本发明专利技术公开了一种菌种保藏液和菌种保藏方法。该菌种保藏液以100mL溶液计含有酵母粉0.2g～0.6g、氯化钠0.4g～1.0g、二甲亚砜2mL～10mL、甘油10mL～30mL、其余为水。该菌种保藏方法是将待保藏菌种加入上述菌种保藏液中，混合均匀，得到待保藏菌液。用无菌滤纸吸取待保藏菌液，得到含菌滤纸；用无菌透明胶带将含菌滤纸固定在无菌蜡纸上，然后置于冰箱中保藏。本发明专利技术菌种保藏液可长时间维持微生物活力、保藏期较长。本发明专利技术的菌种保藏方法生物安全性和保存效能均较高，操作方便且转运方便，特别是当菌种数量时具有储存空间小且便于查找。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物工程
，具体涉及一种。
技术介绍
菌种保藏在微生物研究及实际应用中必不可少。由于微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在长时间内使其不发生变异而又保持生活能力。目前菌种保藏方法主要有以下几种(I)传代培养保藏法。该方法又包括斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养作保藏厌氧细菌用)等几种。 (2)液体石蜡覆盖保藏法。该方法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间。(3)载体保藏法。该方法是将微生物吸附在适当的载体(如土壤、沙子、硅胶等)上，然后进行干燥的保藏法。(4)寄主保藏法。用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。(5 )冷冻保藏法。可分为低温冰箱法(-20 V -30 V或者-50 V _80 V )、干冰酒精快速冻结法(约-70 °C)和液氮法(_196°C)等。上述几种方法各有优缺点，但总的来说仍然存在以下缺点(1)不能长时间维持微生物活力，保藏期较短。(2)生物安全性较低，保存效能较低。(3)操作繁琐，保存不便，难以转运。(4)当菌种数量较多时，储存空间较大，而且不便查找。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于针对现有技术的不足，提供一种可长时间维持微生物活力、保藏期较长的菌种保藏液。本专利技术的另一目的在于针对现有技术的不足，提供一种生物安全性和保存效能均较高、操作方便且转运方便、特别是当菌种数量时具有储存空间小且便于查找的菌种保藏方法。实现本专利技术目的之一的技术方案是一种菌种保藏液，以IOOmL溶液计含有酵母粉O. 2g O. 6g、氯化钠O. 4g 1. 0g、二甲亚砜2mL 10mL、甘油IOmL 30mL、其余为水。优选以IOOmL溶液计含有酵母粉O. 5g、氯化钠O. 6g、二甲亚砜5mL、甘油20mL、其余为水。该菌种保藏液以IOOmL溶液计还含有胰蛋白O. 8g 1. 2g和葡萄糖O. 2g O. 6g。优选以IOOmL溶液计含有胰蛋白1. 0g、酵母粉O. 5g、氯化钠O. 6g、葡萄糖O. 5g、二甲亚砜5mL、甘油20mL、其余为水。本专利技术的另一目的的技术方案是一种菌种保藏方法，具有以下步骤①将待保藏菌种加入上述菌种保藏液中，混合均匀，得到待保藏菌液。②用无菌滤纸吸取步骤①得到的待保藏菌液，得到含菌滤纸用无菌透明胶带将步骤②得到的含菌滤纸固定在无菌蜡纸上，然后置于冰箱中保藏。当待保藏菌种数量较多而使得无菌滤纸(或含菌滤纸)较多的情况下，则可以将多张含菌滤纸呈阵列固定在无菌蜡纸的一面，并且每张含菌滤纸一侧相应设有一张作为标识的贴纸，用于记载菌种名称、保藏日期以及鉴定号等，从而起到清楚地标识作用，便于查找。当待保藏菌种数量较多而使得一张无菌蜡纸的一面不够使用的情况下，则可以将含菌滤纸及贴纸设置在同一张无菌蜡纸的另一面。而当待保藏菌种数量较多而使得一张无菌蜡纸的两面都不够使用的情况下，可以采用多张无菌蜡纸，并由文件夹夹装，并将该文件夹置于冰箱中保藏。文件夹扉页设有生物安全标识，首页则标有目录和索引，从而进一步起到清楚标识作用，便于查找。 本专利技术具有的积极效果(I)本专利技术的菌种保藏液中的二甲亚砜和甘油可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。而酵母粉和氯化钠则可为细菌提供能量，防止其死亡。