一种重组淀粉脱支酶发酵生产工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种淀粉脱支酶的发酵生产工艺，属于发酵工程技术领域。本发明专利技术采用重组大肠杆菌E.coLi?BL21(DE3)为生产菌株，在工业级发酵培养基中连续流加甘油进行分批补料发酵，在发酵过程中添加甜菜碱，对数生长中期流加乳糖进行诱导，发酵后期添加Tween80促进酶的分泌，淀粉脱支酶酶活达到1400U/mL。采取本策略进行发酵实现了淀粉脱支酶的高效可溶性表达，大幅提高了脱支酶的生产强度。本工艺采用工业上常用的甘油、蛋白胨、酵母粉等原料进行生产，简单易行，适于大规模生产。

【技术实现步骤摘要】
一种重组淀粉脱支酶发酵生产工艺
本专利技术属于酶发酵工程
，本专利技术涉及一种重组淀粉脱支酶高效可溶性表达的发酵生产方法。
技术介绍
淀粉脱支酶(E. C. 3. 2. I. 41)是一类能够水解支链淀粉、α _极限糊精等分子中 α -1，6葡萄糖苷键的淀粉水解酶。淀粉脱支酶通常和其它淀粉酶复配用于生产葡萄糖、果糖、麦芽糖、麦芽糊精、低聚糖等产品。淀粉脱支酶可以切断淀粉中的分支点，加速后续酶的反应，缩短反应时间，提高淀粉的转化率，降低其它糖化用酶制剂的使用量，从而达到增加产量、提高设备利用率、降低生产成本的目的。目前能够在最适温度和最适PH上同时实现与糖化酶进行较好配合的商品化淀粉脱支酶主要是美国杰能科公司的OptimaxL-lOOO。我国虽然对淀粉脱支酶进行了大量的研究，但是还没有实现该酶的工业化生产，还需要依赖进口。近年来国内外学者把淀粉脱支酶的开发研究作为非常重要的研究主题。Bunzo Mikami等对来源于Klebsiella pneumoniae的淀粉脱支酶蛋白晶体结构进行解析,发现该酶具有GH13淀粉水解酶家族共有的(β/α)8桶状结构。近年来国外学者从极端嗜热微生本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种淀粉脱支酶的发酵生产方法，其特征在于以含有重组淀粉脱支酶编码基因的大肠杆菌为生产菌株，发酵工艺如下：将活化后的种子培养液接入发酵培养基中，通过控制搅拌转速和通风量使溶氧维持20?30％，控制温度为25?37℃，流加氨水控制pH?7.0±0.5，培养5?6小时；待溶氧上升至80?100％，以指数流加的方式补加补料液使溶氧维持在20?30％，温度维持在25?37℃，流加氨水控制pH?7.0±0.5，在发酵过程中添加适量的甜菜碱，当菌体OD600达到15?30时补加0.75?1.5％(m/V)的甘氨酸；继续培养至菌体吸光度OD600达到45?60时，通过补加乳糖溶液，使发酵液剩余乳糖浓度控制在4...

【技术特征摘要】
1.一种淀粉脱支酶的发酵生产方法，其特征在于以含有重组淀粉脱支酶编码基因的大肠杆菌为生产菌株，发酵工艺如下 将活化后的种子培养液接入发酵培养基中，通过控制搅拌转速和通风量使溶氧维持20-30%，控制温度为25-37 °C，流加氨水控制pH 7. 0±0. 5，培养5_6小时； 待溶氧上升至80-100%，以指数流加的方式补加补料液使溶氧维持在20-30%，温度维持在25-37°C，流加氨水控制pH 7. 0±0. 5，在发酵过程中添加适量的甜菜碱，当菌体OD600达到15-30时补加0. 75-1. 5% (m/V)的甘氨酸； 继续培养至菌体吸光度0D_达到45-60时，通过补加乳糖溶液，使发酵液剩余乳糖浓度控制在4-6g/L ;同时溶氧控制在20-30%，控制pH 7. 0±0. 5，诱导5_20小时，添加吐温80后再继续发酵1-10小时。2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于所述甜菜碱的添加量为5-200mmol/...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴敬，段绪果，陈晟，陈坚，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：