KDR肽和包括该肽的疫苗制造技术

本申请涉及KDR肽和包括该肽的疫苗。具体地，提供选自包括如SEQ?ID?NOS:29、33、34或40所示氨基酸序列肽的九肽；提供选自包括如SEQ?ID?NOS:29、33、34或40所示氨基酸序列的九肽或十肽；具有通过取代或添加一个至几个氨基酸而来源于上述任何氨基酸序列并且能够诱导细胞毒性T细胞的肽；以及包含这种肽而用于治疗或预防肿瘤的药物。这些肽可用作疫苗。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于治疗和预防肿瘤、作为癌症疫苗极为有用的新的肽以及包括这些肽的药物。
技术介绍
肿瘤-排斥抗原基因主要是针对恶性黑色素瘤被鉴定出来的，因此，开发利用这些基因的癌症免疫治疗。具体地说,认识到在抗-肿瘤免疫应答中⑶8-阳性T细胞的重要性，已经注意到体内诱导肿瘤-特异的CD8-阳性T细胞的癌症疫苗治疗，并将其用于多种临床应用。此外，也阐明了组成大约10个氨基酸残基的肽通过I类途径，经多种共刺激分子的帮助而活化T细胞以诱导肿瘤-特异的细胞毒性T细胞(CTLs)的机制。另外，积极地鉴定了限于个别HLA分子的肽。然而，目前完全控制肿瘤是不可能的。这可能是由于肿瘤细胞的异质性、肿瘤细胞中MHC-1类表达的减少或消失、以及肿瘤细胞中靶分子的缺乏。此外，目前鉴定出来的肿瘤抗原肽只存在于一些肿瘤类型中，但不存在于所有的肿瘤类型中。因此为了解决这些问题，本专利技术不使用肿瘤细胞作为靶细胞，而是关注于肿瘤血管的内皮细胞。更具体地说，内皮细胞几乎没有涉及MHC-1类表达的减少或消失或异质性的任何问题。因此，如果可诱导靶向肿瘤血管的CTLs，就可以克服传统癌症疫苗治疗中的问题，`例如I类的消失和靶分子的缺乏，而不必考虑肿瘤的类型，并且可以预见优良的治疗效果。对肿瘤血管生成的研究起始于70年代由Folkman等人提出的先驱性的假说，并且已经从多个角度进行了研究。已经在血管内皮生长因子(VEGF)-血管内皮生长因子(VEGF)受体(VEGFRs)上进行了许多研究来评估它们在肿瘤血管生成中的有效性。已经积极地开发了血管生成的抑制剂作为靶定向的药物，特别是在癌症治疗中，并且正在进行临床测试。然而，还未使用基于这个理念用于癌症疫苗治疗的疗法。一个原因可能是对在正常细胞中表达的VEGFR的免疫耐受性。然而，在90年代，Plate, Millauer,和Risau等人证实在肿瘤组织的内皮细胞中强烈表达VEGFRs。此外，对也在正常细胞中表达的自发抗原，例如CEA和HER/neu的免疫应答却不一定会有免疫耐受性。因此，本专利技术人推论VEGFRs可用作癌症疫苗治疗的靶。近来，有报道说针对VEGFRs的活化免疫能够抑制肿瘤中的血管生成和转移(TheJournal of Experimental Medicine, 2002，195:12，1575-1584)。然而这篇文献只使用溶解的VEGFR蛋白质，并且对于有效肽的氨基酸序列没有进行研究。
技术实现思路
本专利技术人关注于靶向VEGFR2(KDR/flk_l;以下称为KDR)的可能的癌症疫苗治疗，其中VEGFR2在肿瘤组织的内皮细胞中强烈表达，并且认为其涉及对VEGF信号的内皮细胞增殖。此外，本专利技术人筛选了能够有效用作疫苗的肽，检验了它们的特异性，并且完成了本专利技术。更具体地说，本专利技术提供了下列[I]至[22]。[I]选自包括SEQ ID NO: 2、3、5、8、11或12的氨基酸序列的肽之九肽。[2]具有细胞毒性T细胞可诱导性的肽，其中对SEQ ID NO: 2、3、5、8、11或12的氨基酸序列进行一个、两个、或多个氨基酸的取代或添加。[3] [2]的肽，其中N末端的第二个氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸。[4] [2]或[3]的肽，其中C-末端的氨基酸是苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸。[5]选自包括SEQ ID N0:29、30、33、34、40或46的肽之九肽或十肽。[6]具有细胞毒性T细胞可诱导性的肽，其中对SEQ ID NO: 29、30、33、34、40或46的氨基酸序列进行一个、两个、或多个氨基酸的取代或添加。[7] [6]的肽，其中N末端的第二个氨基酸是亮氨酸或甲硫氨酸。[8] [6]或[7]的肽，其中C-末端的氨基酸是缬氨酸或亮氨酸。[9]用于治疗和/或预防肿瘤的药物，其中该药物包括[I]至[8]中任何一项的一个或多个肽。[10]用于治疗糖尿病性视网膜病、慢性类风湿性关节炎、牛皮癣和动脉粥样硬化的药物，其中该药物包括权利要求[I]至[8]中任何一项的一个或多个肽。[11]在其表面呈递包括[I]至[8]中任何一项的肽和HLA抗原复合物的外来体。[12] [11]的外来体，其中 HLA 抗原是 HLA-A24 或 HLA-A02。[13] [12]的外来体，其中 HLA 抗原是 HLA-A2402 或 HLA-A0201。[14] 一种利用权利要求[I]至[8]中任何一项的肽诱导具有高细胞毒性T细胞可诱导性的抗原-呈递细胞的方法。[15] 一种利用权利要求[I]至[8]中任何一项的肽诱导细胞毒性T细胞的方法。[16] 一种诱导具有高细胞毒性T细胞可诱导性的抗原-呈递细胞的方法，其中所述的方法包括将包括编码[I]至[8]中任何一项的肽的多核苷酸的基因导入抗原-呈递细胞的步骤。[17]利用[I]至[8]中任何一项的肽诱导的分离的细胞毒性T细胞。[18]呈递HLA抗原和[I]至[8]中任何一项的肽的复合物的抗原_呈递细胞。[19] [18]的抗原-呈递细胞，其是通过[14]或[15]的方法诱导的。[20]用于在疾病部位抑制血管生成的疫苗，其中该疫苗包括权利要求[I]至[8]中任何一项的肽作为活性成分。[21] [20]的疫苗，将其施用于HLA抗原为HLA-A24或HLA-A02的受试体。[22] [20]或[21]的疫苗，将其用于抑制恶性肿瘤的生长和/或转移。本说明书包括在日本专利申请Nos.2002-267285、2003-062003、和 2003-167042的说明书和附图中所描述的内容，本专利技术以其为优先权的基础。 附图说明图1显示针对靶细胞的CTLs克隆的细胞毒性。图2显示已建立的CTL克隆的HLA-四聚体分析的结果:(a)由本专利技术的肽诱导的CTL克隆，和培养细胞；以及(b)饲养细胞(对照)。图3显示利用本专利技术的肽进行疫苗接种对接种Colon26的BALB/c小鼠存活率的影响。图4显示利用本专利技术的肽进行疫苗接种对Colon26来源的肿瘤生长的影响。图5显示利用本专利技术的肽进行疫苗接种对接种B16的小鼠存活率的影响。图6显示利用本专利技术的肽 进行疫苗接种对B16黑色素瘤来源的肿瘤生长的影响。在皮下注射B16肿瘤细胞前，用A2/Kb TGM疫苗接种两次，间隔时间为I周，用KDR773脉冲的Dc (黑圆)、单独的DC (白三角)、或HBSS (白方块)。该图显示平均的肿瘤生长(P〈0.01)。图7显示CTL克隆C29-169对呈递本专利技术肽的HLA-A24-阳性细胞的细胞毒性作用。图8显示CTL克隆C29-169对呈递本专利技术肽的HLA-A24-阳性细胞的细胞毒性作用。图9显示CTL克隆KDR C85-775 (KWC85-775)对呈递本专利技术肽的HLA-A0201-阳性细胞的细胞毒性作用。图10 显示 CTL 克隆 KDR C85-775 (KWC85-775)对呈递 KDR 肽的 HLA-A0201-阳性细胞的细胞毒性作用。图11显示CTL克隆KDR C51-1328 (KWC51)对呈递本专利技术肽的HLA-A0201-阳性细胞的细胞毒性作用。图12 显示 CTL 克隆 KDR C51-1328 (KWC51)对呈递 KDR 肽的 HLA-A0201-阳性本文档来自技高网...

