高通量的RSV蛋白含量的定量检测法及其检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种高通量的RSV(呼吸道合胞病毒)蛋白含量的定量检测法及其检测试剂盒，其定量检测法包括步骤：A、对于非临床样品，其检测步骤，包括Hep2细胞的培养阶段、RSV(呼吸道合胞病毒)蛋白含量的ELISA高通量检测阶段步骤；B、对于临床或临床前样品，其检测步骤，包括RSV(呼吸道合胞病毒)蛋白含量的ELISA高通量检测阶段步骤；所述定量检测试剂盒包括：RSV(呼吸道合胞病毒)蛋白含量的ELISA检测试剂。本发明专利技术改变了目前筛选抗病毒药物的方法，提高了筛选通量，缩短了筛选周期，可以节约60％以上的时间。同时也用于大量临床或非临床样品中RSV的高通量定量检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种病毒滴度的定量检测法，特别是涉及一种用于药物筛选及生物样品检验的RSV(Respiratory Syncytial Virus,呼吸道合胞病毒)蛋白含量的定量检测法及其高通量检测试剂盒。
技术介绍
呼吸道合胞病毒(RSV)是在婴儿时期和儿童早期导致支气管炎和肺炎的主要原因。该病毒通常会引起再感染。再感染一般发生在成年人中。在老人和缺乏免疫力的病人当中，可能导致下呼吸道的严重疾病。通常病情会持续两到三周.在婴儿和有高风险病情的儿童中，RSV(呼吸道合胞病毒)感染可能会危及患者的生命。病毒性支气管炎是一个严重的传染病，据估计每年引起100万人死亡，其中大多数病例是由RSV(呼吸道合胞病毒)引起的。出生后第一年，高达70% 80%比例的婴儿将感染RSV (呼吸道合胞病毒)。目前尚无有效的疫苗或小分子药物用来防治RSV(呼吸道合胞病毒)感染。因此，用快速、高效的方法来筛选获得抗RSV(呼吸道合胞病毒)的有效药物是研发新药的有效手段。在抗病毒药物筛选方法中，目前主要使用细胞病变效应(CPE)法。其检测方法有四甲基偶氮唑盐(以下简称MTT)法，或者使用Cell Countin本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于高通量药物筛选及生物样品检验的呼吸道合胞病毒RSV蛋白含量的定量检测法，包括步骤：A、对于非临床样品，其检测步骤，包括Hep2细胞的培养阶段、呼吸道合胞病毒RSV蛋白含量的ELISA高通量检测阶段步骤；B、对于临床或临床前样品，其检测步骤，包括呼吸道合胞病毒RSV蛋白含量的ELISA高通量检测阶段步骤。

【技术特征摘要】
1.一种用于高通量药物筛选及生物样品检验的呼吸道合胞病毒RSV蛋白含量的定量检测法，包括步骤 A、对于非临床样品，其检测步骤，包括Ifep2细胞的培养阶段、呼吸道合胞病毒RSV蛋白含量的ELISA高通量检测阶段步骤； B、对于临床或临床前样品，其检测步骤，包括呼吸道合胞病毒RSV蛋白含量的ELISA高通量检测阶段步骤。2.如权利要求1所述的定量检测法，其特征在于所述非临床样品包括化合物； 临床样品包括患者的鼻咽拭子或鼻咽洗液； 临床前样品包括动物模型组织提取物。3.如权利要求1所述的定量检测法，其特征在于所述A中的H印2细胞的培养阶段，步骤包括 ①将H印2细胞接种至细胞培养板中培养；其中，培养条件为37°C、5%CO2、培养16-24小时； ②将非临床样品加入上述接种有细胞的培养板中； ③加入呼吸道合胞病毒RSV至上述培养板中； ④培养板经培养96-120小时后，取细胞培养上清进行ELISA检测。4.如权利要求3所述的定量检测法，其特征在于所述细胞培养板是384孔培养板，接种的细胞密度控制在每孔1800-3000个细胞，体积为20-50 μ I ； 所述培养阶段③中，加入呼吸道合胞病毒RSV的量为50-150倍TCID5tl病毒稀释液，体积为 10_40 u I ο5.如权利要求1所述的定量检测法，其特征在于所述Α、B中的呼吸道合胞病毒RSV蛋白含量的ELISA检测阶段，步骤包括 ①在384孔酶标板内加入羊抗呼吸道合胞病毒RSV多克隆抗体，经孵育、洗涤后，加入封闭试剂作用，然后洗涤； ②在384孔酶标板内加入待测样品经孵育、洗涤后，加入生物素结合羊抗呼吸道合胞病毒RSV多克隆抗体，经孵育、洗涤； ③在384孔酶标板内加入抗生物素过氧化蛋白酶，经孵育、洗涤后，加入TMB显色液作用后，再加入TMB终止液； ④在450nm波长处测量酶标板的吸光值。6.如权利要求5所述的定量检测法，其特征在于所述ELISA检测阶段中，所涉及的...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭祥翔，李少华，陆恒，
申请(专利权)人：上海药明康德新药开发有限公司，苏州药明康德新药开发有限公司，
类型：发明
国别省市：