突变型还原酶制造技术

本发明专利技术提供包含这样的氨基酸序列并且具有良好的热稳定性的还原酶及其他，在所述氨基酸序列中，野生型还原酶的氨基酸序列中的特定氨基酸被其他特定的氨基酸置换。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及突变型还原酶及其他。
技术介绍
本专利技术涉及修饰的还原酶(其是具有使底物还原的能力的酶)、编码其的多核苷酸及其应用，所述还原酶可以用于还原反应，尤其是用于α-酮酸的还原反应。还原酶具有使底物还原的能力，并且近年来，其已经用于生产例如用作药物或农药的活性成分的化合物、或其中间体、并且特别是光学活性化合物或其中间体的有机合成反应。作为这样的还原酶，例如，包含SEQ ID NO 1的氨基酸序列且具有使底物还原的能力的酶(野生型还原酶)是已知的(例如，参见ΕΡ1762625Α1)。 这样的还原酶，在工业上用于生产光学活性化合物或其中间体等，其需要具有下述特性在使用该酶的还原反应中反应产物的光学纯度高，该酶对底物的绝对构型具有高识别能力，并且该酶在诸如温度、pH、溶剂和压力的各种反应条件下具有高稳定性。特别地，如果还原酶具有针对温度的高稳定性(即，热稳定性)，则升高反应温度将是可能的。因此，高的热稳定性可以不仅引起反应速率升高而且减少反应过程中还原酶的失活(例如，参见Applied Microbiology Biotechnology,80,805-812(2008))。
技术实现思路
在这样的情形中，强烈需要研发具有良好的热稳定性的还原酶以便缩短反应时间并且提闻反应效率。本专利技术提供还原酶，所述还原酶包含在特定的野生型还原酶的氨基酸序列中特定的氨基酸用不同的特定氨基酸置换的氨基酸序列并且具有良好的热稳定性(即，修饰的还原酶)。具体地，本专利技术提供下述I)至41)。I)酶，所述酶包含除了在SEQ ID NO :I的氨基酸序列中具有一个或多个氨基酸突变之外与SEQ ID NO: I的氨基酸序列等价的氨基酸序列，其中所述一个或多个氨基酸突变包括下述氨基酸突变位置56的甘氨酸被半胱氨酸置换的氨基酸突变，位置115的缬氨酸被异亮氨酸置换的氨基酸突变，位置27的色氨酸被精氨酸置换的氨基酸突变，位置42的组氨酸被亮氨酸置换的氨基酸突变，或位置25的苏氨酸被丝氨酸置换的氨基酸突变；并且所述酶具有使底物还原的能力；2)酶，所述酶包含除了在SEQ ID NO :I的氨基酸序列中具有一个或多个氨基酸突变之外与SEQ ID NO: I的氨基酸序列等价的氨基酸序列，其中所述一个或多个氨基酸突变包括位置56的甘氨酸被半胱氨酸置换的氨基酸突变；并且所述酶具有使底物还原的能力(以下在一些情形中还称为本专利技术的酶I)；3)根据上述2)所述的酶，其中所述一个或多个氨基酸突变还包括位置115的缬氨酸被异亮氨酸置换的氨基酸突变；4)根据上述2)或3)所述的酶，其中所述一个或多个氨基酸突变还包括位置27的色氨酸被精氨酸置换的氨基酸突变；5)根据上述2)至4)中任一项所述的酶，其中所述一个或多个氨基酸突变还包括位置42的组氨酸被亮氨酸置换的氨基酸突变；6)根据上述2)至5)中任一项所述的酶，其中所述一个或多个氨基酸突变还包括位置25的苏氨酸被丝氨酸置换的氨基酸突变；7)根据上述2)所述的酶，其中所述一个或多个氨基酸突变选自下述氨基酸突变组I :〈氨基酸突变组I> (1-1)下述两个氨基酸突变(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置换的氨基酸突变和(b)位置115的缬氨酸被异亮氨酸置换的氨基酸突变；(1-2)下述两个氨基酸突变(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置换的氨基酸突变和(b)位置27的色氨酸被精氨酸置换的氨基酸突变；(1-3)下述两个氨基酸突变(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置换的氨基酸突变和(b)位置42的组氨酸被亮氨酸置换的氨基酸突变；(1-4)下述两个氨基酸突变(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置换的氨基酸突变和(b)位置25的苏氨酸被丝氨酸置换的氨基酸突变；(1-5)下述三个氨基酸突变(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