尸毒梭菌菌株及其应用制造技术

一种经分离的尸毒梭菌(Clostridium cadaveris)菌株ITRI04005及其应用，该经分离的尸毒梭菌菌株ITRI04005寄存于德国国家菌种保藏中心(DSMZ)，寄存编号为DSM 32078。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术是关于一经分离的尸毒梭菌（Clostridiumcadaveris)菌株ITRI04005及 其应用，尤其关于该尸毒梭菌菌株ITRI04005于进行发酵反应W生产有机化合物的应用， W及该尸毒梭菌菌株ITRI04005于基因改造的应用，包括：提供一可W表现或增强表现产 醇路径酵素的基因的基因改造菌株、提供一减弱表现或不会表现参与乙酸合成的酵素的基 因的基因改造菌株、W及提供一可W表现或增强表现热休克蛋白化eatshockprotein， HS巧的基因的基因改造菌株。
技术介绍
W往关于梭菌属（Clostridiumsp.)细菌的研究，大多是集中在致病菌株的探 讨。然而，近年来随着生质燃料化io化el)的发展，有些适用于生产生质燃料的梭菌也逐 渐受到重视，例如热纤梭菌（Clostridiumthermocellum)具有强效的纤维素水解酶，其 可直接利用纤维素产生乙醇与氨气。此可参见例如：化eier等人的文献（ApplEnviron Microbiol. 1988Jan;54(1) :204-211)，该文献全文并于此处W供参考。又例如，将达梭菌 (Clostridium,ljungd址lii)，其可W气体（例如一氧化碳或二氧化碳等碳氧化物加氨气） 作为原料而产生乙醇。 尽管已有许多可用于生质燃料或化学品生产的菌株，但该等菌株一般是W发酵 培养基中的醋类作为碳源，并W发酵培养基中的蛋白腺（peptone)作为氮源，在碳源及氮 源缺一不可的情况下生产有机化合物，甚少菌株是可W利用不同类型的物质做为基质。此 夕F，微生物经由发酵反应W代谢基质所产生的代谢产物通常为成分复杂的混合物，必须通 过纯化分离程序W取得所欲的标的代谢物。例如，梭菌属（ClostridiumSP.)细菌通过丙 酬-下醇-乙醇（acetone-butanol-ethanol，AB巧发酵程序会产生下醇、乙醇、及丙酬，并 伴随少部分的有机酸（例如乙酸、下酸）。另，微生物对于代谢产物的耐受性也是影响发酵 反应的产率的重要因素。因此，业界仍需要可利用不同类型的基质且同时提供良好的目标 产物产率的微生物，故致力于研究与开发可利用多元料源W生产化学品或生质燃料且具有 局广物耐雙性的菌株。 本专利技术即为针对上述需求所作的研究，本案专利技术人筛选得到一新颖的尸毒梭菌 (Clostridiumcadaveris)菌株ITRI04005,此菌株除可利用醋类及/或胺基酸作为基质W 生产有机化合物，其相较于其他已知的梭菌菌株更适合用于基因改造操作，W提供可利用 醋类及/或胺基酸作为基质生产有机酸或醇、具有高产物专一性、及/或具有高产物耐受 性的基因改造菌株，所获得的基因改造菌株可应用于利用多元料源W生产化学品或生质燃 料，并提供良好的目标产物产率。
技术实现思路
本专利技术的一目的，在于提供一种经分离的尸毒梭菌（Clostridiumcadaveris)菌 株口RI04005,其寄存于德国国家菌种保藏中屯、值SMZ)，寄存编号为DSM32078。该尸毒梭 菌菌株口RI04005具有如SEQIDNO: 1所示的16S核糖体核糖核酸（16SrRNA)片段，或具 有与SEQIDNO: 1具至少95%相似度的16S核糖体核糖核酸（16SrRNA)片段。 本专利技术的另一目的，在于提供一种基因改造菌株，其是由尸毒梭菌菌株ITRI04005 经基因改造而得。较佳地，该基因改造菌株具有如SEQIDNO: 1所示的16S核糖体核糖核 酸（16SrRNA)片段，或具有与SEQIDN0:1具至少95%相似度的16S核糖体核糖核酸（16S rRNA)片段。