鬼针草离体再生体系建立的方法，由五个阶段构成：培养无菌苗；诱导培养生成不定芽；继代增殖培养分化得到丛生芽；丛生芽经生根培养获得生根苗；练苗移栽形成再生植株。整个周期在可控的条件下进行，不受气候条件和鬼针草自然生长周期的限制，子叶诱导率90%～95%，下胚轴诱导率达100%，大大缩短了繁殖周期，不仅可以快速大量繁殖种苗，还能除去病毒、真菌和细菌等危害，保证种苗健壮，获得大量形状一致，遗传稳定性高的鬼针草全草。?
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物组织培养
，特别涉及。
技术介绍
鬼针草bipinnata L.)为菊科鬼针草属一年生草本植物,全国大部分地区均有分布。茎略呈方形或圆柱形，幼茎有稀疏短柔毛，尤以节处为多。叶纸质，黄绿色，易碎，多皱缩或破碎，常脱落，展平后，完整叶2回羽状深裂，裂片披针形，上面无毛，下面主脉有稀疏毛。茎顶常有扁平盘状花托，着生10余枚针束状、有四棱的果实，偶见黄色的头状花序。鬼针草全草入药，有清热解毒、散瘀活血的功效，主治上呼吸道感染、咽喉肿痛、急性阑尾炎、急性黄疸型肝炎、胃肠炎、急性肾炎、风湿关节疼痛、疟疾等疾，外用治疮疖、毒蛇咬伤及跌打肿痛等症，民间亦应用鬼针草治疗高血压、糖尿病等病症，效果不错。鬼针草是一种很好的、传统的常用中药材，但是，由于鬼针草通常以种子繁殖，存在着繁殖率低、品质易退化、药用成分含量低且不稳定等问题，影响了其工业化、标准化的加工利用，建立一种快速、高效的鬼针草离体再生方法，可获得性状一致的全草，解决上述问题，保证鬼针草的品性统一和有效地应用，同时还可为进一步改良其性状而进行的遗传转化研究奠定基础，但迄今为止，还未见有关于鬼针草组织培养和离体再生体系建立技术的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于专利技术一种。本专利技术的由无菌材料培养体系、不定芽诱导培养、继代增殖培养、生根苗培养和练苗移栽构成，技术分五个阶段1、无菌材料的获得取鬼针草种子经MS培养基培养得到无菌苗；2、不定芽培养由无菌苗外植体一下胚轴和子叶经诱导培养生成不定芽，诱导培养基为MS基本培养基+6-BA0.1 3. Omg/1+KTO.1 3.0mg/l+NAA0.1mg/1+3%蔗糖+0. 9%琼脂；3、继代增殖培养将不定芽切分进行继代增殖培养分化得到丛生芽，增殖培养基为MS基本培养基+6-BA0.1 3. Omg/1+KTO.1 3. Omg/1+NAA0.1mg/1+3%蔗糖+琼脂0. 9% ;4、生根苗培养将丛生芽分株经生根培养基培养获得生根苗，形成完整植株，生根培养基为1/2MS+IBA 0.1 0. 5mg/l+3%蔗糖+0. 9%琼脂；5、练苗移栽将生根苗经炼苗后由培养基移栽到土壤中。本专利技术由以下步骤实现1.无菌材料的获得将鬼针草的果实置于75%乙醇中浸泡15s灭菌，取出，用无菌水冲洗3-5次,加入0.1 %氯化高萊灭菌,时间控制为8min,再用无菌水冲洗4_5次,用无菌滤纸吸干水分，刨开果实取出种子接种于MS固体培养基上，接种后放入光照培养箱，整个操作在超净工作台进行，培养条件为温度23±2°C，光照时间12h/d，光照强度2000 3000Lux，夜间保持黑暗，13 15d获得具真叶的无菌材料一无菌苗。2.不定芽诱导培养取无菌苗的外植体一子叶和下胚轴，子叶切成0. 5cm2大小，叶背向下置于诱导培养基，下胚轴切成0. 3 0. 5cm长短，平放于诱导培养基，诱导培养基为 MS 基本培养基 +6-BA0.1 3. O mg/1 + KTO.1 3. 0mg/l+NAA0. lmg/1+3% 蔗糖 +0. 9% 琼月旨，pH5. 8 6. 0，培养条件为温度23±2°C，光照时间12h/d，光照强度2000 3000Lux，夜间保持黑暗，5d形成淡黄绿色愈伤，继续培养13 18d，分化出不定芽，子叶诱导率90% 95%，下胚轴诱导率达100%。