不溶性目标蛋白质的分离制造技术
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】不溶性目标蛋白质的分离本专利技术涉及从完整或破碎的宿主细胞的悬液中分离不溶性目标蛋白质的方法。本专利技术还涉及可通过所述方法获得的不溶性目标蛋白质。
技术介绍
之前已经开发了从宿主细胞(例如微生物细胞)的悬液和/或从 其他不纯物质中分离目标蛋白质的系统，因而这是现有技术知识。例如，参考利用色谱技术(如离子交换色谱或尺寸排阻色谱)纯化和分离可溶性目标蛋白质的标准蛋白质纯化方法(Guide to Protein Purification, Academic PressVol. 182，1990)。目前使用的其他技术为液-液相分离和超滤等(Guide to ProteinPurification,Academic Press Vol. 182,1990)。通过进行一些变化，可以改变这些基本的纯化方法以纯化科学或工业目的所需的大多数蛋白质，但是，它们一般成本非常高、复杂且耗时。特别地,在Huemmerich 等,Biochemistry 2004,43,13604-13612 中描述了专门处理丝蛋白的方法。该文献中的技术在目标蛋白质沉淀步骤之后进行利用宿主细胞蛋白质的热变性的技...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.03.31 US 61/319,5421.从完整或破碎的宿主细胞的悬液中分离不溶性目标蛋白质的方法，其包括以下步骤 a)提供包含不溶性目标蛋白质和不溶性宿主细胞部分的完整或破碎的宿主细胞的悬液， b)向所述悬液中加入至少一种碱的水溶液，其量足以破碎所述宿主细胞和/或溶解所述不溶性宿主细胞部分，以及 c)使所述不溶性目标蛋白质与溶解的所述不溶性宿主细胞部分相分离， 其中在步骤b)中，所述目标蛋白质保持不溶，并且其中至少80%的所述不溶性宿主细胞部分被溶解。2.根据权利要求I所述的方法，其中所述宿主细胞为细菌、酵母、植物或昆虫宿主细胞。3.根据权利要求I或2所述的方法，其中分离的所述不溶性目标蛋白质的纯度为至少80%、优选至少90%，以及更优选至少95%。4.根据权利要求I至3中任一项所述的方法，其中所述碱为金属氢氧化物和/或氨。5.根据权利要求4所述的方法,其中所述金属氢氧化物选自氢氧化钠(NaOH)、氢氧化钾(KOH)和氢氧化钙(CaOH)，或其组合。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述碱为氢氧化钠(NaOH)。7.根据权利要求I至6中任一项所述的方法，其中步骤(b)中所述碱的最终浓度为O.005M至1M、优选O. OlM至O. 6M、更优选O. 02M至O. 2M,以及最优选O. 04M至O. 06M。8.根据权利要求I至7中任一项所述的方法，其中所述方法还包括(i)在步骤b)之前、( )在步骤b)中和/或(iii)在步骤b)之后加入至少一种试剂。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述试剂选自变性剂、亲液剂和去污剂，或其组入口 ο10.根据权利要求9所述的方法，其中 (i)所述变性剂为尿素(CH4N2O)或盐酸胍(CH5N3HCl)， (ii)所述亲液剂为磷酸盐或硫酸盐，或者 (iii)所述去污剂为吐温20、TritonX-100、SDS或j。11.根据权利要求10所述的方法，其中 (i)尿素的最终浓度为O.IM至10M，优选IM至5M，或者 (ii)盐酸胍的最终浓度为O.OlM至3M，优选O. IM至2M。12.根据权利要求I至11中任一项所述的方法，其中步骤c)中所述不溶性目标蛋白质与所述溶解的不溶性宿主细胞部分的所述分离通过离心、沉降和/或过滤来实现。13.根据权利要求I至12中任一项所述的方法，其中所述方法在步骤b)之后和步骤c)之前还包括使所述悬液均化的步骤b’)。14.根据权利要求I至13中任一项所述的方法，其中所述方法在步骤c)之后还包括步骤d)，其中用水溶液、有机溶液和/或尿素洗涤分离的所述不溶性目标蛋白质，优选离心物、沉降物或截留物。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述有机溶液包含乙醇(EtOH)、甲醇(CH3OH)、己烷(C6H14)、乙醚(C4H10O)和/或异丙醇(C3H8O)。16.根据权利要求I至15中任一项所述的方法，其中在步骤b)中加入包含至少一种碱的水溶液之后，在15°C至25°C的温度下，经10分钟至40分钟的时间，所述目标蛋白质的至少90%、优选至少95%保持不溶。17.根据权利要求I至16中任一项所述的方法，其中所述不溶性目标蛋白质形成包含至少85%所述目标蛋白质的蛋白质聚集物。18.根据权利要求I至17中任一项所述的方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：马丁·施密特，阿克塞尔·莱默尔，林·勒默尔，
申请(专利权)人：安西尔克公司，
类型：
国别省市：
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