较佳地，该基因改造菌株符合W下的至少一条： (1)可W表现或增强表现产醇路径酵素的基因； 似减弱表现或不会表现参与乙酸合成的酵素的基因拟及 (3)可W表现或增强表现热休克蛋白化eatshockprotein,服巧的基因。 本专利技术的又一目的，在于提供一种生产有机酸的方法，其包含提供一基质，W及使 上述的尸毒梭菌菌株ITRI04005及/或上述的基因改造菌株于厌氧氛围下利用该基质进行 发酵反应W产生有机酸。 本专利技术的再一目的，在于提供一种生产醇的方法，其包含提供一基质，W及使上述 的基因改造菌株于厌氧氛围下利用该基质进行发酵反应W产生醇。其中，该基因改造菌株 可W表现或增强表现产醇路径酵素的基因。 本专利技术的详细
技术实现思路
及部分具体实施态样，将描述于W下内容中，W供本专利技术 所属领域技术人员据W明了本专利技术的特征。【附图说明】图1是显示，于一厌氧氛围下，将尸毒梭菌菌株ITRI04005W及尸毒梭菌模式菌株 (typestrain)BCRC14511培养于一葡萄糖浓度为5克/升的CGM培养基中，并于不同时间 点所测得的ODe。。数值的曲线图； 图2A及图2B是显示，于一厌氧氛围下，将尸毒梭菌菌株ITRI04005W及尸毒梭 菌模式菌株BCRC14511培养于一培养基，进行发酵反应后，所测得的下酸碳转化率的长条 图，其中，图2A的培养基是一葡萄糖浓度为5克/升的CGM培养基，图2B的培养基是一葡 萄糖浓度为3克/升且乳酸盐浓度为2克/升的CGM培养基； 图3所示为带有酒精去氨酶（alcoholdehy化ogenase，a化）基因的pGE536重组 质体； 图4所示为「pta-ack」基因片段经「catP」基因片段取代的PGE403转殖质体； 图5A及图5B所示分别为带有hspl8基因的PGE406重组质体W及带有「groE化」 基因的PGE407重组质体； 图6是显示，于一厌氧氛围下，将尸毒梭菌菌株ITRI04005、ITRI05023、W及 ITRI05025分别培养于一下酸钢浓度为10克/升的CGM培养基中、或一不添加下酸钢的CGM 培养基中，进行发酵反应后，所测得的相对下酸生成率的长条图； 图7A及图7B是显示，于一厌氧氛围下，将尸毒梭菌菌株口RI04005W及 ITRI05023培养于不同下酸钢浓度的CGM培养基中，并于不同时间点所测得的ODe。。数值的 曲线图，其中，图7A的下酸钢浓度为10克/升，图7B的下酸钢浓度为15克/升。【具体实施方式】 W下将描述根据本专利技术的部分具体实施态样；只是，在不背离本专利技术精神下，本 专利技术尚可W多种不同形式的态样来实践，不应将本专利技术保护范围解释为限于说明书所陈述 的。此外，除非文中有另外说明，于本说明书中（尤其是在权利要求书中）所使用的「一」、 「该」及类似用语应理解为包含单数及复数形式。另，本文所使用的「约」、「大约」或「近乎」 等词，实质上代表与所述的数值相差在20%W内，较佳在10%W内，且更佳在5 %W内。 此外，于本专利技术中，所谓的「微生物」是指肉眼无法看见的生物体（例如：细菌、 真菌），其可包括于自然界中自然存在的野生型（wildtype),W及因任何因素（天然或人 为）所产生的突变型（mutant)。所谓「发酵反应」是指微生物代谢一或多种物质W产生 有机化合物的过程。所谓「培养基」是指可提供微生物菌株生长、繁殖所需的养分与条件 (如酸碱值、湿度等）的必要成分物质，通常是视所欲培养的微生物菌株而调整组成，例如 可添加氯化氨、氨氧化钢、氨氧化锭（畑4〇巧、硫酸锭（(NH4)2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种经分离的尸毒梭菌(Clostridium cadaveris)菌株ITRI04005，其寄存于德国国家菌种保藏中心(DSMZ)，寄存编号为DSM 32078。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：童迁祥，陈昌杰，吴韶文，曾士展，王心慈，徐勤祯，
申请(专利权)人：鼎唐能源科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71