置换的氨基酸突变，(b)位置115的缬氨酸被异亮氨酸置换的氨基酸突变，和(c)位置27的色氨酸被精氨酸置换的氨基酸突变；(1-6)下述三个氨基酸突变(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置换的氨基酸突变，(b)位置115的缬氨酸被异亮氨酸置换的氨基酸突变，和(c)位置42的组氨酸被亮氨酸置换的氨基酸突变；(1-7)下述三个氨基酸突变(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置换的氨基酸突变，(b)位置115的缬氨酸被异亮氨酸置换的氨基酸突变，和(c)位置25的苏氨酸被丝氨酸置换的氨基酸突变；(1-8)下述三个氨基酸突变(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置换的氨基酸突变，(b)位置27的色氨酸被精氨酸置换的氨基酸突变，和(c)位置42的组氨酸被亮氨酸置换的氨基酸突变；(1-9)下述三个氨基酸突变(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置换的氨基酸突变，(b)位置27的色氨酸被精氨酸置换的氨基酸突变，和(c)位置25的苏氨酸被丝氨酸置换的氨基酸突变；(1-10)下述三个氨基酸突变(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置换的氨基酸突变，(b)位置42的组氨酸被亮氨酸置换的氨基酸突变，和(c)位置25的苏氨酸被丝氨酸置换的氨基酸突变；(1-11)下述四个氨基酸突变(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置换的氨基酸突变，(b)位置115的缬氨酸被异亮氨酸置换的氨基酸突变，(c)位置27的色氨酸被精氨酸置换的氨基酸突变，和(d)位置42的组氨酸被亮氨酸置换的氨基酸突变；(1-12)下述四个氨基酸突变(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置换的氨基酸突变，(b)位置115的缬氨酸被异亮氨酸置换的氨基酸突变，(c)位置27的色氨酸被精氨酸置换的氨基酸突变，和(d)位置25的苏氨酸被丝氨酸置换的氨基酸突变；(1-13)下述四个氨基酸突变(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置换的氨基酸突变，(b)位置115的缬氨酸被异亮氨酸置换的氨基酸突变，(c)位置42的组氨酸被亮氨酸置换的氨基酸突变，和(d)位置25的苏氨酸被丝氨酸置换的氨基酸突变；(1-14)下述四个氨基酸突变(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置换的氨基酸突变，(b)位置27的色氨酸被精氨酸置换的氨基酸突变，(c)位置42的组氨酸被亮氨酸置换的氨基酸突变，和(d)位置25的苏氨酸被丝氨酸置换的氨基酸突变；和 (1-15)下述五个氨基酸突变(a)位置56的甘氨酸被半胱氨酸置换的氨基酸突变，(b)位置115的缬氨酸被异亮氨酸置换的氨基酸突变，(c)位置27的色氨酸被精氨酸置换的氨基酸突变，(d)位置42的组氨酸被亮氨酸置换的氨基酸突变，和(e)位置25的苏氨酸被丝氨酸置换的氨基酸突变；8)包含编码上述2)至7)中任一项所述的酶的氨基酸序列的核苷酸序列的多核苷酸(以下在一些情形中还称为本专利技术的多核苷酸I)；9)酶，所述酶包含除了在SEQ ID NO :I的氨基酸序列中具有一个或多个氨基酸突变之外与SEQ ID NO: I的氨基酸序列等价的氨基酸序列，其中所述一个或多个氨基酸突变包括位置115的缬氨酸被异亮氨酸置换的氨基酸突变，但不包括位置56的甘氨酸被半胱氨酸置换的氨基酸突变；并且所述酶具有使底物还原的能力(以下在一些情形中还称为本专利技术的酶2)；10)根据上述9)所述的酶，其中所述一个或多个氨基酸突变还包括位置27的色氨酸被精氨酸置换的氨基酸突变；11)根据上述9)或10)所述的酶，其中所述一个或多个氨基酸突变还包括位置42的组氨酸被本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：朝子弘之，
申请(专利权)人：住友化学株式会社，
类型：
国别省市：