本发明专利技术涉及一种测定包含人肺癌细胞的生物样品是否对表皮生长因子受体抑制剂和化学治疗剂的组合敏感的方法，所述方法通过测定磷酸化的AKT蛋白和/或磷酸化的MAPK蛋白在生物样品中的过量表达而进行。本发明专利技术还涉及用于获得候选药剂或者用于选择抑制患者肺癌发展的组合物的方法，其中应用磷酸化的Akt蛋白和/或磷酸化的MAPK蛋白。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测包含人肺癌细胞的生物样品是否对表皮生长因子受体抑制剂和化学治疗剂的组合敏感的方法，所述方法通过测定磷酸化的AKT蛋白和/或磷酸化的MAPK蛋白在生物样品中的过量表达而进行。本专利技术还涉及获得候选药剂或者选择在患者中用于抑制肺癌进展的组合物的方法，在所述方法中使用磷酸化的Akt蛋白和/或磷酸化的MAPK蛋白。
技术介绍
由erbBl基因编码的EGFR已经以因果方式涉及人类恶性肿瘤。特别地，已经在乳腺癌、膀胱癌、肺癌、头癌、颈癌和胃癌以及成胶质细胞瘤中观察到增加的EGFR表达。表皮生长因子受体(EGFR)，一种170-kD的糖蛋白，由N端细胞外结构域、疏水跨膜结构域和包含激酶结构域的C端细胞内区域组成。EGFR配体-诱导的二聚体化作用激活内部的RTK结构域(一种Src同源结构域1，SHl)，这引起在细胞质结构域非催化尾的6个特异EGFR酪氨酸残基的自动磷酸化作用。癌细胞中EGFR激活的细胞作用包括增加的增殖、促进细胞运动、黏附、侵入、血管发生、以及通过抑制细胞程序性死亡而增加的细胞存活。激活的EGFR通过刺激促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联反应而诱导肿瘤细胞增殖。一旦配体结合到EGFR上时，SOS鸟嘌呤核苷酸交换因子就通过Grb2连接蛋白补充到质膜上，其在小G蛋白Ras上刺激GTP交换成⑶P，随后激活由Raf、MEK和ERK组成的MAPK级联反应。激活的ERKs (pMAPK, pERKl/2)又磷酸化并且激活转录因子，诸如ELK-I或c-Myc，从而促进细胞生长。多种生长因子途径通过多种激酶的激活而促进NSCLC细胞的发展和存活。EGFR还经由通过磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K) /Akt途径和STAT途径进行信号传导而增强癌细胞的存活。Akt还通过其它生长因子激活，包括胰岛素生长因子-I、碱性成纤维细胞生长因子以及白细胞介素3和6。Akt的3个同种型1-3都是以相似的方式在活化结构域的残基T308和COOH-末端结构域的S473被磷酸化(pAKT)。Erlotinib (Tarceva·是一种有效的表皮生长因子受体(HER1/EGFR)酪氨酸-激酶抑制剂(TKI)，当用作单独的药剂时，其为先前化学治疗失败的非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer, NSCLC)患者提供生存益处(W0 01/34574)。Tarceva^A功效在许多试验中进行研究。它的化学名为N-(3-乙块基苯基)-6, 7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺。TALENT试验是在一线NSCLC患者中进行的安慰剂-对照的III期研究，所述患者接受吉西他滨和顺钼(这种同时的化学治疗是非美国护理标准(non-US standard ofcare)的)组合erlotinib (Tarceva 1150mg/天)或者组合安慰剂。初级目的是存活持续时间，次级目的是发展时间、反应率；反应的持续时间；药物动力学和药效参数，以及生活质量。还评估了 HER1/EGFR和HER2表达率。进行了标准的安全性分析。TALENT试验总的结果是阴性的。对于初级和次级目的，与单独的吉西他滨和顺钼相比，erlotinib (Tarceva·加化学疗法(吉西他滨和顺钼)不存在明显的益处(Gatzemeier, U.,等·，Proc Am SocClin Oncol 23 (2004)617 (Abstract 7010))。在使用 erlotinib 加卡钼和紫杉醇的基于美国的TRIBUTE研究中观察到相同的结果(Herbst, R. S.，等.，J Clin Oncol (2004) ASCOAnnual Meeting Proceedings. Post-Meeting Edition ；22 (July 15 Suppl.) (Abstract7011))。将单独的药剂erlotinib作为二线或三线治疗剂用于非小细胞肺癌(NSCLC)(BR. 21 ；NCIC/0SIP)的随机化安慰剂-对照的III期研究发现，与安慰剂(4. 7个月)相比，使用erlotinib在存活上有统计学显著的提高(6. 