【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程领域，特别是一株高效转化甲醇生产单细胞蛋白的毕赤酵母及其应用。
技术介绍
当前，世界各国都十分重视开辟蛋白质资源和研究其应用技术，并已取得了很大进展，其中工业化最快的是单细胞蛋白生产，被认为是解决人类蛋白质资源匮乏最有效途径之一。单细胞蛋白(Single cell protein, SCP)又称微生物蛋白，指的是从纯培养的微生物细胞中提取得到的总蛋白，可作为人及动物蛋白的补充。单细胞蛋白可用制糖、造纸、 淀粉、木材加工等产生的废液来发酵生产，但受原料限制而产量太少。在单细胞蛋白中，能够进行工业化大量生产的是甲醇蛋白，它是以工业甲醇为原料进行微生物发酵而得到的第二代单细胞蛋白。与天然植物蛋白相比，它含有更丰富的氨基酸、矿物质和维生素，可以部分代替鱼粉、大豆、肉类及脱脂奶粉等喂养家禽。从上世纪60年代起，世界就有不少国家开始进行甲醇蛋白的研究与开发生产， 至70年代后期，从事该项研究工作的单位达到近千家。1980年，英国帝国化学公司(1. C.1)建立了年产10万吨甲醇蛋白的生产装置。美国的菲利浦石油公司(Phillips)改进了发酵罐结构，在...
【技术保护点】
一株高效转化甲醇生产单细胞蛋白的毕赤酵母，其特征在于，分类命名为巴斯德毕赤酵母HGD?01，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC?NO:M2012342。
【技术特征摘要】
1.一株高效转化甲醇生产单细胞蛋白的毕赤酵母，其特征在于，分类命名为巴斯德毕赤酵母HGD-01，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC N0:M2012342o2.权利要求1所述的一株高效转化甲醇生产单细胞蛋白的毕赤酵母的应用，其特征在于，具体步骤如下 (1)、利用巴斯德毕赤酵母HGD-Ol菌株生产单细胞蛋白的方法 一级种子的培养将巴斯德毕赤酵母HGD-Ol的菌株用划线法接种至YPD试管斜面培养基上，30°C培养48小时，得斜面种子，取2支培养好的斜面种子，每支用IOmL无菌水将斜面种子全部冲洗下来，分别接种到2个装250mL YPD液体培养基的2L三角瓶中，28_32°C摇床中200-300rpm振荡培养25-35小时，得一级种子；所述的YPD试管斜面培养基是由重量计的1%酵母提取物、2%胰蛋白胨、2%葡萄糖、2%琼脂和余量的水混合在一起组成；所述的YPD液体培养基是由重量计的1%酵母浸膏、2%胰蛋白胨、2%葡萄糖和余量的水混合在一起组成； 二级种子培养在50L发酵罐中加入YPD液体培养基30L和二甲基硅油20mL，通入蒸汽对罐内培养基进行灭菌，灭菌温度为121°C，时间为30min，在对YPD液体培养基灭菌的同时，对空气过滤器和取样品也进行灭菌，灭菌结束后，用冷却水进罐体夹套对培养基进行降温，待温度降至30 35°C后，将培养好的500-600mL —级种子全部接入罐内YPD液体培养基中进行培养，培养条件为培养温度30-32°C，通气量1. 5 2vv/m，转速200_300rpm，培养24 30小时后，菌体OD_值达到40 45，得二级种子； (2)、无机盐培养基的制备 无机盐培养基的配制先在发酵罐中加入Im3水，然后称取以下各物质并依次加入到发酵罐中搅拌溶解质量浓度为85%磷酸25kg/m3，磷酸氢二钾O. 5kg/m3，氯化铵O. 3kg/m3，二水硫酸I丐O. 2kg/m3,氯化钠O. 5kg/m3,硫酸钾3kg/m3,七水硫酸镁2kg/m3,甘油25kg/m3,微量元素溶液4L/m3 ;所述的微量元素溶液是由五水硫酸铜1. 5g/L，碘化钾O. 02g/L, 一水硫酸锰O. 5g/L，二水钥酸钠O. 2g/L，硼酸O. 02g/L,六水合氯化钴O. 3g/L，氯化锌20g/L，七水合硫酸亚铁19g/L，质量浓度为98%的硫酸4mL/L，生物素O. 2g/L，对氨基苯甲酸O. 05g/L和泛酸钙O. 05g/L加水制成，也就是说微量元素溶液为五水硫酸铜1. 5g，碘化钾O. 02g, 一水硫酸锰O. 5g，二水钥酸钠O. 2g，硼酸O. 02g,六水合氯化钴O. 3g，氯化锌20g，七水合硫酸亚铁19g，质量浓度为98%的硫酸4mL，生物素O. 2g，对氨基苯甲酸O. 05g和泛酸钙O. 05g加水至IL;; (3)、巴斯德毕赤酵母HGD-Ol菌株在5m3发酵罐中高密度发酵 巴斯德毕赤酵母HGD-Ol菌株在5m3发酵罐中采用上述无机盐培养基进行菌体蛋白生产其中，罐中无机盐培养基装液量为2. 5m3，用160°C以上的蒸汽对其进行灭菌，同时对接种管道、氨水及甲醇流加管道、取样口管道、空气过滤器进行灭菌，灭菌结束后用冷却循环水对无机盐培养基进行降温，当罐内无机盐培养基温度降至30 35°C时，用质量浓度为35%的氨水调节无机盐培养基pH至4. 5 5. O,然后将二级种子30L全部接种到5m3发酵罐内pH为4. 5 5. O的2. 5m3无机盐培养基中进行发酵，发酵温度为30 32°C，通气量1.5 2vv/m,搅拌转速80-200rpm, 24小时后,无机盐培养基中甘油耗尽,溶氧开始上升,开始流加甲醇，用甲醇检测仪器在线监测甲醇浓度，甲醇浓度控制在O. 8% 1. 2%，每6个小时取样测定菌体OD_值和湿重，45-50小时后，菌体湿重达到250-300 g/L，OD600值达到42 .45，此时发酵结束，收集发酵液； (4)、将5m3发酵罐中的发酵液在30m3发酵罐中高密度发酵，30m3发酵罐中用的发酵培养基与5m3发酵罐中的发酵培养基相同，均为无机盐培养基，配制方法同步骤(2): 30m3发酵罐中装无机盐培养基20m3，用同(3)步骤中的灭菌方法灭菌结束后，用质量浓度为35%的氨水调节无机盐培养基pH至4. 5-5. 0，将5m3发酵罐中的发酵液在发酵结束前12小时移种Im3到30m3发酵罐内的无机盐培养基中进行发酵，发酵温度30 32°C，控制罐内无机盐培养基中溶氧为30-50%，搅拌转速100-150rpm，当无机盐培养基中甘油消耗完后溶氧快速上升...
【专利技术属性】
技术研发人员：乔国厚，王兰甫，苟万晓，胡元森，张寅，曹敏，樊崇，张国杰，许宗浩，卫红伟，田亚鹏，朱广有，王霞，
申请(专利权)人：义马煤业集团煤生化高科技工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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