本发明专利技术公开了一种重组耐热短链脱氢酶基因、编码酶、载体、工程菌及应用，所述重组耐热短链脱氢酶基因具有与SEQ?ID?No.1所示核苷酸序列90%以上同源性；本发明专利技术所涉及的重组耐热短链脱氢酶具有高活性、热稳定性好，能高效高选择性地制备手性醇类化合物，可以在葡萄糖脱氢酶GDH或甲酸脱氢酶条件下构建辅酶NADPH或NADH循环再生系统，能大大降低反应过程中辅酶的消耗；本发明专利技术方法极大地降低了生产的成本，且反应条件温和，对环境友好，操作简便，在合成药物手性中间体方面具有很好的工业应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种重组耐热短链脱氢酶基因、基因编码酶、重组载体、工程菌及基因编码酶在制备光学手性醇中的应用。
技术介绍
短链脱氢酶属于羰基还原酶(EC1. I. I. 184)。在生物体中，羰基还原酶既可将酮底物还原为相应的醇，也可催反向反应，将醇氧化为相应的酮或醛；这些反应需要辅助因子的存在，如NADH、NADPH、NAD或NADP。其中NADH、NADPH作为电子供体，NAD、NADP作为电子受体。在工业上，羰基还原酶已被越来越多的用于还原各类酮产生相应的手性醇；催化形式既可以是全细胞，也可以是纯化过的酶。从实际成本的角度考虑，羰基还原酶在应用于酮还原反应时，往往会涉及到一个辅酶再生系统，如利用葡萄糖脱氢酶(GDH)或甲酸脱氢酶(FDH)进行辅助因子(NADH或NADPH)的再生，从而显著减少辅助因子的用量。 根据底物特异性和酶的动力学参数，羰基还原酶主要分为醛酮还原酶家族、短链脱氢酶家族和中链脱氢酶家族。鉴于有机合成反应中化合物的多样性及反应环境的复杂性，有必要找到更多热稳定较好的羰基还原酶。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种重组耐热短链脱氢酶基因、基因编码酶、重组载体、工程菌及基因编码酶在制备光学手性醇中的应用。本专利技术采用的技术方案是一种重组耐热短链脱氢酶基因，所述重组耐热短链脱氢酶基因具有与SEQ IDNo. I所示核苷酸序列90%以上同源性，优选所述基因核苷酸序列为SEQ ID No. I所示，所述重组耐热短链脱氢酶基因还包括SEQ ID No. I所示核苷酸序列经过一个或几个核苷酸序列取代、缺失或添加获得的核苷酸序列。进一步，SEQ ID No. I所示核苷酸序列全长为747bp，其编码序列从第一个碱基起至第744碱基止，起始密码子为ATG，终止密码子为TAG，该序列无内含子。所述SEQ ID No. I所示核苷酸序列为atgggcttca aagataaagt ggttgtggtt accggctctg gtcgtggcat tggtcgcagt 60atcgccaaaa tgtatgcaga acatggtgcg aaagtggtta tcgcggatcg taactttcag 120gaagccctgg aaacggaacg cctgatttct gaagaaggcg gtgaagccat ggcagtgctg 180gcggatgtta gtaaaccgga agatgtgatc aacctgatgg aaaaaatcga aaaaagctat 240ggccgtctgg atattctgat caacaatgcc ggctttggtt gctggaaaag cccgtacgat 300ctgaccgtgg aagaatggga ttctgttatc aacaccaatc tgcgtggcac gttcctgtgt 360agccgcgaag cggccaaaat tatgaaaaaa ggcggtggcg gtgcaattgt gaacatcgcc 420agtacccgcg caatcatgag cgaaccgaat agcgaatctt atgcagcgtc taaaggtggt 480atcctggcac tgacgcacgc actggcaatt agtctgggtc cggatcgtat tcgcgttaac 540gcaatcagcc cgggctggat tgaaaccggt gaatacgaaa aactgcgtga aatcgatcat 600ctgcagcacc cggcaggtcg tgtgggtaaa ccggaagtaa ttgcacgcgc gtgcctgttt 660ctgaccgcag aagaaaacag cttcatcacg ggtgcgaatc tggttattga tggcggtatg 720acccggaaga tgatttatga accatag747本专利技术提供一种由所述重组耐热短链脱氢酶基因编码的重组耐热短链脱氢酶。进一步，所述重组耐热短链脱氢酶具有与SEQ ID No. 2所示的氨基酸序列90%以上的同源性，优选所述重组耐热短链脱氢酶的氨基酸序列为SEQ ID No. 2所示。由于密码子的兼并性，编码SEQ ID No. 2的氨基酸序列的碱基序列不仅仅局限于SEQ IDNo. 1，如不同于SEQ ID No. 1，但编码的氨基酸序列与SEQ ID No. I所编码的氨基·酸序列相同的核苷酸序列；或者是在保持由该重组耐热短链脱氢酶催化活性的前提下，由插入、缺失或替换如序列表中SEQ. ID NO :2所示的氨基酸序列中至少一个氨基酸而得到的变异的氨基酸序列。所述氨基酸序列SEQ. ID NO :2为Met Gly Phe Lys Asp Lys Val Val Val Val Thr Gly SerI5 10Gly Arg Gly lie Gly Arg Ser lie Ala Lys Met Tyr Ala1520 25Glu His Gly Ala Lys Val Val lie Ala Asp Arg Asn Phe3035Gln Glu Ala Leu Glu Thr Glu Arg Leu lie Ser Glu Glu4045 50Gly Gly Glu Ala Met Ala Val Leu Ala Asp Val Ser Lys5560 65Pro Glu Asp Val lie Asn Leu Met Glu Lys lie Glu Lys7075Ser Tyr Gly Arg Leu Asp lie Leu lie Asn Asn Ala Gly8085 90Phe Gly Cys Trp Lys Ser Pro Tyr Asp Leu Thr Val Glu95100Glu Trp Asp Ser Val lie Asn Thr Asn Leu Arg Gly Thr105110 115Phe Leu Cys Ser Arg Glu Ala Ala Lys lie Met Lys Lys120125 130Gly Gly Gly Gly Ala lie Val Asn lie Ala Ser Thr Arg135140Ala lie Met Ser Glu Pro Asn Ser Glu Ser Tyr Ala Ala145150 155Ser Lys Gly Gly lie Leu Ala Leu Thr His Ala Leu Ala160165He Ser Leu Gly Pro Asp Arg He Arg Val Asn Ala He170175180Ser Pro Gly Trp He Glu Thr Gly Glu Tyr Glu Lys Leu185190195Arg Glu He Asp His Leu Gln His Pro Ala Gly Arg Val200205Gly Lys Pro Glu Asp He Ala Arg Ala Cys Leu Phe Leu 210215220Thr Ala Glu Glu Asn Ser Phe He Thr Gly Ala Asn Le本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种重组耐热短链脱氢酶基因，其特征在于所述基因具有与SEQ?ID?No.1所示核苷酸序列90%以上同源性。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈振明，赖敦岳，周硕，
申请(专利权)人：杭州师范大学，
类型：发明
国别省市：
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