两步酶促法制备结合态熊去氧胆酸的方法技术

本发明专利技术涉及两步酶促法制备结合态熊去氧胆酸的方法，属于生物技术领域。本发明专利技术在水溶液状态下，能在7α-HSDH和7β-HSDH存在下转化底物结合态鹅去氧胆酸为结合态熊去氧胆酸，而且中间步骤不需要分离，非常简单，而且转化率非常高。特别是作为混合物状态的鸡胆汁，鸭胆汁或鹅胆汁，不需要将结合态鹅去氧胆酸分离纯化就能发生反应，该制备工艺简单，易行，为结合态熊去氧胆酸原料提供了新的简便的制备方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体涉及一种7 α -羟基类固醇脱氢酶(7 a -HSDH)和 羟基类固醇脱氢酶(7i3-HSDH)联用，两步法催化结合态鹅去氧胆酸转化为结合态熊去氧胆酸的方法。
技术介绍
熊胆是名贵的中药材，用于治疗胆结石疾病以及各种急性、慢性肝病，具有良好的治疗效果。牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)是中药材熊胆的主要有效成份之一。然而，中药熊胆粉主要的获取方式为“活熊引流取胆”，这有违野生动物保护法，并且被认为是非常不“人道” 的获取方式。不过禽畜胆汁中存在众多胆酸类物质，尤其是鸡鸭鹅胆汁中含有丰富的牛磺鹅去氧胆酸(T⑶CA)。T⑶CA与TUDCA的差别不仅在于7位羟基的差向异构，而且它们的生物活性也相差甚远。目前TUDCA除可以从熊胆中提取外，其制备的方法还有化学合成法和生物转化法。化学合成牛磺熊去氧胆酸，国内外报道主要有三种化学半合成法①用熊去氧胆酸(UDCA)与氯甲酸乙酯或特戊酰氯反应形成混合酸酐，在碱性条件下与牛磺酸反应，再经离子交换柱纯化制得TUDCA，总收率约62%；②UDCA和牛磺酸在碱性条件下分别在N-乙氧羰基-2-乙氧基-1，2- 二氢喹啉(EED本文档来自技高网...

【技术保护点】
两步酶促法制备结合态熊去氧胆酸的方法，包括如下步骤：（1）在7α?羟基类固醇脱氢酶和氧化型辅酶NAD+或NADP+存在的条件下将溶于水溶液中的底物结合态鹅去氧胆酸的7位α?羟基氧化成羰基，形成中间产物结合态7?羰基?石胆酸；（2）在步骤（1）反应后的混合物中，向混合物中加入7β?羟基类固醇脱氢酶和还原型辅酶NADH或NADPH，将中间产物7位羰基还原成β?羟基得到结合态熊去氧胆酸。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王伯初，谭君，娄德帅，祝连彩，刘绍勇，岑小惜，季庆治，
申请(专利权)人：上海凯宝药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：