本发明专利技术公开了一种长链二元酸生产菌株——热带假丝酵母(Candida?tropicalis)CATN145，其保藏号为CCTCC?M?2011192。本发明专利技术还公开了所述菌株的应用以及一种利用所述菌株生产二元酸的方法。本发明专利技术的热带假丝酵母(Candida?tropicalis)CAT?N145，对于不同碳链长度的正烷烃、脂肪酸、脂肪酸衍生物或它们的混合物都具有很高的转化性能，而且杂酸含量低，适用性非常广泛，从而可以大大简化发酵过程控制，易于提取纯化，具有非常好的市场应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物领域，具体地说，是关于ー种长链ニ元酸生产菌株热带假丝酵母(Candida tropicalis)CAT N145及其用于发酵生产长链ニ元酸的应用。
技术介绍
长链ニ元酸是合成香料、尼龙工程塑料、热熔胶、树脂、耐寒性增塑剂、医药和农药等的重要原料。特别是十二碳ニ元酸(DC12)和十四碳ニ元酸(DC14),它们分别是合成具有特殊性能和广泛用途的高级尼龙工程塑料尼龙1212和尼龙1414等的重要原料。十二碳以上的长链ニ元酸，自然界中不存在，目前化工上也没有经济可行的合成方法，因此，利用微生物的特异性转化能力，在常温常压下转化正烷烃或脂肪酸生成相应的长链ニ元酸，是目前业内研究的重点。目前，用于转化正烷烃或脂肪酸生成相应长链ニ元酸的微生物主要是热带假丝酵母(Candida tropicalis),虽然转化生产ニ元酸的能力各有千秋,但没有关于ー株菌种对不同碳链都具有较强转化能力的报道，例如申请号为97103876. 7的中国专利技术专利申请，公开了ー种热带假丝酵母(Candidatropicalis),可用于同步发酵正十三烧生产相应的i^一烧1,11- ニ羧酸；申请号为02100215. 0的中国专利技术专利申请中，公开的热带假丝酵母(Candidatropicalis)可用于同步发酵正十四烧生产十二烧1,12- ニ羧酸；申请号为02145431.0的中国专利技术专利申请中，公开了ー种热带假丝酵母(Candida tropicalis),可用于生产a、w-正长链十四碳ニ元酸；申请号03105127. 8的中国专利技术专利申请中，公开了ー种热带假丝酵母(Candidatropicalis)，可用于同步发酵正十四烷生产十四碳ニ元酸；申请号200610127968. 6的中国专利技术专利申请中，公开了 ー种热带假丝酵母(Candida tropicalis),可用于生产十二碳ニ元酸；申请号89102548. 0的中国专利技术专利申请中，公开了ー种热带假丝酵母(Candidatropicalis),可用于发酵正烧烃生产十七碳ニ羧酸；申请号94100594. I的中国专利技术专利申请中，公开了ー种热带假丝酵母(Candidatropicalis)，可用于发酵正烷烃生产十五碳ニ羧酸；申请号95117436. 3的中国专利技术专利申请中，公开了ー种热带假丝酵母(Candidatropicalis),可用于同步发酵生产十二碳ニ羧酸。
技术实现思路
本申请的专利技术人通过以现有长链ニ元酸生产菌株NP-6-5为出发菌株，通过常规诱变方法进行诱变育种后，筛选得到了一株新的热带假丝酵母(Candida tropicalis)CATN145，其能够将不同长度的正烷烃、脂肪酸、脂肪酸衍生物或它们的混合物高效转化为相应的ニ元酸。因此，本专利技术的ー个方面，提供了一种长链ニ元酸生产菌株——热带假丝酵母(Candida tropicalis)CAT N145,其对于不同碳链长度的ニ元酸具有广泛的适用性。本专利技术的热带假丝酵母(Candida tropicalis)CAT N145，其保藏号为CCTCCM2011192。与热带假丝酵母ATCC 20336的CYP52A18基因相比，以其ATG起始密码子开始计算，本专利技术的热带假丝酵母(Candida tropicalis) CAT N145,其pox4基因的325位、901位和1886位碱基为A，其fao基因的539位碱基为G，其CYP52A18基因在170位和813位的碱基分别为的T和C。根据本专利技术，所述pox4基因的序列如SEQ ID NO 2所示，所述fao基因的序列如SEQ ID NO 4所示，所述CYP52A18基因的序列如SEQ ID NO 6所示。 根据本专利技术，所述长链ニ元酸包括C9 18的长链ニ元酸。本专利技术的另ー个方面，提供了所述菌株CAT N145用于转化正烷烃、脂肪酸、脂肪酸衍生物或它们的混合物生产相应的ニ元酸的应用。本专利技术的第三个方面，提供了一种长链ニ元酸的生产方法。根据本专利技术，所述长链ニ元酸的生产方法是通过发酵菌株CAT N145转化C9 18正烷烃、脂肪酸、脂肪酸衍生物或它们的混合物生成相应的长链ニ元酸。根据本专利技术的优选实施例，所述菌株CAT N145的发酵培养基如下玉米浆I 5g/L,酵母膏 I 5g/L, KH2PO4 4 12g/L, NaCl 0 3g/L, KNO3 4 12g/L，蔗糖10 40g/L，尿素0. 5 3g/L，正烷烃、脂肪酸、脂肪酸衍生物或它们的混合物400 300mL/L, pH 至 7. 5 7. 6。优选的，其发酵过程描述如下取甘油管种子接入种子培养基，在28 31°C培养，摇床转速200 250rpm，当种子液的0D620达到0. 8以上(水稀释30倍)时，将种子液接种到装有发酵培养基的摇瓶中，在28 31°C培养，摇床转速200 250rpm，发酵周期90 120hours。