?本发明专利技术公开了一种甲型肝炎病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒，包括：盒体、样品稀释液和检测试纸，所述检测试纸由塑料支撑板、上样垫、标记甲型肝炎病毒特异性的抗原VP1的胶体金垫、硝酸纤维素NC膜、检测线T1、T2、质控C线和吸样垫，且位于盒体内。本试剂盒检测样品血清中IgM和IgG同时为阳性的样本结果和ELISA试剂完全一致，无显著性差异，适合用于临床检测；但成本低廉，制备工艺简单，具有实用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及甲型肝炎病毒的检测，具体是ー种甲型肝炎病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
甲型肝炎(hepatitis A，简称HA)的病原体是甲型肝炎病毒(HAV)，为直径27nm的小RNA病毒(picornavirus)。病毒存在于病人的粪便、血清、胆汁与肝细胞浆中，在体外抵抗力強，60°C加热4小时不死；能耐受pH 3. O的环境；在低温下能长期存活。实验证明，HAV对こ醚、60°C加热I小时及pH3的作用均有相対的抵抗力(在4°C可存活数月)。但加热100°C 5分钟呈用甲醛溶液、氯等处理，可使之灭活。非离子型去垢剂不破坏病毒的传染性。·甲型肝炎病毒主要通过粪-ロ途径传播，传染源多为病人。甲型肝炎的潜伏期为15 45天，病毒常在患者转氨酸升高前的5 6天就存在于患者的血液和粪便中。发病2 3周后，随着血清中特异性抗体的产生，血液和粪便的传染性也逐渐消失。HAV随患者粪便排出体外，通过污染水源、食物、海产品(如毛蚶等)、食具等的传播可造成散发性流行或大流行。也可通过输血或注射方式传播。感染后血清中抗-HAV IGM抗体很快出现，在两周左右达高峰，然后逐渐下降，在8周之内消失，是HAV急性感染和近期感染的血清学证据；抗-HAV IgG抗体产生较晚，在急性期后期和恢复期早期出现(IgM开始下降吋，IgG逐渐上升)属保护性抗体，在恢复期达高峰，可持久存在，可保护人体不再次感染，对甲肝流行病学调查、健康体检、了解易感人群有重要意义。目前对甲型肝炎病毒检测的主要方法是甲型肝炎病毒特异性抗体检测。检测甲型肝炎病毒IGM判定是否为现症感染，检测IgG判定是否曾经感染过，免于再次感染。检测两种抗体有利于对被检对象的进行全面的判定。目前甲型肝炎病毒抗体的检测方法主要是RIA、ELISA等检测方法。在胶体金的检测方法中,有单独检测甲型肝炎病毒IgM或IgG的报道，但用胶体金类免疫层析技术同时检测甲型肝炎病毒IgM和IgG抗体的检测试剂盒未见报道。和用两种试剂分别检测IgM和IgG抗体相比，同时检测IgM和IgG抗体能减少检测人员的工作量，节约成本；同时减少采血量，減少患者的痛苦。免疫层析胶体金技术是新型的诊断技术，在抗体检测方面己得到较为广泛运用，基本原理如下利用胶体金标记ー种抗原或抗体，在试剂的NC膜上包被相应的配对抗原或抗体，检测时当样品中含相应的特异性抗体或抗原时，胶体金标记颗粒和样品中配体相结合形成复合物，然后在NC膜上层析，再被包被抗原或抗体捕获，形成肉眼可见的检测T线，通过检测线的有无实现对结果的判定。具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性强、适合现场检测和经济实用等优点。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述问题和缺陷，本专利技术的目的是提供一种甲型肝炎病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒，以实现快速定性检测血清样本中的甲型肝炎病毒。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下 一种甲型肝炎病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒，包括盒体、样品稀释液和检测试纸，所述检测试纸由塑料支撑板、上样垫、标记甲型肝炎病毒特异性的抗原VPl的胶体金垫、硝酸纤维素NC膜、检测线Tl、T2、质控C线和吸样垫，且位于盒体内；其中 所述塑料支撑板一端粘贴所述上样垫，所述上样垫的一端紧密压接含有标记甲型肝炎病毒特异性的抗原VPl的胶体金垫，胶体金垫一端紧密压接硝酸纤维素NC膜，硝酸纤维素NC膜包被有相互分离的检测线Tl、检测线T2和质控C线，所述检测线Tl为包被在硝酸纤维素NC膜上的抗人IgM抗体，检测线为包被在硝酸纤维素NC膜上的抗人IgG抗体，所述质控C线为包被在硝酸纤维素NC膜上的抗甲型肝炎病毒VPl抗体，硝酸纤维素NC膜的另ー·端连接吸样垫形成试纸；其中所述的IgM和IgG抗体浓度为l(Tl5ug/mL ； 所述标本稀释液为含磷酸钠、磷酸氢钠及氯化钠的混合水溶液。