3.继代增殖培养将不定芽切分，接种至增殖培养基上进行增殖培养，增殖培养基为 MS 基本培养基 +6-BA 0.1 3. Omg/1 + KT 0.1 3. Omg/1 + NAA 0. lmg/1+ 3% 蔗糖+琼脂0. 9%，pH5. 8 6. 0，培养条件为温度23±2°C，光照时间12h/d，光照强度2000 3000Lux,夜间保持黑暗，10 18d分化出丛生芽，芽增殖倍数为3 6倍。4.生根苗培养形成的丛生芽长至约2 3cm时，将其分成单株置于培养瓶内进行生根培养，所用生根培养基为1/2MS +IBA 0.1 0. 5mg/l+3%蔗糖+ 0. 9%琼脂，pH5. 8 6.0，培养条件为温度23±2°C，光照时间12h/d，光照强度2000 3000Lux，夜间保持黑暗，7 1Od分化出5 8条不定根，得到生根苗，形成完整植株，生根率100%。5.练苗移栽将培养瓶置于智能温室，温度保持在25°C左右，打开瓶口让瓶内试管苗与空气接触5 7d,然后用流水洗去生根苗根部的培养基，用0. 1%的高锰酸钾溶液对根部灭菌消毒lmin，将其移栽到消毒的栽培基质中培养得到再生植株，栽培基质的配比为泥炭土 蛭石=2:1，再生植株成活率达95%以上。本专利技术采用鬼针草子叶和下胚轴为外植体诱导产生不定芽，通过增殖培养和生根培养获得再生植株，整个周期在可控的条件下进行，不受气候条件和鬼针草自然生长周期的限制，子叶诱导率90% 95%，下胚轴诱导率达100%，大大缩短了繁殖周期，不仅可以快速大量繁殖种苗，还能除去病毒、真菌和细菌等危害，保证种苗健壮，提高抗逆能力，有效地克服其质量差异大、种子保存期短、发芽率低、发芽时间有差异、幼苗生长缓慢等缺点，获得大量形状一致，遗传稳定性高的鬼针草全草，满足需求。另外，在植物的遗传转化方法中，除花粉管通道法外，其它转化方法都是建立在细胞和组织能够再生完整植株的基础之上，本方法以鬼针草的下胚轴和子叶作为外植体，进行愈伤组织诱导与分化获得再生植株，由此可筛选出高产、优质、抗病、抗逆性强的优良植株，成为快速获得大量形状一致，遗传稳定性高的鬼针草植株的一种高效可行的手段。附图说明图1左为诱导产生的下胚轴，右为诱导产生的子叶； 图2为增殖培养； 图3为生根苗。具体实施例方式以下实施例对本专利技术作进一步阐述。实施例11.无菌材料的获得将鬼针草的果实置于75%乙醇中浸泡15s灭菌，取出，用无菌水冲洗3次，加入0.1 %氯化高汞灭菌，时间控制为8min，再用无菌水冲洗4次，用无菌滤纸吸干水分，刨开果实取出种子接种于MS固体培养基上，接种后放入光照培养箱，整个操作在超净工作台进行，培养条件为温度23±2° C，光照时间12h/d，光照强度2000LUX，夜间保持黑暗，15d获得具真叶的无菌材料一无菌苗。2.不定芽诱导培养取无菌苗的外植体一子叶和下胚轴，见图1，子叶切成0. 5cm2大小，叶背向下置于诱导培养基，下胚轴切成0. 3 0. 5cm长短平放于诱导培养基，诱导培养基为 MS 基本培养基 +6-BA0.1 mg/l+KTO. lmg/l+NAAO. lmg/1+3% 蔗糖 +0. 9% 琼脂，pH5. 8 6. 0，培养条件为温度23±2°C，光照时间12h/d，光照强度2000Lux，夜间保持黑暗，5d形成淡黄绿色愈伤，继续培养18d，分化出不定芽，子叶诱导率90%，下胚轴诱导率100%。3.继代增殖培养将不定芽切分，接种至增殖培养基上进行增殖培养，见图2，增殖培养基为 MS 基本培养基 +6-BA 0. lmg/l+KTO. lmg/1+NAA 0. lmg/1+3% 蔗糖 + 琼脂 0. 9%，pH5. 8 6. 0，培养条件为温度23±2°C，光照时间12h/d，光照强度2000Lux，夜间保持黑暗，18d分化出丛生芽，芽增殖倍数本文档来自技高网...