【技术保护点】
九肽或者十肽，其选自包含SEQ?ID?NO:29、33、34或40的氨基酸序列的肽。

【技术特征摘要】
2002.09.12 JP 267285/02;2003.03.07 JP 62003/03;201.九肽或者十肽，其选自包含SEQID N0:29、33、34或40的氨基酸序列的肽。2.具有细胞毒性T细胞可诱导性的肽，其中对SEQID NO:29、33、34或40的氨基酸序列进行一个、两个、或多个氨基酸的取代或添加。3.权利要求2的肽，其中N末端的第二个氨基酸是亮氨酸或甲硫氨酸。4.权利要求2或3的肽，其中C-末端的氨基酸是缬氨酸或亮氨酸。5.九肽，其选自包含SEQID NO: 2、3、5、11或12的氨基酸序列的肽。6.具有细胞毒性T细胞可诱导性的肽，其中对SEQID NO:2、3、5、ll或12的氨基酸序列进行一个、两个、或多个氨基酸的取代或添加。7.权利要求6的肽，其中N末端的第二个氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸。8.权利要求6或7的肽，其中C-末端的氨基酸是苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸。9.用于治疗和/或预防肿瘤的药物，其中该药物包括权利要求1至8中任何一项的一个或多个肽。10.用于治疗糖尿病性视网膜病、慢性类风湿性关节炎、牛皮癣和动脉粥样硬化的药物，其中该...

【专利技术属性】
技术研发人员：和田聪，角田卓也，田原秀晃，
申请(专利权)人：肿瘤疗法科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：