从而使得该菌种保藏液可长时间维持微生物活力，大大延长了保藏期。(2)本专利技术的菌种保藏液中的胰蛋白和葡萄糖可进一步为细菌提供能量，从而进一步维持微生物活力。使用本专利技术的方法在使菌种在_18°C保藏两年以及在25°C复苏一个月均存活。(3)本专利技术的菌种保藏方法采用具有良好的吸水性及粘附性的无菌滤纸作为粘附介质，并且采用具有良好的隔绝空气作用的蜡纸以及透明胶带，这样能够保证所保藏菌种的无氧状态，生物安全性和保存效能均较高。(4)本专利技术的菌种保藏方法操作简便，转运方便，细菌生存期长，可储存于普通冰箱冻藏室，非常适合临床微生物菌种实验室分离的细菌、酵母菌及丝状真菌的日常保藏及转运。(5)本专利技术一方面在待保藏菌种较多而使得含菌滤纸较多的情况下，可将多张含菌滤纸呈阵列设置在无菌蜡纸上，并且采用贴纸记载菌种名称、保藏日期以及鉴定号等，从而起到清楚地标识作用，便于查找。另一方面在待保藏菌种更多而使无菌蜡纸较多的情况下，以文件夹方式存储菌种，其扉页设有生物安全标识，首页则标有目录和索引，从而进一步起到清楚标识作用，便于查找。特别是还大大减小了储存空间。附图说明图1为多张含菌滤纸呈阵列设置在无菌蜡纸一面的示意图。具体实施例方式(实施例1)本实施例为菌种保藏液的配制。将1. Og的胰蛋白、O. 5g的酵母粉、O. 6g的氯化钠、O. 5g葡萄糖、5. OmL的二甲亚砜、20mL的甘油加入到150mL的烧瓶中，然后加水至IOOmL,充分混匀溶解后，在O.1MPa的压力以及121°C的温度下进行20min的灭菌，得到菌种保藏液。(实施例2 实施例5)各实施例的菌种保藏液的配制与实施例1基本相同，不同之处见表I。表I权利要求1.一种菌种保藏液，其特征在于以IOOmL溶液计含有酵母粉O. 2g O. 6g、氯化钠O.4g 1. 0g、二甲亚讽2mL 10mL、甘油IOmL 30mL、其余为水。2.根据权利要求1所述的菌种保藏液，其特征在于以IOOmL溶液计含有酵母粉O.5g、氯化钠O. 6g、二甲亚砜5mL、甘油20mL、其余为水。3.根据权利要求1所述的菌种保藏液，其特征在于以IOOmL溶液计还含有胰蛋白O.8g 1. 2g和葡萄糖O. 2g O. 6g。4.根据权利要求3所述的菌种保藏液，其特征在于以IOOmL溶液计含有胰蛋白1.0g、酵母粉O. 5g、氯化钠O. 6g、葡萄糖O. 5g、二甲亚砜5mL、甘油20mL、其余为水。5.一种菌种保藏方法，其特征在于具有以下步骤 ①将待保藏菌种加入菌种保藏液中，混合均匀，得到待保藏菌液；所述菌种保藏液以IOOmL溶液计含有酵母粉O. 2g O. 6g、氯化钠O. 4g 1. 0g、二甲亚砜2mL 10mL、甘油IOmL 30mL、其余为水； ②用无菌滤纸吸取步骤①得到的待保藏菌液，得到含菌滤纸； ③用无菌透明胶带将步骤②得到的含菌滤纸固定在无菌蜡纸上，然后置于冰箱中保藏。6.根据权利要求5所述的菌种保藏方法，其特征在于所述无菌滤纸根据待保藏菌种数量至少设有一张；每张无菌滤纸吸取待保藏菌液后得到的含菌滤纸一侧相应设有一张作为标识的贴纸。7.根据权利要求6所述的菌种保藏方法，其特征在于所述无菌蜡纸根据待保藏菌种数量至少设有一张；所述无菌蜡纸多于一张时，则由文件夹夹装，并将该文件夹置于冰箱中保藏。8.根据权利要求5至7之一所述的菌种保藏方法，其特征在于所述菌种保藏液以IOOmL溶液计含有酵母粉0. 5g、氯化钠0. 6g、二甲亚砜5mL、甘油20mL、其余为水。9.根据权利要求5至7之一所述的菌种保藏方法，其特征在于所述菌种保藏液以IOOmL溶液计还含有胰蛋白0. 8g 1. 2g和葡萄糖0. 2g 0. 6g。10.根据本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种菌种保藏液，其特征在于：以100mL溶液计含有酵母粉0.2g～0.6g、氯化钠0.4g～1.0g、二甲亚砜2mL～10mL、甘油10mL～30mL、其余为水。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：朱长太，凌扬，董春雷，孔颖泽，张长松，万美珍，刘永萍，吴婷婷，
申请(专利权)人：常州市肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：
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