【技术保护点】
鬼针草离体再生体系建立的方法，其特征在于本方法分五个阶段：无菌材料的获得：取鬼针草种子经MS培养基培养得到无菌苗；不定芽培养：由无菌苗外植体—下胚轴和子叶经诱导培养生成不定芽，诱导培养基为MS基本培养基+6?BA?0.1～3.0?mg/L+KT?0.1～3.0mg/L+NAA0.1mg/L+3%蔗糖+0.9%琼脂；继代增殖培养：将不定芽切分进行继代增殖培养分化得到丛生芽，增殖培养基为MS基本培养基+6?BA0.1～3.0mg/L+KT0.1～3.0mg/L+NAA0.1mg/L+3%蔗糖+琼脂0.9%；生根苗培养：将丛生芽分株经生根培养基培养获得生根苗,形成完整植株，生根培养基为1/2MS+IBA?0.1～0.5mg/L+3%蔗糖+0.9%琼脂；练苗移栽：将生根苗经炼苗后由培养基移栽到土壤中。
【技术特征摘要】
1.鬼针草离体再生体系建立的方法，其特征在于本方法分五个阶段无菌材料的获得取鬼针草种子经MS培养基培养得到无菌苗；不定芽培养由无菌苗外植体一下胚轴和子叶经诱导培养生成不定芽，诱导培养基为MS基本培养基+6-BA 0.1 3. O mg/L+KT0.1 3. 0mg/L+NAA0. lmg/L+3%蔗糖+0. 9%琼脂；继代增殖培养将不定芽切分进行继代增殖培养分化得到丛生芽，增殖培养基为MS基本培养基+6-BA0.1 3. 0mg/L+KT0.1 3.0mg/L+NAA0. lmg/L+3%蔗糖+琼脂0. 9% ;生根苗培养将丛生芽分株经生根培养基培养获得生根苗，形成完整植株，生根培养基为1/2MS+IBA 0.1 0. 5mg/L+3%蔗糖+0. 9%琼脂；练苗移栽将生根苗经炼苗后由培养基移栽到土壤中。2.如权利要求1所述的鬼针草离体再生体系建立的方法，其特征在于无菌材料的获得是将鬼针草的果实置于75%乙醇中浸泡15s灭菌，取出后用无菌水冲洗3-5次，加入0.1 %氯化高萊灭菌,时间控制为8min,灭菌的果实用无菌水冲洗4-5次,用无菌滤纸吸干水分，刨开果实取出种子接种于MS固体培养基上，接种后放入光照培养箱，获得无菌苗，整个操作在超净工作台进行。3.如权利要求1所述的鬼针草离体再生体系建立的方法，其特征在于不定芽培养是取用无菌苗的...
【专利技术属性】
技术研发人员：崔波，李长看，蒋素华，田云芳，王默霏，马杰，
申请(专利权)人：郑州师范学院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。