氨肽酶及其高产菌的高通量筛选方法技术

本发明专利技术公开了氨肽酶及其高产菌的高通量筛选方法，涉及一种氨肽酶及其高产微生物菌株的高通量筛选方法。将单菌落接种于装有液体种子培养基的深孔板I的孔中，摇床培养，将深孔板I深孔中的种子液对应地接种到装有发酵培养基的深孔板II对应的深孔中，摇床培养，将深孔板II离心，上清液为粗酶液。在酶标板的微孔中加入缓冲液和显色底物溶液或荧光底物溶液，再加入稀释的待测粗酶液，于30～70℃水浴反应10～30min，反应结束时立即加入30～50％乙酸溶液并终止反应。采用酶标仪测定反应液的吸光度或荧光强度，根据标准曲线和粗酶液的稀释倍数计算酶活。本发明专利技术实现了高通量培养、粗酶液的高通量制备及酶活的高通量测定的目标。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种氨肽酶及其高产微生物菌株的高通量筛选方法，属于微生物育种、酶工程和发酵工程

技术介绍
氨肽酶(aminopeptidase)是蛋白水解酶中外肽酶的一类，它们能从蛋白质和多肽链的N末端顺序水解氨基酸，其催化机理可以用下式表示权利要求1.，包括如下步骤 挑取氨肽酶产生菌的单菌落，接种于装有液体种子培养基的深孔板I的孔中，盖上深孔板的盖子，于30 40°C、180 300rpm摇床培养4 IOh ;将深孔板I中的种子液对应地接种到装有发酵培养基的深孔板II中，于30 40°C、180 300rpm摇床培养16 48h ;将深孔板II放置于孔板离心机，5000 IOOOOXg离心5 30min ;深孔板II的深孔中的上清液为粗酶液；以微量化梯度稀释法将粗酶液适当稀释；用酶标板法测定粗酶液的酶活，在酶标板的微孔中加入缓冲液和显色底物溶液或荧光底物溶液，加入稀释的待测粗酶液，以蒸馏水作空白对照，于30 70°C水浴反应10 30min，反应结束立即加入30 50%乙酸溶液终止反应；采用酶标仪测定反应液的吸光度或荧光强度，根据标准曲线和粗酶液的稀释倍数计算酶活；根据本文档来自技高网...

【技术保护点】
氨肽酶及其高产菌的高通量筛选方法，包括如下步骤：挑取氨肽酶产生菌的单菌落，接种于装有液体种子培养基的深孔板I的孔中，盖上深孔板的盖子，于30～40℃、180～300rpm摇床培养4～10h；将深孔板I中的种子液对应地接种到装有发酵培养基的深孔板II中，于30～40℃、180～300rpm摇床培养16～48h；将深孔板II放置于孔板离心机，5000～10000×g离心5～30min；深孔板II的深孔中的上清液为粗酶液；以微量化梯度稀释法将粗酶液适当稀释；用酶标板法测定粗酶液的酶活，在酶标板的微孔中加入缓冲液和显色底物溶液或荧光底物溶液，加入稀释的待测粗酶液，以蒸馏水作空白对照，于30～70℃水浴...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：姜文侠，杨玉兰，刘琦，杨萍，陈宁，
申请(专利权)人：天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：