0.1%三氟乙酸水溶液；流动相B：0.1%三氟乙酸的甲醇?乙腈1：1溶液；柱温：35℃；流速：1ml/min；进样量：20μl?；?检测波长：292nm；按流动相A：流动相B=90%～10%～90%：10%～90%～10%进行梯度洗脱，梯度洗脱时间见图1；保留时间：柚皮甙约?17.6min??橙皮甙约?18.0min；（6）检测程序：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，在规定条件下，每针运行时间应三倍于橙皮甙的保留时间；系统适应性条件：完全分离两种系统适应性物质，柱效应达到：理论塔板数大于2000，橙皮甙和柚皮甙的分离度大于1.5；通过测得数据计算橙皮甙含量??橙皮甙mg/g=A样×C对×100/A对×W样???式中：C对：橙皮甙标准工作溶液浓度mg/ml；A样：样品峰面积；A对：橙皮甙标准工作溶液峰面积平均值；W样：样品的质量mg。...

【技术特征摘要】
1.一种橙皮甙含量的測定方法，其特征在于包括以下步骤: (1)稀释溶液的制备:取20mmol/l的氢氧化钠溶液和50%甲醇溶液按0.5 1.5:.1.5 0.5比例混合均匀； (2)萃取溶液的制备:取75mmol/l的氢氧化钠溶液和50%甲醇溶液按0.9 1.1:.1.1 0.9比例混合均匀； (3)对照品溶液的制备:精密称取橙皮甙和柚皮甙对照品适量，加稀释溶液制成橙皮甙和柚皮甙浓度均为0.05mg/ml的对照品溶液； (4)供试品溶液的制备:精密称取550-650mg样品于IOOml容量瓶中，加入80ml萃取溶液，60 70°C超声提取10 20min，取出，冷却至室温后，用萃取溶液定容至刻度，取部分溶液用微孔滤膜过滤后备用； (5)确定色谱条件: 色谱柱:C18色谱柱,4.6mmX 250mm, 5 u m ;流动相A:0.1%三氟こ酸水溶液；流动相...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱伟，薛红芬，
申请(专利权)人：江苏艾兰得营养品有限公司，
类型：发明
国别省市：