一种用于限制片段长度多态性研究的家蚕DNA抽提方法技术

本发明专利技术公开了一种用于限制片段长度多态性研究的家蚕ＤＮＡ抽提方法，以家蚕个体为研究对象，解剖后取后部丝腺；加入液氮后经充分研磨后，充分酶解后，用酚进行抽提后，用正丁醇浓缩后用乙醇进行沉淀；ＲＮａｓｅ处理后，经酚、氯仿抽提后，用正丁醇浓缩后用乙醇进行沉淀。严格控制实验环节，每头家蚕可抽提高纯度ＤＮＡ（ＯＤ↓［２６０／２８０］＞１．９）２００μｇ，可用于２００次ＲＦＬＰ检测。该发明专利技术解决了目前以家蚕为材料的ＲＦＬＰ研究ＤＮＡ纯度不高和抽提的ＤＮＡ量过少的问题。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种用于限制片段长度多态性研究的家蚕ＤＮＡ抽提方法，包括解剖家蚕取出后部丝腺，从家蚕个体的后部丝腺抽提ＤＮＡ，再采用ＲＮＡ酶消解ＲＮＡ，所述解剖家蚕取出后部丝腺的具体步骤为，在无菌条件下解剖家蚕，取后部丝腺，经磷酸盐缓冲液冲洗，将后部丝腺研磨至粉末；其特征在于：从后部丝腺抽提ＤＮＡ和采用ＲＮａｓｅ酶消解ＲＮＡ的具体步骤为：（１）采用ＤＮＡ酶解缓冲液融化后部丝腺粉末，混匀后将溶液于４８～５５℃水浴裂解６～８小时；（２）加入与步骤（１）中溶液等体积的饱和酚，混匀后离心，取上清液，提取ＤＮＡ；取与上清液等体积的正丁醇与上清液混匀，离心后弃上清液，重复离心弃上清液的过程至少１次，浓缩至步骤（１）中溶液体积的１／５以下；采用无水乙醇和醋酸钠析出ＤＮＡ，然后用ＴＥ缓冲液溶解ＤＮＡ，混匀后至少放置０．５小时；（３）于３５～３９℃水浴中，采用ＲＮａｓｅ酶处理步骤（２）中的ＤＮＡ溶液，消解去除ＲＮＡ；加入与ＤＮＡ溶液等体积的饱和酚，混匀后离心，除去下层的酚层，再加入同样体积的饱和酚，混匀后离心，取上清液；（４）取与步骤（３）中的饱和酚等体积的酚氯仿，与步骤（３）所得的上清液混匀后离心，取上清液，并取与之等体积的正丁醇混合均匀，离心后弃上清，重复离心后弃上清的过程至少１次，浓缩至步骤（２）中的ＤＮＡ溶液体积的１／６以下；采用无水乙醇和醋酸钠析出ＤＮＡ，用７０～７５％的乙醇洗盐洗涤，溶解于ＴＥ缓冲液中。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李兵，沈卫德，许雅香，卫正国，陈玉华，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]