本发明专利技术公开了一种重组腺病毒TMEM166作为基因治疗药物在抗肿瘤中的应用。本发明专利技术的重组腺病毒，是将人TMEM166基因的表达盒插入Ad5的基因组DNA中得到的重组腺病毒；所述人TMEM166基因的表达盒包括启动子、人TMEM166的cDNA和终止子。本发明专利技术的重组腺病毒TMEM166在体内和体外实验中均可明显的诱导肿瘤细胞发生自噬和凋亡，抑制肿瘤细胞的生长。并且重组腺病毒TMEM166对肿瘤化疗药物有很好的协同作用，本发明专利技术的重组腺病毒TMEM166可广泛用于多种肿瘤的基因治疗。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种重组腺病毒TMEM166作为基因治疗药物在抗肿瘤中的应用，特别涉及含有该重组腺病毒TMEM166的诱导肿瘤细胞自噬和凋亡，抑制肿瘤细胞生长的基因治疗药物，并且本专利技术还涉及该重组腺病毒TMEM166与化疗药物联合给药来制备抗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
生物体的一切生命活动，从出生、成长、衰老、到出现疾病直至死亡都与基因有夫，基因调控着细胞的各种功能。人们现在已经认识到肿瘤是基因异常的疾病，而恶性肿瘤发病率、死亡率较高，已经成为危害人类生命的第一、二位杀手。近年来，关于肿瘤治疗，基因治疗尤为引人注目，到目前为止提出了各种各样的基因治疗法，并进行了临床试验(例如 參见 Freeman SM, Whartenby KA, Freeman JL, Abboud CN, Marrogi AJ. In situ use ofsuicide genes for cancer therapy. Semin Oncol. 1996Feb ；23(1) :31-45.)。基因治疗是指将人的正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入人体靶细胞以纠正基因的缺陷或者发挥治疗作用，从而达到治疗疾病目的的生物医学新技木。目前，基因治疗领域存在的主要问题是有效性和安全性。事实上，自1995年以来，全世界基因治疗领域的科学家们在改善基因导入系统和载体方面作了大量的努力，新思路、新技术和新方法层出不穷。目前，在基因导入载体方面出现了两大主流一是非病毒载体系统；ニ是病毒载体系统。由于非病毒系统导入基因的效率相对较差，故在基因治疗临床试验中的使用率不到20% ;病毒载体在基因治疗领域的应用最为广泛，大约70%的治疗方案采用了病毒载体，包括各种逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒、痘病毒等。其中腺病毒载体是基因治疗中最常用的病毒载体，它具有包装容量较大、制备方便且易纯化和浓缩、宿主范围广、感染效率高等特点(例如參见Deng Hong-Xin, Tian Ling, WeiYu—Quan.しurrent status,problems and prospects in gene therapy. Chinese Bulletinof Life Sciences. 2005 ; 17 (3) 196-200 ；Kovesdi I, Brough D. E, Bruder J.T. andWickham T. J. Adenoviral vectors for gene transfer. Curr Opin Biotechnol,1997,8:583-589.)。广为人知的重组人p53腺病毒自1995年在美国批准进入临床试验，目前已有51项各种临床试验方案在世界各国实施，涉及到如肺癌、食管癌、乳腺癌、膀胱癌、脑瘤等多种类型的肿瘤治疗(例如參见Nie B, Shen Z, Wen J. B, Wong 0. G, Hsueh ff. D, HuoL.F, Kung H. F, Jiang B and Lin M. C. 2008. AAV-HGFK1 and Ad_p53 cocktail therapyprolongs survival of mice with colon cancer. Mol Cancer Ther 7 :2855-2865. ；Yoo,G. Η. , M. P. Piechocki, J. Oliver, F. Lonardo, L. Zumstein, H. S. Lin, H. Kim, T. Y. Shibuya,N. bhehadeh,and j. F. Ensley. Enhancement of Ad_p53 therapy with docetaxel in headand neck cancer. Laryngoscope,2004,114 1871-1879. ；Swisher, S. G. , and J. A. Roth.Clinical update of Ad_p53 gene therapy for lung cancer. Surg Oncol Clin N Am,2002，11 :521-535.)。程序性细胞死亡(programmed Cell Death, PO))是细胞的一种主动死亡过程，基于形态可以将P⑶分为两型，I型P⑶又称凋亡性细胞死亡，II型P⑶又称自噬性细胞死亡、例如參见 Levine B and Daniel Klionsky J. Development by self-digestion:molecular mechanisms and Diological functions of autophagy.Dev cell,2004,6(4)463-477 ；Xiang J, Chao DT, Korsmeyer SJ.BAX-induced cell death may not requireinterleukin I β -converting enzyme-like proteases. Proc Natl Acad Sci,1996,93 :14559-14563)自噬性细胞死亡与凋亡在生化指标、參与分子和机理方面均有密不可分的关系，在某些情况下可以相互拮抗或促进，可先后发生或同时共存于同一细胞(例如參见 Cuervo AM. Autophagy in sickness ana in health. Trends Cell Biol, 2004,14(2) :70-77 ；bhmtani T. Autophagy in health and disease a double-edged sword.Science, 2004，306 (5698) :990-995)。对自噬研究的不断深入，不仅进ー步掲示了真核生物自身调控的复杂性和多祥性，更为肿瘤的治疗提供了新的思路。大量研究表明，在多种人类肿瘤中存在有自噬活性的降低，其与肿瘤的发生、发展有密切的关系(例如參见Bertin b, Pierrefite-uarle Autopnagy and toll-like receptors a new link in cancercells. Autophagy. 2008 Nov 16 ；4(8) :1086-1089)。目前人们已经将干预肿瘤细胞自卩遼作为为抗肿瘤药物开发和检测肿瘤药物疗效的新靶点。本专利技术人利用突光素酶报告基因方法(例如參见Lorenz ffff,Longiaru M,CormierMJ. Isolation and expression of a cDNA encoding Renilla reniformis luciferase.Proc Natl Acad Sci USA. 1991 ;88 (10) :4438-42.)筛选出一个能够明显下调内參活性并且同时诱导细胞死亡的新基因TMEM166。通过TMEM166的表达，可以达到抑制肿瘤细胞生长的目的，同时为研制治疗癌症的重组腺病毒基因治疗药物奠定了基础。TMEM166是ー种定位于溶酶体和内质网的新型跨膜蛋白(例如參见Wang L.，Yu C，Lu Y, 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种重组腺病毒，其中所述重组腺病毒是将人TMEM166基因的表达盒插入Ad5的基因组DNA中得到的重组腺病毒；所述人TMEM166基因的表达盒包括启动子、人TMEM166的cDNA和终止子。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：马大龙，陈英玉，常莹，许冬，李艳军，郭金海，王峰，石太平，
申请(专利权)人：北京大学，北京诺赛基因组研究中心有限公司，
类型：发明
国别省市：
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