一种利用扩增DNA片段长度多态性测定短链RNA的方法技术

技术编号:10577478 阅读:228 留言:0更新日期:2014-10-29 11:03
本发明专利技术公开了一种利用扩增DNA片段长度多态性测定短链RNA的方法,属于分子生物技术领域,包括以下步骤:首先利用至少两种与待测短链RNA相比无天然同源序列的合成小RNA作为测定的内标,将这些合成小RNA以不同分子数混合,形成动态小RNA标准分子梯度;再以等量的所述动态小RNA标准与所述待测短链RNA混合,经由RNA反转录、cDNA加尾、PCR同步扩增及PCR产物DNA长度多态性片段的荧光定量分析,测得所述待测短链RNA扩增产生的DNA片段荧光强度在所述动态小RNA标准荧光强度梯度上的相对比例,本方法可以实现对短链RNA尤其是miRNA的绝对定量,且具有高特异性、高灵敏度、结果客观、重复性好,可在100-106拷贝数范围内准确定量,也适用于RNA粗提物。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种利用扩增DNA片段长度多态性定量测定短链RNA的方法,其特征在于,包括以下步骤:首先利用至少两种与待测短链RNA相比无天然同源序列的合成小RNA作为测定的内标,将这些作为内标的所述合成小RNA以不同分子数混合,形成动态小RNA标准分子梯度;再以等量的所述动态小RNA标准与所述待测短链RNA混合,经由RNA反转录、cDNA加尾、PCR同步扩增及PCR产物DNA长度多态性片段的荧光定量分析,测得所述待测短链RNA扩增产生的DNA片段荧光强度在所述动态小RNA标准荧光强度梯度上的相对比例,从而实现所述待测短链RNA的相对定量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:徐凯唐放张耀艺冯梓浩杨宇吴秀锦张菲菲
申请(专利权)人:成都诺恩生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:四川;51

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