突变型头孢菌素C酰化酶及其制备方法和转化7-ACA的方法技术

本发明专利技术提供了一种突变型头孢菌素C酰化酶，将具有序列表中SEQ?ID?NO.1的氨基酸序列进行一个或多个氨基酸位点取代得到的突变氨基酸序列；氨基酸取代位点为288位的缬氨酸、296位的组氨酸和417位的组氨酸中的一个或多个。解决了现有技术中突变型头孢菌素C酰化酶催化活性小，酶活性受外界影响大，存在产物抑制的技术问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程领域，特别地，涉及一种突变型头孢菌素C酰化酶，本专利技术的另一方面还提供了前述突变型头孢菌素C酰化酶的制备方法和应用。
技术介绍
7_氨基头抱烧酸(7-aminocephalosporanic acid, 7-ACA)是医药工业生产半合成头孢菌素抗生素的重要中间体，工业化生产7-ACA主要用化学法和酶法。目前国内7-ACA 生产大多仍采用化学法，但由于该方法需采用大量昂贵的化学试剂、反应条件苛刻、环境污染严重、成本高等缺陷，而酶法生产7-ACA优势明显，工艺简单、反应条件温和、生产环保、 成本低、质量优等特点。化学法技术成熟，进一步上升的空间较小；而酶法技术先进，绿色环保，仍具备较大上升空间。随着国家环保的重视、及对可持续发展的绿色工业追求，酶法取代化学法是必然的趋势。酶法生产7-ACA可分为两步酶法和一步酶法。目前主要研究及工业化应用的是两步酶法，其过程主要是头孢菌素C钠盐在固定化D-氨基酸氧化酶催化下被氧化成α -酮己二酸单酰7-ACA，α -酮己二酸单酰7-ACA迅速转化为GL-7-ACA，GL-7-ACA在固定化 GL-7-ACA酰化酶催化作用下裂解为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种突变型头孢菌素C酰化酶，其特征在于，将具有序列表中SEQ?ID?NO.1所述的氨基酸序列进行一个或多个氨基酸位点取代得到的突变氨基酸序列；所述氨基酸取代位点为288位的缬氨酸、296位的组氨酸和417位的组氨酸中的一个或多个。

【技术特征摘要】
1.一种突变型头孢菌素C酰化酶，其特征在于，将具有序列表中SEQ ID NO. I所述的氨基酸序列进行一个或多个氨基酸位点取代得到的突变氨基酸序列；所述氨基酸取代位点为288位的缬氨酸、296位的组氨酸和417位的组氨酸中的一个或多个。2.根据权利要求I所述的突变型头孢菌素C酰化酶，其特征在于，所述突变氨基酸序列的编码基因为a e中的一种， a)具有序列表中SEQID NO. 4所述的基因序列； b)具有序列表中SEQID NO. 6所述的基因序列； c)具有序列表中SEQID NO. 8所述的基因序列； d)在严格条件下可与所述a、b或c任一项限定的基因序列杂交且编码具有头孢菌素C酰化酶活性的蛋白质的基因序列； e)与所述a、b或c任一项限定的基因序列具有90%以上的同源性且编码具有头孢菌素C酰化酶活性的蛋白质的基因序列。3.根据权利要求I所述的突变型头孢菌素C酰化酶，其特征在于，所述突变氨基酸序列为将所述第288位的缬氨酸突变为甲硫氨酸，具有序列表中SEQ ID NO. 3所述的氨基酸序列。4.根据权利要求I所述的突变型头孢菌素C酰化酶，其特征在于，所述突变氨基酸序列为将所述第288位的缬氨酸突变为甲硫氨酸，将所述第417位的组氨酸突变为甘氨酸，具有序列表中SEQ ID NO. 5所述的氨基酸序列。5.根据权利要求I所述的突变型头孢菌素C酰化酶，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：许岗，黄斌，曾红宇，
申请(专利权)人：湖南福来格生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：