突变Δ9延伸酶和它们在制备多不饱和脂肪酸中的用途制造技术

本文公开了具有将亚油酸[18:2，LA]转化成二十碳二烯酸[20:2，EDA]和/或将α-亚麻酸[18:3，ALA]转化成二十碳三烯酸[20:3，ETrA]的能力的突变Δ9延伸酶。本文还公开了分离的核酸片段和包含编码突变Δ9延伸酶的此类片段的重组构建体，以及用这些突变Δ9延伸酶在含油酵母中制备长链多不饱和脂肪酸[“PUFA”]的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于生物
更具体地，本专利技术涉及对编码突变Λ9脂肪酸延伸酶的多核苷酸序列的创建以及这些延伸酶在制备长链多不饱和脂肪酸[“PUFA”]中的用途。
技术介绍
人们正研究包括植物、藻类、真菌、原生藻菌和酵母在内的多种不同宿主作为商业化多不饱和脂肪酸[“PUFA”]生产的手段。基因工程已表明，一些宿主(即使那些天然限于亚麻酸[“υν”；18:2Ω-6]和α-亚麻酸[“ALA” ； 18:3 ω-3]脂肪酸生产的宿主)可进行实质上的改造以产生对多种长链《-3/co-6PUFA的高水平生产。无论这是天然能力还是重组技术的结果，花生四烯酸[“ARA”;20:4gj-6]、二十碳五烯酸[“ΕΡΑ”;20:5ω-3]、二十二碳五烯酸[“DPA”;22:5gj-3]和二十二碳六烯酸[“DHA”;22:6co-3]可能均需要Λ 9延伸酶基因的表达。特化的Λ 9延伸酶具有将LA转化成二十碳二烯酸[“EDA”;20:2 ω -6]，以及将ALA转化成二十碳三烯酸[“ETrA”；20:3co-3]的能力。然而，仅仅鉴定出少量的Λ9延伸酶。这些酶包括来自绿光等鞭金藻(Isochrysis g本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.08.26 US 61/377,2481.分离的多核苷酸，包含: (a)编码突变多肽的核苷酸序列，所述突变多肽具有Λ9延伸酶活性且具有如SEQ IDNO: 22所示的氨基酸序列，其中SEQ ID NO: 22与SEQ ID NO: 10具有至少一个氨基酸突变的差异，所述突变选自: i)L35F突变； ii)L35M突变； iii)L35G突变； iV) L35G突变和至少一种选自下列的其它突变:S9A、S9D、S9G、S91、S9K、S9Q、Q12K、A21D、A21T、A21V、V32F、Y84C、Q107E、L108G、G127L、W132T、M143N、M143W、L161T、L161Y、W168G、1179M、1179R、C236N、Q244N、A254W 和 A254Y ；v)L35G、A21V、L108G和 I179R 突变；vi)L35G、W132T和 1179 突变；vii)L35G、S9D、Y84C和 I179R 突变；viii)L35G、Y84C、I179R和 Q244N 突变；ix)L35G、A21V、W132T、I179R和 Q244N 突变；x)K58R 和 I257T 突变； xi)D98G突变； xii)L130M和V243A突变；以及 i)包含至少两种突变的任何组合，其中所述突变选自:K58R、L35F、L35G、L35M、S9A、S9D、S9G、S91、S9K、S9Q、Q12K、A21D、A21T、A21V、V32F、Y84C、D98G、Q107E、L108G、G127L、L130M、W132T、M143N、M143W、L161T、L161Y、W168G、I179M、I179R、C236N、V243A、Q244N、A254W.A254Y 和 I257T ； (b)部分(a)的核苷酸序列的互补序列，其中所述互补序列和所述核苷酸序列由相同数量的核苷酸组成且是100%互补的。2.根据权利要求1所述的分离的多核苷酸，其中所述核苷酸序列选自:SEQID NO:28、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34,SEQ ID NO:37,SEQ ID NO:40,SEQ ID NO:58,SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO: 100, SEQ IDNO:103、SEQ ID NO:106 和 SEQ ID NO:109。3.具有Λ9延伸酶活性的突变多肽，所述突变多肽由权利要求1的分离的多核苷酸编码。4.根据权利要求3所述的突变多肽，其中蛋白质序列选自:SEQID NO:29, SEQ IDNO:32,SEQ ID NO:35,SEQ ID NO:38,SEQ ID NO:41,SEQ ID NO:59,SEQ ID NO:62,SEQ IDNO:87,SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:107 和 SEQ ID NO:110。5.根据权利要求3或4中任一项所述的突变多肽，其中所述Λ9延伸酶活性至少大致在功能上等同于如SEQ ID NO: 10所示的多肽的Λ9延伸酶活性。6.根据权利要求5所述的突变多肽，其中当与如SEQID NO: 10所示的多肽的亚油酸向二十碳二烯酸的底物转化百分比相比时，所述突变多肽的亚油酸向二十碳二烯酸的底物转化百分比为至少110%。7.根据权利要求6所述的突变多肽，其中当与如SEQID NO: 10所示的多肽的亚油酸向二十碳二烯酸的底物转化百分比相比时，所述突变多肽的亚油酸向二十碳二烯酸的底物转化百分比为至少120%。8.重组构建体，包含权利要求1的分离的多核苷酸，所述重组构建体可操作地连接至少一种调控序列。9.转化的细胞，包含权利要求1的分离的多核苷酸。10.根据权利要求9所述的转化的细胞，其中所述细胞选自:植物、细菌、酵母、藻类、类眼虫、原生藻菌、卵菌和真菌。11.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：MW博斯蒂克，H何，Y李，Q朱，
申请(专利权)人：纳幕尔杜邦公司，
类型：
国别省市：