【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物领域，具体而言，涉及一株产丁二酸的菌株及其生产丁二酸的方法和应用。
技术介绍
丁二酸(又名琥珀酸)，是一种常见的天然有机酸，广泛存在于人体、动物、植物和微生物中。丁二酸作为一种重要的化工原料，在医药、食品以及表面活性剂等行业有着广泛的用途。近年来，随着化石资源的日益枯竭和环境问题的日益严重，采用生物合成法代替传统的化学合成法制备丁二酸备受瞩目，美国能源部将丁二酸列为未来12种最有价值的生物炼制产品之一。 生物合成丁二酸，是利用细菌，真菌等各种微生物，以葡萄糖或其他各种水解液为碳源，经微生物发酵生产丁二酸。利用微生物发酵法转化可再生资源(葡萄糖、木糖等)，由于原料来源广泛且价格低廉，污染小，环境友好，且在发酵过程中可以吸收固定CO2，能有效缓解温室效应，故成为近年来研究的热点。发酵菌株是丁二酸生物合成的关键点之一，但大部分菌株只能产生较低浓度的丁二酸。提高丁二酸的发酵产酸能力有很多的方法，然而迄今为止，在纯厌氧条件下，高效利用葡萄糖为单一性碳源并高产丁二酸的菌株却鲜有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株能够在纯厌氧条件下，高效利用葡萄糖为单一性碳源并高产丁二酸的菌株，以及其产生丁二酸的方法和应用。为了实现本专利技术的技术目的，本专利技术提供了一株产丁二酸的菌株，其分类命名为大肠埃希氏菌co7i) BER208，其保藏编号为CCTCC Ν0:Μ 2012351。本专利技术还提供了一种生产丁二酸的方法，包括如下步骤发酵上述提及的大肠埃 MiEscherichia coli) BER208 CCTCC Ν0:Μ 2012351，得...
【技术保护点】
一株产丁二酸的菌株，其分类命名为大肠埃希氏菌（Escherichia？coli）BER208，其保藏编号为：CCTCC？NO:M？2012351。
【技术特征摘要】
书中所详细描述的本发明。实施例I 本实施例说明将大肠埃希氏菌coli) BER108 (CCTCC M 2012068)进行第一步连续培养驯化的方法。 大肠杆菌原始菌株进行第一步连续 培养驯化的方法如下 将冻存管中的大肠埃希氏菌co7i)BER108 (CCTCC M 2012068)作为出发菌株，在装液量为IOmL种子培养基中的25mL血清瓶中培养，37°C，200r/min培养12h得到对数生长期的菌液；将对数生长期的菌液以10% (v/v)的接种量接种到装有300mL发酵培养基的500mL连续培养装置中，37°C水浴加热，通入过滤除菌的CO2维持厌氧环境，并以1.5mL/h的速率向培养装置中流加新鲜的发酵培养基。定时取样检测培养装置中菌体的密度，当反应器中菌体密度达到0D_=2 3，并保持48h无较大变化，说明表示菌体在该流加速度下生长稳定，此时驯化过程完成一个循环。将新鲜发酵培养基的流加速度加倍，进行下一个循环的连续培养。直至发酵培养基的流加速度达到12mL/h，菌体生长性能在该条件下维持稳定，准备实施例2的筛选步骤。 其中，所述的种子培养基的配方为蛋白胨IOg/L,酵母粉 5g/L, NaCl 5g/L,葡萄糖 10_20g/L。所述发酵培养基的配方为梓檬酸3 g · ΙΛ Na2HPO4 · 12H20 4 g · Λ KH2PO4 8g.L-1，(NH4)2HPO4 8 g·!/1，NH4Cl 0.2 g · Λ (NH4)2SO4 0. 75 g · Λ MgSO4 · 7H20 I g · ΛCaCl2 · 2H20 10. 0 mg · Λ ZnSO4 · 7H20 0. 5 mg · Λ CuCl2 · 2H20 0. 25 mg · Λ MnSO4 · H2O2.5 mg · ΙΛ CoCl2 · 6H20 I. 75 mg · Λ H3BO3 0. 12 mg · Λ Al2(S04 )3 I. 77 mg · ΛNa2MoO4 · 2H20 0. 5 mg .171,朽1 檬酸铁 16. I mg .171,碱式碳酸镁 24_42g/L,葡萄糖 30_40g/ L0实施例2 本实施例说明筛选得到优良大肠埃希氏菌co7i)BER208的方法。筛选步骤 I、固体平板初筛 在无菌操作条件下，从连续培养装置中取出2-4mL菌液，用无菌水稀释I X IO4倍，取100 μ L涂布在固体平板上，37°C厌氧培养24h，挑选出挑选生长速度快，较为饱满的菌落。2、固体平板复筛 将筛选到的菌株在平板上反复转点培养，最终得到了菌株BER10806、BER208，BER10811和BER10814显示了较强的生长速率和生长稳定性。3、摇瓶发酵筛选 将菌株BER108、BER10806、BER208、BER10811和BER10814接入种子培养基中扩大培养，充二氧化碳2min，37°C，200r/min，培养12h。然后接种到发酵培养基中，IOOmL厌氧血清瓶装液量 30mL，接种量 2% (v/v),充二氧化碳 2min，37°C，200r/min,培养 48h。其中，所使用的培养基配方如下 固体平板培养基柠檬酸 3 g .IANa2HPO4.12H20 4 g · L—1，KH2PO4 8 g Γ1, (NH4)2HPO48 g· IANH4Cl O. 2 g.L-1，(NH4)2SO4 O. 75 g · Λ MgSO4 · 7H20 I g · L-1，CaCl2 · 2Η20 10. 0mg · ΙΛ ZnSO4 · 7H20 0. 5 mg · Λ CuCl2 · 2H20 0. 25 mg · Λ MnSO4 · H2O 2. 5 mg · ΛCoCl2 ·6Η20 I. 75 mg ·ΙΛΗ3Β03 0· 12 mg · Λ Al2 (S04 )3 I. 77 mg · Λ Na2MoO4 · 2H20 0.5mg · I71，朽1 檬酸铁 16. I mg · I71,琼脂 15_20g/L,葡萄糖 10_15g/L。种子培养基蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaCl 5g/L，葡萄糖10_20g/L。发酵培养基:柠檬酸3 g · I/1，Na2HPO4...
【专利技术属性】
技术研发人员：姜岷，万青，张常青，梁丽亚，陈旭，苟冬梅，刘嵘明，马江锋，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：
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