本专利技术中，培养基中加入的正烷烃、脂肪酸、脂肪酸衍生物或它们的混合物的碳链长度需要与所需生产的ニ元酸的碳链长度相对应。本专利技术的第四个方面，提供了ー种来源于热带假丝酵母(Candida tropicalis)CATN145的pox4基因，其序列如SEQ ID NO 2所示。本专利技术的第五个方面,提供了ー种来源于热带假丝酵母(Candida tropicalis)CATN145的fao基因，其序列如SEQ ID NO 4所示。本专利技术的第六个方面,提供了ー种来源于热带假丝酵母(Candida tropicalis)CATN145的CYP52A18基因，其序列如SEQ ID NO 6所示。本专利技术的长链ニ元酸生产菌株-热带假丝酵母(Candida tropicalis)CATN145，对于不同碳链长度的正烷烃、脂肪酸、脂肪酸衍生物或它们的混合物都具有很高的转化性能，适用性非常广泛，具有非常好的市场应用前景。附图说明图I为本专利技术的菌株CAT N145的pox4基因与热带假丝酵母ATCC 20336的pox4基因的序列比对示意图，其中P0X4为ATCC 20336的pox4基因，P0X4-1为本专利技术的菌株CATN145的pox4基因。图2为本专利技术的菌株CAT N145的fao基因与热带假丝酵母ATCC 20336的fao基因的序列比对示意图，其中，faol为ATCC 20336的faol基因，fao为本专利技术的菌株CATN145的faol基因。图3为本专利技术的菌株CAT N145的CYP52A18基因与热带假丝酵母ATCC 20336的CYP52A18基因的序列比对示意图，其中，CYP52A18为ATCC 20336的CYP52A18基因，CYP18为本专利技术的菌株CATN145的CYP52A18基因。具体实施例方式以下结合具体实施例，对本专利技术做进ー步详细说明。应理解，以下实施例仅用于说明本专利技术而非用于限定本专利技术的范围。本专利技术的热带假丝酵母(Candida tropicalis)CAT N145已于2011年6月9日提交位于武汉大学的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为CCTCC M 2011192。以下实施例中所使用的培养基如下I、活化培养基/甘油罐培养基YPD培养基配方(w/v本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种长链二元酸生产菌株CAT？N145，其特征在于，所述菌株为热带假丝酵母(Candida？tropicalis)，其保藏号为CCTCC？M？2011192。
【技术特征摘要】
1.一种长链ニ元酸生产菌株CAT N145，其特征在于，所述菌株为热带假丝酵母(Candida tropicalis)，其保藏号为 CCTCC M 2011192。2.根据权利要求I所述的菌株CATN145，其特征在于，与热带假丝酵母ATCC20336的pox4基因相比，以其ATG起始密码子开始计算，本菌株的pox4基因在325位、901位和1886位碱基为A。3.根据权利要求2所述的菌株CATN145，其特征在于，所述pox4基因的序列如SEQ IDNO 2所示。4.根据权利要求I所述的菌株CATN145，其特征在于，与热带假丝酵母ATCC20336的faol基因相比，以其ATG起始密码子开始计算，本菌株的fao基因在539位碱基为G。5.根据权利要求4所述的菌株CATN145，其特征在于，所述fao基因的序列如SEQIDNO -A所示。6.根据权利要求I所述的菌株CATN145，其特征在于，与热带假丝酵母ATCC20336的CYP52A18基因相比，以其ATG起始密码子开始计算，本菌株的CYP52A18基因在170位的碱基为T，813位的碱基为C。7.根据权利要求6所述的菌株CATN145，其特征在于，所述CYP52A18基因的序列如SEQ ID NO 6 所示。8.根据权利要求I所述的菌株CATN145，其特征在于，所述长链ニ元酸包括9 18碳ニ元酸。9.权利要求I 8中任一项所述的菌株CATN145用于生产长链ニ元酸的应用，其特征在于，用于发酵转化的原料为正烷烃、脂肪酸、脂肪酸衍生物或它们的混合物，生产相应的长链ニ元酸。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述长链ニ元酸包括9 18碳ニ元酸。11.一种长链ニ元酸的生产方法，其特征在于，通过发酵热带假丝酵母(Candidatropicalis)CAT N145转化正烷烃、脂肪酸、脂肪酸衍生物或它们的混合物生成相应的长链ニ元酸。12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述长链ニ元酸包括9 18碳ニ元酸。13.根据权利要求11或12所述的方法，其特征在于，所述菌株CATN145的发酵培养基如下 玉米浆 I 5g/L，酵母膏 I 5g/L, KH2PO4 4 12g/L，NaCl 0 3g/L，KN03 4 12g/L，蔗糖10 40g...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘驰，李乃强，廖锦绣，刘文山，汪江林，
申请(专利权)人：上海凯赛生物技术研发中心有限公司，上海凯赛生物科技有限公司，山东凯赛生物科技材料有限公司，
类型：发明
国别省市：
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