7个月)。许多研究涉及非小细胞肺癌中生物标记的研究以及它们与某些EGFR抑制剂药物的关系。Han，等·，Int J Cancer 113(2005) 109-115 用 Gefitinib (Iressa ，EGFRTKI)单一治疗研究了 65名患者。他们分析EGFR下游分子在化疗-抗性非小细胞肺癌中作为 gefitinib 的应答预见性标记。Cappuzzo, F.等·，JNCI 96 (2004) 1133-1141 用Gefitinibdressa ；EGFR TKI)单一治疗研究了 106名患者。他们在患有晚期非小细胞 肺癌的患者中研究Akt磷酸化作用和gefitinib的功效，并且发现接受gefitinib的具有P-Akt-阳性肿瘤的患者比患有P-Akt-阴性肿瘤的患者从所述治疗受益更多。Vicent,S.等.，Br J Cancer 90 (2004) 1047-1052研究了 111名NSCLC患者。他们发现在非小细胞肺癌中pERK被激活并且与晚期肿瘤相关。Han, S. W.等.，J Clin Oncol 23(2005)2493-2501用Gefitinib (EGFR TKI)单一治疗研究了 90名患者。他们分析表皮生长因子受体突变在用gefitinib治疗的非小细胞肺癌患者中的预见性和预后作用。Mukohara, T.等.，LungCancer 41 (2003) 123-130研究了 60名患者，每个阶段20名患者，其进行新佐剂化学治疗或者放射治疗。EGFR表达与pERK和pAkt表达相关。正如作者本身所提及的那样，样本的大小太小。Raben,D.等.，Int J Radiation Oncology Biol. Phys 59 (2004) 27-38 研究了对于非小细胞肺癌的靶向治疗。0ηο，Μ·等·，Μο1 Cancer Ther 3 (2004) 465-472 检验了 9 种 NSCLC细胞系，并且用 gefitinib 处理。Hirsch, F. R.等.，Curr Opin Oncol 17 (2005) 118-122 综述了 Akt和MAPK的磷酸化作用状况作为gefitinib抗性的潜在标记。Meert,等.,ClinicalCancer Research 9 (2003) 2316-2326 在 EGFR 抑制剂活性方面研究了 NSCLC 细胞系。EGFR和Her2表达水平都不与EGFR抑制剂的敏感性相关。Brognard, J.等·，Cell Death andDifferentiation 9 (2002) 893-904 分析了 19 株 NSCLC 细胞系，其中 17 株表现出 Erkl/2 磷酸化作用和组成型活性。David, 0.等·，Clinical Cancer Research 10 (2004) 6865-6871公开pAkt的过量表达是NSCLC中独立的预后因子。Kakiuchi, S.等.，Human MolecularGeneti本文档来自技高网...
【技术保护点】
特异性结合磷酸化的AKT蛋白或磷酸化的MAPK蛋白的试剂在制备用于通过确定磷酸化AKT蛋白和磷酸化MAPK蛋白在生物样品中过表达来确定包含人肺癌细胞的生物样品是否对表皮生长因子受体抑制剂和化学治疗剂的组合敏感的试剂盒中的应用，由此所述磷酸化AKT蛋白和磷酸化MAPK蛋白的过量表达是所述包含人肺癌细胞的生物样品对表皮生长因子受体抑制剂和化学治疗剂的组合敏感的指示，其中所述磷酸化的AKT蛋白是在与Akt1蛋白氨基酸位置473对应的氨基酸位置被磷酸化，和所述磷酸化的MAPK蛋白在与MAPK1的氨基酸位置202和204对应的氨基酸位置被磷酸化，其中所述磷酸化AKT蛋白和磷酸化MAPK蛋白在所述生物样品中的过量表达通过下列步骤测定：a)将所述生物样品进行免疫组织化学染色，b)在肉眼观察生物样品中细胞的染色后，对于所述磷酸化的AKT蛋白和磷酸化的MAPK蛋白的表达水平，指定一个选自数字1，2，3和4的等级，由此指定关于表达水平的最高可检测等级，c)确定在免疫组织化学染色的生物样品中具有最高可检测等级的细胞的百分比，d)将在免疫组织化学染色的生物样品中具有最高可检测等级的细胞的百分比乘以指定的等级并且乘以100，和e)当步骤d)的乘法结果高于100时，确定所述生物样品中磷酸化的MAPK蛋白过量表达，和当步骤d)的乘法结果高于300时，确定所述生物样品中磷酸化的AKT蛋白过量表达。...
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：乌尔里克·布伦沙伊特，阿斯特丽德·黑勒，韦雷娜·卢策，约阿希姆·默克斯，卡罗尔·沃德，
申请(专利权)人：霍夫曼拉罗奇有限公司，
类型：发明
国别省市：
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