作为ー种优选方案，所述的抗原甲型肝炎病毒特异性的主要抗原中VPl抗原，所述VPl抗原可以利用基因工程重组表达或在培养病毒中纯化。作为ー种优选方案，所述上样垫为玻璃纤维膜或无纺布，所述吸样垫由吸水滤纸组成。作为ー种优选方案，所述的VPl抗原的包被方法为以O. OlM pH 7. 2磷酸盐缓冲液(PBS)将抗人IgM抗体配制成I 2mg/mL的溶液，以O. OlM pH7. 2磷酸盐缓冲液(PBS)将抗人IgG抗体配制成I 2mg/mL的溶液,用喷膜仪在NC膜下部以I I. 5ul/cm的參数进行划线，包被检测线Tl和T2，同时在硝酸纤维素NC膜上部包被抗甲型肝炎病毒VPl抗体作为质控C线，划线后将NC膜在干燥间，温度20-25°C，湿度小于30%，干燥2_7小吋。作为ー种优选方案，所述标记甲型肝炎病毒特异性的抗原VPl的胶体金垫的制备方法为以氯金酸ー朽1檬酸三钠还原法制备直径为30 50nm的胶体金溶液,制备完成后取IOOmL胶体金液放在烧杯内，用O. 2M K2CO3调至pH8. 5，按IOOmL胶体金溶液加入O. 5 2mg甲型肝炎病毒VPl抗原，室温搅拌2小时，加入1%牛血清白蛋白BSA，1%聚こニ醇PEG20000封闭20min，12000r/m离心30分钟，弃上清，用胶体金工作液复溶至IOOmL,按ImL溶液铺20cm2的比例均匀地铺在玻璃纤维膜或无纺布上，再置干燥间，温度20 25°C，湿度小于30%，干燥2 7小时，制成胶体金垫。作为ー种优选方案，所述检测试纸的装配方法为在干燥室内，温度20 25°C，湿度小于40%，取塑料支撑板板，将己包被的硝酸纤维素NC膜放置在塑料支撑板的中部粘贴，在硝酸纤维素NC膜检测T线ー侧搭接胶体金垫(搭胶体金垫的1/3)粘贴，在胶体金垫另ー侧搭接粘贴上样垫，搭胶体金垫的1/5 ;在硝酸纤维素NC膜质检C线ー侧搭接吸样垫，搭吸样垫的1/10 ;最后用裁剪机将贴好塑料板切成2 5_宽的试纸条，切好的试纸条再装入盒体内，形成检测试剂盒。作为ー种优选方案，上述的甲型肝炎病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒的检测方法为将被检血清或血浆平衡至室温，将试纸条平放，在上样垫上加入5 20uL被检样品，再加入50 IOOuL的样品稀释液，使胶体金溶解并在NC膜上层析，然后用肉眼直接观察在15分钟内C、T1、T2线的出现情况，并判定检测結果。与现有技术相比，本专利技术提供的利用免疫层析胶体金技术检测甲型肝炎病毒IgM为和IgG抗体的新型试剂盒，采用胶体金标记甲型肝炎病毒特异性抗原，包被抗人IgM和IgG抗体实现对血液中抗甲型肝炎病毒抗体的检测，一次检测获得两种检测指标，节约时间和成本，减轻患者的痛苦；实验结果表明，本专利技术提供的试剂盒与ELISA检测试剂产品结果一致(p>0. 05)，具有操作简便、反应快速、敏感性高、特异性強、适合现场检测和经济实用等优点。具体实施方式 以下结合具体实施例，进ー步阐明本专利技术。应理解，下述实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。比例和百分比基于重量，除非特别说明。实施例 I主要材料 1.1甲型肝炎病毒特异性VPl抗原、VPl抗体深圳市菲鹏生物股份有限公司产品本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种甲型肝炎病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒，包括：盒体、样品稀释液和检测试纸，所述检测试纸由塑料支撑板、上样垫、标记甲型肝炎病毒特异性的抗原VP1的胶体金垫、硝酸纤维素NC膜、检测线T1、T2、质控C线和吸样垫，且位于盒体内；其特征在于：所述塑料支撑板一端粘贴所述上样垫，所述上样垫的一端紧密压接含有标记甲型肝炎病毒特异性的抗原VP1的胶体金垫，胶体金垫一端紧密压接硝酸纤维素NC膜，硝酸纤维素NC膜包被有相互分离的检测线T1、检测线T2和质控C线，所述检测线T1为包被在硝酸纤维素NC膜上的抗人IgM抗体，检测线为包被在硝酸纤维素NC膜上的抗人IgG抗体，所述质控C线为包被在硝酸纤维素NC膜上的抗甲型肝炎病毒VP1抗体，硝酸纤维素NC膜的另一端连接吸样垫形成试纸；其中所述的IgM和IgG抗体浓度为10~15ug/mL；所述标本稀释液为含磷酸钠、磷酸氢钠及氯化钠的混合水溶液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：吴克，史晋，刘昊智，鲍路伟，王文灏，程超，张爱晖，
申请(专利权)人：上海博沃生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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