猪肉及其制品中弓形虫RT-LAMP快速检测方法技术

本发明专利技术公布了一种猪肉及其制品中弓形虫RT-LAMP快速检测方法。现有技术中检测时间长且繁琐，工作量大，很难适应现代化食品安全快速检测的需要。本发明专利技术取样加入Trizol试剂，离心取上清液加入200?l氯仿，充分混合离心后取上清液，加入与该上清液等体积的异丙醇，离心后加入1ml体积含量为75%的乙醇，离心后干燥沉淀物，加入20?lRNase-free水溶解沉淀物，得到RNA提取物；将RT-LAMP扩增反应体灭活BstDNA聚合酶，得到扩增产物；加入1μL的SYBRGreenⅠ染料，或于2.0%琼脂糖凝胶上进行电泳，观察结果。本发明专利技术具有较高的特异性和灵敏度，且避免假阳性的出现。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
,涉及一种快速检测肉制品中弓形虫(7 gondii)的逆转录环介导等温扩增技术(Reverse Transcription Loop-Mediated IsothermalAmplification, RT-LAMP)检测方法，具体涉及一种猪肉及其制品中弓形虫RT-LAMP快速检测方法。
技术介绍
弓形虫病(toxoplasmosis)由刚地弓形虫)引起的一种人畜共患病，弓形虫病不仅给养猪业造成巨大损失，还严重威胁着人类的食品卫生安全和人类健康。猪肉是人们生活中最主要的动物性食品来源，人群可通过携带弓形虫的猪肉、肝脏等 动物源性产品而感染，猪弓形虫病的高发严重威胁着人类健康，对公共食品安全造成极大危害，目前，弓形虫的检测主要依靠血清学、病原形态鉴定等传统方法，然而，这些检测方法都有不足之处，如检测时间长，检测程序繁琐，工作量大，很难适应现代化食品安全快速检测的需要，严格的病原体检测是保障食品安全的重要环节，因此亟需建立一种操作简便、快速准确、灵敏度和特异性都较高的现代化检测弓形虫方法。逆转录环介导等温扩增技术(ReverseTranscription Lo本文档来自技高网...

【技术保护点】
猪肉及其制品中弓形虫RT？LAMP快速检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤：步骤(1).样品前处理猪肉及其制品取样25g，加入10倍猪肉及其制品体积的灭菌蒸馏水中，用组织匀浆机均质1？min，制成组织匀浆样品；步骤(2).弓形虫RNA提取取组织匀浆样品转移到离心管后，加入Trizol试剂，其中组织匀浆样品与Trizol试剂的体积含量比为1:10，常温静置5min；在转速12000rpm，温度为4？℃条件下离心5？min，取上清液至新的离心管中，加入200？μl氯仿，盖上离心管盖，充分混合至溶液呈乳白状后，常温静置5min；在转速12000rpm，温度为4？℃条件下离心10？min，取上清液至...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：曲道峰，韩剑众，陶斯悦，郑柏玲，苏春雷，杜爱芳，池娜，
申请(专利权)人：浙江工商大学，
类型：发明
国别省市：