蛋白质纯化制造技术

技术编号:8538582 阅读:193 留言:0更新日期:2013-04-05 02:09
本发明专利技术涉及从周质细胞提取物中纯化抗体片段的方法,其包括第一阳离子交换色谱步骤及第二阴离子交换色谱步骤。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】蛋白质纯化专利
本专利技术为蛋白质纯化领域。更具体地,其涉及用于纯化抗体片段的方法。专利技术背景对蛋白质进行大规模的经济型纯化已经成为生物技术工业中越来越重要的问题。 通常,蛋白质是由细胞培养物生产的,使用的是通过插入含有编码所述蛋白质的基因的重组质粒而工程改造为生产目的蛋白质的哺乳动物或细菌细胞系。由于所使用的细胞系为活的生物体,所以其必须以复杂的生长基质进行饲养,所述生长基质含有糖类、氨基酸,以及生长因子。必须将目的蛋白质从饲养给细胞的化合物的混合物中及从细胞自身的副产物 (原料流)中分离出来以达到可足够用于人类治疗剂的纯度。卫生当局对用于人类施用的蛋白质中原料流的杂质设立的标准非常高。本领域已知的许多用于蛋白质的纯化方法包括的步骤要求应用例如低或高pH、高盐浓度或其他可能不可逆地损害要纯化的蛋白质的生物学活性的极端条件,因此并不适合。所以,分离所需蛋白质达到足够的纯度提出了艰难的挑战。在历史上,认为蛋白质纯化方案是基于分子特性如大小、电荷及溶解性在要纯化的蛋白质与不期望的蛋白质污染物之间的差异。基于这些参数的操作流程包括大小排阻色谱、离子交换色谱、差异沉淀等等。抗体及抗体片本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.07.27 GB 1012603.51.用于从周质细胞提取物中纯化抗体片段的方法,其包括 a)第一色谱步骤以捕获抗体片段,其中含有抗体片段浓度为至少1.5g/L的混合物进行阳离子交换色谱并随后洗脱以产生含有所述抗体片段的第一洗脱物;以及 b)第二色谱步骤,其中第一洗脱物进行阴离子交换色谱以捕获杂质并产生含有抗体片段的流出液。2.根据权利要求1的方法,其中的方法包含不超过两个色谱步骤。3.用于从周质细胞提取物中纯化抗体片段的方法,其基本上由以下步骤构成 a)第一色谱步骤以捕获抗体片段,其中含有抗体片段浓度为至少1.5g/L的混合物进行阳离子交换色谱并随后洗脱以产生含有所述抗体片段的第一洗脱物 b)对第一洗脱物进行的第一次超滤; c)第二色谱步骤,其中纯化的第一洗脱物进行阴离子交换色谱以捕获杂质并产生含有抗体片段的流出液;以及 d)对流出液进行的第二次超滤。4.根据权利要求1-3中任何一项的方法,其中所有色谱步骤都是在色谱柱上进行的。5.根据权利要求1-4中任何一项的方法,其中阳离子交换色谱是以洗脱模式进行的。6.根据权利要求1-5中任何一项的方法,其中第一阳离子色谱步骤按顺序包含以下步骤 a)将含有抗体片段的混合物如周质细胞提取物加样至阳离子交换柱, b)用洗涤缓冲液洗涤阳离子交换柱,其中在洗涤期间缓冲液的导电率、pH和盐浓度基本上保持不变,以及 c)用洗脱缓冲液洗脱抗体片段。7.根据权利要求6的方法,其中在第一色谱步骤之前,洗涤缓冲液的pH与含有抗体片段的混合物的PH相同。8.根据权利要求6或7的方法,其中含有抗体片段的混合物在第一色谱步骤前具有的pH 为 4. 0-5. O。9.根据权利要求1-8中任何一项的方法,其...

【专利技术属性】
技术研发人员:M·斯皮塔利J·西蒙斯R·怀特康比M·R·皮尔斯黑金斯
申请(专利权)人:UCB医药有限公司
类型:
国别省市:

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